UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA LA

MOLINA

DEPARTAMENTO ACADEMICO DE QUIMICA

CURSO: QUIMICA ANALITICA – LABORATORIO
INFORME DE PRÁCTICA #9
TITULO: ESPECTROSCOPIA DE ABSORCION MOLECULAR UV-VIS (DETERMINACION DE
ABSORTIVIDAD MOLAR Y LONGITUD DE ONDA DE MAXIMA ABSORBANCIA)

INTEGRANTES:

ALUMNOS CODIGOS
Cornejo Rodríguez, Cristian 20161435
Ureta Atoche, Edmundo 20161462
Ramos Quispe, Dina 20151452
Kohayagawa Martínez, Estefanía 20150443

● Horario de práctica: Lunes de 11:00 a 1:00 pm

● Profesora de laboratorio: Alegría Arnedo, María Cecilia
● Fecha de práctica: 11-06-18

LA MOLINA─LIMA─PERU
 1. INTRODUCCIÓN:
La Espectrofotometría es una de las técnicas experimentales más utilizadas para la detección
específica de moléculas. Se caracteriza por su precisión, sensibilidad y su aplicabilidad a moléculas
de distinta naturaleza (contaminantes, biomoléculas, etc) y estado de agregación (sólido, líquido,
gas). Los fundamentos físico-químicos de la espectrofotometría son relativamente sencillos. Las
moléculas pueden absorber energía luminosa y almacenarla en forma de energía interna. Esto
permite que se inicien ciclos vitales de muchos organismos, entre ellos el de la fotosíntesis en
plantas y bacterias. La Mecánica Cuántica nos dice que la luz está compuesta de fotones cada uno
de los cuáles tiene una energía:

E (fotón) = h.ν = h(c/λ)

Donde c es la velocidad de la luz, ν es su frecuencia, λ su longitud de onda y h= 6.6 10-34J⋅ s es la
constante de Planck.

Cuando decimos que una sustancia química absorbe luz de longitud de onda λ, esto significa que
las moléculas de esa sustancia absorben fotones de esa longitud de onda.

De esta manera la molécula almacena la energía del fotón:

A + h.ν → A* E(A*) = E(A) + E (fotón)

Como la energía se conserva, la diferencia de energía entre el estado fundamental de la molécula

(A) y su estado excitado (A*) debe ser exactamente igual a la energía del fotón. Es decir, una
molécula sólo puede absorber fotones cuya energía hν sea igual a la energía de un estado
molecular excitado. Cada molécula tiene una serie de estados excitados discretos (o bandas) que
dependen de su estructura electrónica y que la distinguen del resto de moléculas. Como
consecuencia, el espectro de absorción, es decir, la luz absorbida en función de la longitud de
onda, constituye una verdadera señal de identidad de cada sustancia o molécula.

(rayleigh, 2007)

 JUSTIFICACIÓN
Las técnicas espectroscópicas se basan en los fenómenos de absorción y emisión de energía que
tienen lugar en la interacción entre la radiación electromagnética y la materia.

Se trata de un conjunto de técnicas que abarcan conjuntamente un amplio campo de aplicaciones,

además de ser fácilmente automatizables y que ofrecen una relativamente alta rapidez de
operación.
El instrumento utilizado en la espectrometría ultravioleta-visible se llama espectrofotómetro UV-
Vis. Mide la intensidad de luz que pasa a través de una muestra (I), y la compara con la intensidad
de luz antes de pasar a través de la muestra (Io). La relación I / Io se llama transmitancia, y se
expresa habitualmente como un porcentaje (%T). La absorbancia (A) se basa en la transmisión:A =
- log (%T)

(Bermejo, 2010)

 OBJETIVOS

 Determinar la obsortividad molar y longitud de máxima absorbancia de un cromófobo a

partir de un espectro de absorción.
 Construir una curva de titulación.
 Determinar el coeficiente de regresión o correlación.

 HIPÓTESIS

 La obsortividad molar y la longitud de onda de máxima absorbancia depende de cada

sustancia y varía con la longitud de onda.
 La absorbancia varía en forma directamente proporcional con la concentración de la
sustancia absorbente a una determinada longitud de onda.

