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I. OBJETIVO:
- Determinar l actividad enzimática de una amilasa extraída de trigo
germinado, usando almidón residual
- Determinar la actividad específica de la amilasa vegetal.
ALMIDON DE CEBADA:
El almidón es un polímero semicristalino de glucosa de gran abundancia en
la naturaleza. La cantidad de almidón contenido en el grano de cereal varia,
pero generalmente oscila entre el 60 y 75 % del peso del grano. El almidón
presente en los granos es el más importante de los carbohidratos para fines
industriales resultando preciso degradarlo enzimáticamente con una 1
gelatinización previa por acción de calor o sometiéndolo a un intenso
trabajo mecánico. El almidón consta de dos fracciones: amilosa y
amilopectina.
UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA | Laboratorio de Bioquímica General
DETERMINACION DE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA DE LA ALFA AMILASA VEGETAL
III. MATERIALES:
Equipos:
- Estufa
- Espectrofotómetro
Materiales y reactivo:
IV. PROCEDIMIENTO:
- Extracción de la amilasa:
1 2
ALMIDON
ALMIDON RESIDUAL
TUBOS (ml) INICIAL
I II III IV
SUSTRATO 1.0 1.0 1.0 1.0
Incubar: 30°C – 5 min.
EXTRACTO DE ENZIMA --- 0.1 0.2 0.3
Incubar: 30°C – 15 min.
ACIDO CLORHIDRICO 0.5N 1.0 1.0 1.0 1.0
Reposar: T. ambiente – 5 min.
AGUA DESTILADA 9.9 9.8 9.7 9.6
LUGOL 0.5 0.5 0.5 0.5
V. CALCULOS Y RESULTADOS:
- Determinación de la actividad enzimática:
ABSORVANCIA
N° TUBO
TRIGO CEBADA
I 0.872 0.063
II 0.526 1.197
III 1.860 1.587
IV 3.054 2.792
Concentración (mg/ml)
N° TUBO
TRIGO CEBADA
I 8.72 0.63
II 5.26 11.97
III 18.60 15.87
IV 30.54 27.92
Promedio 18.13 18.59
𝒖𝒏𝒊𝒅𝒂𝒅𝒆𝒔 𝒅𝒆 𝒆𝒏𝒛𝒊𝒎𝒂
𝑨𝑬 =
𝒎𝒈 𝒅𝒆 𝒑𝒓𝒐𝒕𝒆𝒊𝒏𝒂
ACTIVIDAD ENZIMATICA
N° TUBO
TRIGO CEBADA
I 0.06662844 0.06666667
II 0.066673 0.06666667
III 0.06666667 0.06666667
IV 0.06666667 0.06666547
Buffer: 10 ml
Cloruro de Calcio AGREGAR
Buffer: 10 ml
Cloruro de Calcio FILTRAR (Embudo + gasa)
AMILASA
VI. DISCUSION:
VII. CONCLUSIONES:
VIII. CUESTIONARIO:
CUESTIONARIO
1.- En la síntesis de arginina a partir de acido glutámico se observaron las
siguientes reacciones
1 2 3 4
Glu ------ N ac. Glu ------ Orn ------ Cit ------ Arg
Indica cuales son los sustratos y productos correspondientes para estas enzimas
mediante un cuadro.
2.-Por que se sometieron las raicillas del cereal a un proceso físico y químico en el
proceso de extracción?
RALLADO
FERMENTACION
SECADO SECADO
IX. BIBLIOGRAFIA:
Foster, N; Burchett, L and Paulsen, Bioquimica,Editorial Reverte,
Espana,G. 1998.
Benech-Arnold, R. and Sanchez,Biologia de las Plantas,Primera
Edicion,Editorial Bermejo . 2004.
Almonte.Carlos,Manual de Quimica Organica,Quinta Edicion, 2010.
Barabado.Oscar,Microbiologia Alimentaria,Tercera Edicion,2001.
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