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Fraccionamiento subcelular
Alumnos:
Sofía Oporto
Escalona.
Tomás Vidal Vásquez.
Sección:
702
Profesores:
Felipe Campos E.
Eric Herdocio C.
Introducción
Las células son las unidades orgánicas y básicas fundamentales de todo ser vivo. Su nombre
se lo denomino Robert Hooke el cual observo con un microscopio un trozo de corcho, en el
cual vio una especie de celdillas en forma de panal de abeja a la cual le denomino célula. Es
la unidad vital de los seres vivos al igual que es la porción mas pequeña de estos, toda célula
proviene de una célula preexistente, es al igual la unidad funcionas y estructural. “los tipos
de células se dividen en dos grandes grupos según su estructura, de las cuales pueden ser
células eucariotas o también llamadas eucariontes y células procariotas o procariontes”1, La
célula eucariota es un tipo de célula que se caracteriza por tener material genético el cual es
organizado en cromosomas y encerrado en un núcleo envuelto por una doble membrana,
existen dos tipos de células eucariontes que son, la eucarionte vegetal y la eucarionte animal.
Las células eucariontes animal “son unidades morfológicas y funcionales pequeñas, son todas
las células que si dotación genética esta contenida en un núcleo diferenciado”2. Las células
eucariontes vegetales son similares a las eucariontes animal con la diferencia que estas
contienen no centriolos, contienen cloroplastos, pared celular y una gran vacuola. Algunos
organelos de estas células son, el núcleo que es el cual almacena la mayor parte del genoma
humano, actúa comandando las acciones las cuales debe realizar la célula. La mitocondria es
un organelo que es capaz de transformar el alimento en energía la cual será utilizada por la
célula, además tiene su propio material genético. Los cloroplastos se encuentran en plantas y
algas, no en animales ni hongo, “es mas compleja que le mitocondria esta formado por
numerosos sacos los cuales se llaman estromas que juntos forman la grana, en ellos ocurre la
fotosíntesis”3. El retículo endoplasmático es un sistema de membrana en forma de sacos
aplanados y túbulos interconectados, los cuales se encargan de procesar determinadas
moléculas para la célula, se encuentra el Retículo endoplasmático liso que es el encargado de
la síntesis de lípidos y el Retículo endoplasmático rugoso que es el encargado de la síntesis
de proteínas al cual se asocian ribosomas. Los ribosomas son orgánulos de pequeño tamaño
encargado de sintetizar proteínas, se encuentras adheridos al retículo endoplasmático rugoso
o flotando sobre el citosol. El aparato de Golgi son cisternas discoidales aplanadas, paralelas
y superpuestas, formadas por membranas lipoproteicas, es el encargado de la modificación,
empaquetamiento y destinación de macromoléculas. Los lisosomas son vesículas
membranosas encargadas de la digestión molecular. Los peroxisomas son al igual que los
lisosomas vesículas en las cuales se produce H2O2. El citoesqueleto el cual está formado por
filamentos de proteínas formados por microtúbulos, filamentos intermedios y filamentos de
actina los cuales le dan la forma y movimiento a la célula y la membrana plasmática que es
la envoltura externa de la célula, la cual esta compuesta por una bicapa de fosfolípidos.
Objetivos
1. Aprender cómo funciona la técnica de fraccionamiento subcelular.
2. Aprender a separar organelos mediante centrifugaciones.
3. Conocer nuevos métodos de tinción.
4. Aprender a separar sobrenadante del pellet de un homogenizado
Materiales y métodos
Actividad A.2.1.
Observaciones:
1) Se observan puntos azules más oscuros en mucha cantidad
El fraccionamiento celular es un método que nos permite separar distintos niveles sub
celulares de ciertas muestras, uno de los objetivos a llevar acabo era el aprender el
funcionamiento de esta técnica lo cual se logró gracias a los materiales entregados por
nuestros profesores y la práctica del contenido en cuestión, no obstante a la preparación
previa se obtuvieron algunos resultados diferentes a los esperados en este experimento , ya
que en las muestras HC , S1 y P2 al introducir los tubos en la centrifuga estos subieron de
temperatura activando en las muestras las enzimas proteasas y lipasas que rompen todos los
organelos de la fracción mitocondrial de la célula , por ello en estas tres muestras a diferencia
de los demás nos resultaron negativas , no así como con el fraccionamiento nuclear queda los
resultados si fueron los esperados ya que “el experimento se mantuvo a 4ºC paraqué no exista
degradación de las estructuras de la célula”4.Se puede apreciar si el resultado es negativo o
positivo gracias al azul de tripán que es un método de tinción que “ayuda a los estudios de
histología y citopatologicos “5 , esta tinción se deberá ver de color azul si es negativo , como
nos ocurrió a nosotros y verde si es positivo , en otras palabras si la muestra presenta
organelos “vivos”. La separación de organelos se logró centrifugando en diferentes ocasiones
y luego de con la ayuda de una micropipeta logramos la separación del pellet y del
homogenizado que se obtuvo en el paso anterior, este paso “se basa en el principio de dos
partículas de suspensión con masas y volúmenes diferentes quedando separadas en el fondo
del tubo “6 , diferenciando el pellet del homogenizado.
Conclusión