2. MATERIALES Y MÉTODOS:

 Materiales/reactivos/equipos.
Un laboratorio de química con suministros de energía, agua, desagüe, materiales y equipos de
laboratorio.

-Pipetas volumétricas de 5 y 10 ml
-Pipetas graduadas de 10 ml
-Matraz volumétrico o fiolas de 25, 50 y 100mL Vaso de precipitados de 100mL
-1 piceta con agua destilada.
-Disolución estandarizada de KMnO4 0.002M
-Disolución estandarizada de K2Cr2O7 0.003M
-Solución de cafeína u otro alcaloide indicado por el profesor
-Solución de complejo hierro-ortofenantrolina
-Muestras con diferentes colores De los equipos:
-Espectrofotómetro UV-VIS
-Cubetas de plástico
  Metodología

2.1 Indicar los colores observados y absorbidos por sustancias coloreadas

- Observar el color de cada una de las soluciones en los tunos de prueba y completar el
cuadro la tabla I.

2.2 Elaborar del espectro de absorción

- Preparar una solución de concentración que cumpla con la ley de Lambert y Beer y
completar tabla 2.

2.3 Construcción de una curva de calibración

- Construir la curva de calibración y completar tabla 3.

3. RESULTADOS Y DISCUSIONES

ESPECTROS DE ABSORCION:
ABSORVANCIA VS LONGITUD DE ONDA

ABSORTIVIDA
SUSTANCIA SUSTANCIA SUSTANCIA 3 D
1 2 MOLAR
(L mol-1 cm-1)

Longitud Absorvancia Absorvancia Absorvancia Absortividad Absrt. Absrt.

de onda (A2) (A4) (A6) A2 A4 A6
(𝝀)

500 0.043 0.116 0.152 14.3333 38.6667 50.667

505 0.049 0.129 0.181 16.3333 43 60.333
510 0.052 0.133 0.192 17.3333 44.3333 64
515 0.051 0.132 0.192 17 44 64
520 0.058 0.145 0.219 19.3333 48.3333 73
525 0.066 0.158 0.249 22 52.6667 83
530 0.064 0.154 0.243 21.3333 51.3333 81
535 0.058 0.142 0.219 19.3333 47.3333 73
540 0.059 0.144 0.223 19.6667 48 74.334
545 0.064 0.152 0.242 21.3333 50.6667 80.667
550 0.05 0.143 0.223 19.3333 47.6667 74.333
 Tabla 3: Curva de calibración
Datos para la curva de calibración
sustancia K2Cr2O7
Longitud de onda máx. 525 nm
A2= 22 A4=52.667
Absortividad máx. (L/Cm.mol) A6=83
Longitud del lado/ diámetro de la cubeta 1cm

Concentración Blanco M1 M2 M3 M4 M5 M6

Sol. Madre 0 0.5 1 2 3 4 5

H2SO4 10 9.5 9 8 7 6 5

A 0 0.010 0.065 0.044 0.157 0.216 0.248

CONCENTRACIONES 0 0.00001 0.00002 0.00004 0.00006 0.00008 0.0001
(Mol/L)
 4. DISCUSIONES

En la gráfica de espectro de absorción se puede ver que, en el rango establecido de longitud de

onda (500 a 550 nm), la muestra estudiada presenta una gran absortibidad en la longitud más
pequeña. A medida que se van aumentando las longitudes esta va disminuyendo para luego tener
una segunda elevación al ser el λ =525 nm. Después de ello se aprecia la caída progresiva de la
curva. Con esta observación podemos decir que convendría trabajar la muestra en bandas de luz
UV al tener mejor absortibidad que en el espectro de luz visible (rango establecido).
Con respecto a la curva estándar no se pudo encontrar la razón por la que hubo un descenso
notable en la absortividad a pesar de repetir la prueba con la misma concentración. Según
Bermejo una causa por la que disminuiría la capacidad de absorción seria por la influencia de la
concentración en el índice de refracción de la disolución analizada. Hay que recordar que la
concentración molar fue baja por lo que no debería considerase como culpable de las
desviaciones. Podríamos entonces suponer que se trató de algún error al preparar las muestras o
en última instancia algún fallo en espectrofotómetro.

