Métodos histoquímicos para la detección de algunos metales pesados .

Seregin, I. V., y Kozhevnikova, A. D. (2011). Histochemical methods for detection of heavy

metals and strontium in the tissues of higher plants. Russian Journal of Plant
Physiology, 58(4), 721–727.

1. Reactivo: Ditizona; C13H12N4S (masa molar= 256.3); indicador metalocrómico para Cd y

Pb.

Iones que interfieren: Zn, Cu, Cr y Fe.

Protocolo de preparación y color del complejo/fluorescencia producido:

Se disuelve la ditizona (0.5 mg/ml), en una mezcla (3:1) de acetona : agua destilada;
para mejorar la sensibilidad de la reacción, se añaden 1 - 2 gotas de ácido acético a 6
ml de la solución. La solución se debe usar fresca (recién hecha).

El complejo de ditizona con Cd y Pb es rojo.

Artículo original:

Seregin, I. V. y Ivanov, V. B., Histochemical investigation of cadmium and lead

distribution in plants, Russ. J. Plant Physiol., 1997, vol. 44, pp. 791–796.

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2. Reactivo: Dimetilglioxima; C4H8N2O2 (masa molar= 116.1); indicador metalocrómico

para Ni.

Iones que interfieren: Cu, Co y Pd.

Protocolo de preparación y color del complejo/fluorescencia producido:

Solución 1% de dimetilglioxima, en una solución 1.5% de NaOH en Borax 0.05 M

(Na2B4O7 – 10 H2O) . La solución se puede almacenar una semana.

El complejo de dimetilglioxima con Ni es carmesí.

Artículo original:

Seregin, I. V., Kozhevnikova, A. D., Kazyumina, E. M., y Ivanov, V. B., Nickel toxicity and
distribution in maize roots, Russ. J. Plant Physiol., 2003, vol. 50, pp. 711–717.
3. Reactivo: Rodizonato de sodio; C6Na2O6 (masa molar= 214.0); indicador
metalocrómico para Sr.

Iones que interfieren: Pb (tiñe de color escarlata).

Protocolo de preparación y color del complejo/fluorescencia producido:

Se prepara una solución 0.2% de rodizonato de sodio en agua destilada. La solución se

puede almacenar por una semana.

El complejo de rodizonato de sodio con Sr es café-grisáceo.

Artículo original:

Seregin, I. V. y Kozhevnikova, A. D., Strontium transport, distribution, and toxic effects

on maize seedling growth, Russ. J. Plant Physiol., 2004, vol. 51, pp. 215–221.

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4. Reactivo: Zincon; C20H15N4NaO6S (masa molar= 462.4); indicador metalocrómico para

Zn.

Iones que interfieren: Ca – coloración no específica café-rojizo.

Protocolo de preparación y color del complejo/fluorescencia producido:

Se disuleven 0.0065 g de zincon en una solución de 0.2 ml de NaOH 1M en Borax

(Na2B4O7 – 10 H2O), con pH= 9.8 – 10.4; y ajustado con aguadestilada a 10 ml, de tal
modo que la concentración de Borax en la solución sea de 0.05 M; se calienta la
solución obtenida a 80 ºC y se deja enfriar a temperatura ambiente. La solución se
puede almacenar una semana.

El complejo de zincon con Zn es azul.

Artículo original:

Seregin, I. V., Kozhevnikova, A. D., Gracheva, V. V., Bystrova, E. I., y Ivanov, V. B., Tissue
zinc distribution in maize seedling roots and its action on growth, Russ. J. Plant
Physiol., 2011, vol. 58, pp. 109– 117.
5. Reactivo: Zinpyr-1; C46H36Cl2N6O5 (masa molar= 823.2214.0); indicador fluorescente
para Zn. Los máximos de excitación y emisión de este reactivo, se localizan en la región
visible: 490 y 525 nm, respectivamente.

Iones que interfieren: Ninguno.

Protocolo de preparación y color del complejo/fluorescencia producido:

Para preparar una solución 5 mM de solución stock, se disuleve una muestra del
reactivo en dimetilsulfóxido. Se almacena la solución stock a -20 ºC en obscuridad.
Justo antes del análisis, se derrite el reactivo y se diluye a 10 M con agua super
desionizada.

En presencia de Zn, Zinpyr-1 produce fluorescencia verde.

Artículos original:

Seregin, I. V., Kozhevnikova, A. D., Gracheva, V. V., Bystrova, E. I., y Ivanov, V. B.,
Tissue zinc distribution in maize seedling soots and its action on growth, Russ. J.
Plant Physiol., 2011, vol. 58, pp. 109– 117.

Sinclair, S. A., Sherson, S. M., Jarvis, R., Camakaris, J., y Cobbet, C. S., The use of the
zinc-fluorophore Zinpyr-1, in the study of zinc homeostasis in Arabidopsis roots.
New Phytol., 2007, vol. 174, pp. 39–45.

Notas adicionales

- Se realizan series de secciones con navaja, a mano, y se colocan sobre portaobjetos;

después se añaden 3 -4 gotas del reactivo sobre la muestra y se colca un cubreobjetos.

- Se revisan las preparaciones en el microscopio después de varios minutos.

- Cuando se ha secado la preparación (por evaporación), se añade más reactivo por

debajo del cubreobjetos y se retira el exceso con papel filtro. La reacción tarda varios
minutos.

- Es necesario registrar fotográficamente ya que las preparaciones no se pueden

almacenar por mucho tiempo.
- La localización de los metales se detecta con su respectiva coloración o fluorescencia;
su distribución se determina por medio de microscopía de luz o de fluorescencia.