5. CONCLUSIONES

 Se logró examinar y operar el equipo espectrofotométrico. Se pudo conocer más acerca de

su funcionamiento ya que es un instrumento usado en el análisis químico puesto que sirve
para medir, en función de la longitud de onda, la absorbancia y la transmitancia.
 Se conocio varios métodos para determinar la concentración por espectrofotometría,
mediante la aplicación Ley de Beer que establece que la absorbancia de una muestra a
determinada longitud de onda depende de las propiedades del material atravesado, de la
absortividad y de la concentración de dicha muestra donde la radiación electromagnética
incide.

6. RECOMENDACIONES

 Saber calibrar y manejar el equipo espectroscópico.

 Considerar las buenas prácticas de laboratorio para el uso de la actividad.
 Ser exactos y eficientes al momento de añadir los reactivos a los tubos de ensayos para
obtener datos precisos y de esa manera hallar la curva de calibración.

7. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

- (rayleigh, 2007)
- (Bermejo, 2010)

8. CUESTIONARIO:

1. ¿Cuál es el propósito e hipótesis de la práctica #9?

Propósito:

 Calcular la absortividad molar y longitud de máxima absorbancia de un cromófono a partir

de un espectro de absorción.
 Construir la curva de calibración.
Hipótesis:

 La absortividad molar y la longitud de onda de máxima absorbancia depende de cada

sustancia.
 La absorbancia varía en forma directamente proporcional con la concentración de la
sustancia absorbente a una determinada longitud de onda.

2. ¿Cree usted que ha logrado esa competencia?

Considerando el protocolo de cada actividad, el equipo de espectroscopia y dichos reactivos que

se emplearon, se logró determinar los datos para cada unidad correspondida y de esa manera
construir la curva de calibración.

3. Explique la espectroscopia de absorción molecular UV-VIS. Aplicaciones

La espectroscopia UV-VISIBLE se basa en la absorción de radiación UV-VISIBLE por un analito. Se

origina un estado excitado y luego elimina su exceso de energía en forma de calor.

4. ¿Qué son los colores complementarios?

Son dos colores que al ser mezclados en una proporción determinada, el resultado de la mezcla es
un color neutral (gris, blanco y negro). Los colores complementarios indican la porción del
espectro que es absorbida.

5. Explique la Ley de Lambert y la Ley de Beer. Defina transmitancia y absorbancia y ¿Cuál

es la relación entre ellos?

 Ley de Lambert: Se da la relación entre la absorción de la radiación y espesor del medio

absorbante.

 Ley de Beer: Se da la relación entre la concentración de la especie absorbante y la

radiación absorbida. La ley de Beer considera :
- La radiación es monocromática.
- Los centros absorbantes son independientes.
- La sección transversal entre la radiación y la materia es la absorción.
- El único mecanismo entre la radiación y la materia es la absorción.

Transmitancia: Se define como la fracción de luz incidente a una longitud de onda especificada que
pasa a través de una muestra.

Absorbancia: Es la cantidad de intensidad de luz que absorbe la muestra. Se define como la

intensidad después de haber habido la absorción y la intensidad de la luz que se hace incidir sobre
la muestra.
 6. A que se refiere la naturaleza dual de la radiación electromagnética. ¿Cuáles son las
regiones de le espectro electromagnético? ¿Cuáles la ecuación que relaciona la
velocidad de la luz con la frecuencia de la radiación? ¿Cuál es la ecuación de Planck?

Se refiere a que posee un comportamiento corpuscular y ondulatorio. Corpuscular, es decir como

partícula, pues la energía se transmite como paquete de energía llamado fotones. Ondulatorio,
porque la forma en la que se mueven y oscilan en todas las direcciones es en ondas.

Regiones del espectro:

Ecuación de Planck:
Ecuación que relaciona la velocidad de la luz con la frecuencia:

7. Dibuje los componentes generales de un espectrofotómetro de absorción molecular.

Indique cual es la función de cada uno.
  Espectrómetro:

Produce un rango deseado de longitud de onda de luz. Primero un colimador (lente) transmite un
haz recto de luz (fotones) que pasa a través de un monocromador (prisma) para dividirlo en varias
componentes de longitudes de onda (espectro). Entonces un selector de longitud de onda
(ranura) transmite sólo las longitudes de onda deseadas.

 Fotómetro:

Después de que el rango deseado de longitud de onda de luz pasa a través de la solución muestra
en la cubeta, el fotómetro detecta la cantidad de fotones que se absorbe y luego envía una señal a
un galvanómetro o una pantalla digital.

 Fuente de luz:

La fuente de luz que ilumina la muestra debe cumplir con las siguientes condiciones: estabilidad,
direccionabilidad, distribución de energía espectral continua y larga vida.

 Monocromador:

El monocromador aísla las radiaciones de longitud de onda deseada que inciden o se reflejan
desde el conjunto, se usa para obtener luz monocromática.
Está constituido por las rendijas de entrada y salida, colimadores y el elemento de dispersión. El
colimador se ubica entre la rendija de entrada y salida. Es un lente que lleva el haz de luz que
entra con una determinada longitud de onda hacia un prisma el cual separa todas las longitudes
de onda de ese haz y la longitud deseada se dirige hacia otra lente que direcciona ese haz hacia la
rendija de salida.

 Detector:

El detector es el encargado de captar la radiación y, a su vez, dejarla en evidencia para su estudio

posterior. Existen dos tipos:

a) los que responden a fotones

b) los que responden al calor

 Fotodetectores:
En los instrumentos modernos se encuentra una serie de 16 fotodetectores para percibir la señal
en forma simultánea en 16 longitudes de onda, cubriendo el espectro visible. Esto reduce el
tiempo de medida, y minimiza las partes móviles del equipo.

 Celdas:
Son los recipientes donde se depositan las muestras líquidas a analizar. El material del cual están
hechas varía de acuerdo a la región que se esté trabajando; son de vidrio o plástico si se trabaja en
la región visible, de cuarzo si se trabaja en la ultravioleta y de NaCl si se trabaja la región de
infrarrojo.

8. ¿Qué es un espectro de absorción; como se construye y que información permite

obtener? Dibuje y explique.

El espectro de absorción de una materia muestra la fracción de la radiación

electromagnética incidente que un material absorbe dentro de un rango de frecuencias. Es, en
cierto sentido, el opuesto de un espectro de emisión. Cada elemento químico posee líneas de
absorción en algunas longitudes de onda, hecho que está asociado a las diferencias de energía de
sus distintos orbitales atómicos. De hecho, se emplea el espectro de absorción para identificar los
elementos componentes de algunas muestras, como líquidos y gases; más allá, se puede emplear
para determinar la estructura de compuestos orgánicos. Un ejemplo de las implicaciones de un
espectro de absorción es que aquel objeto que lo haga con los colores azul, verde y amarillo
aparecerá de color rojo cuando incida sobre la luz blanca. Cuando incide una luz a un metal al
superar su energía umbral saca un electrón, si la energía es superior la energía que sobra se
convierte en energía cinética.

9. ¿Qué es una curva de calibración y como se construye? ¿Como demuestra si la relación

es lineal o cumple con la ley de Lambert y Beer?
Una curva de calibración es la representación gráfica de una señal que se mide en función de la
concentración de un analito. La calibración incluye la selección de un modelo para estimar los
parámetros que permitan determinar la linealidad de esa curva. Y, en consecuencia, la capacidad
de un método analítico para obtener resultados que sean directamente proporcionales a la
concentración de un compuesto en una muestra, dentro de un determinado intervalo de trabajo.

La curva de calibrado se construye midiendo la señal analítica en cada uno de los patrones
previamente elaborados. En el eje de ordenadas se asigna el valor de la señal medida y en el eje de
abscisas la concentración del patrón. De esta forma podemos señalar puntos en la gráfica según
las coordenadas (concentración (x), señal (y)).

A estos puntos podemos aplicar la regresión lineal, generalmente mediante el ajuste por mínimos
cuadrados, para obtener la recta que los relaciona y su función.