MÉTODOS

CROMATOGRÁFICOS

Química Analítica e Instrumental 2017

Universidad Andrés Bello
TECNICAS SEPARATIVAS
Precipitación.

líquido - líquido
Extracción
Clasificación: en fase sólida

Destilación

Cromatografía
 Estado I Proceso 1 Estado II
A,B A+B
Sistema Homogéneo Sistema Heterogéneo

Transformaciones
físicas y/o químicas

Estado III Proceso 2

A/B
Mecánico, físico o
Dos fases separadas
raramente químico
 MÉTODOS DE SEPARACIÓN
FILTRACIÓN:
Consiste en retener partículas sólidas por medio de una barrera, la cual puede consistir de mallas,
fibras, material poroso o un relleno sólido.

DECANTACIÓN
Consiste en separar componentes que contienen diferentes fases (por ejemplo, 2 líquidos que no se
mezclan, sólido y líquido, etc.) siempre y cuando exista una diferencia significativa entre las densidades
de las fases.
La Separación se efectúa vertiendo la fase superior (menos densa) o la inferior (más densa)

EVAPORACIÓN:
El procedimiento de Evaporación consiste en separar los componentes mas volátiles exponiendo una
gran superficie de la mezcla. El aplicar calor y una corriente de aire seco acelera el proceso.

CRISTALIZACIÓN:
• Para efectuar la cristalización de un Sólido hay que partir de una Solución Sobre-Saturada, para el
proceso de cristalización hay varios caminos:

-Enfriamiento de la solución,
-Eliminar parte del Disolvente (Por ejemplo: por evaporación) a fin de aumentar la concentración del soluto,
-Añadir un tercer componente que tenga una mayor solubilidad que el componente que se desea cristalizar.

•La rapidez del Enfriamiento definirá el tamaño de los cristales resultantes.

Un enfriamiento rápido producirá cristales pequeños,
un enfriamiento lento producirá cristales grandes.
Para acelerar la Cristalización puede hacerse una "siembra" raspando las paredes del recipiente.
 MÉTODOS DE SEPARACIÓN
•DESTILACIÓN
•Este método consiste en separar los componentes de las mezclas basándose en las diferencias en los
puntos de ebullición de dichos componentes.
•Los compuestos con una presión de vapor baja tendrán puntos de ebullición altos y los que tengan una
presión de vapor alta tendrán puntos de ebullición bajos.

-Los tipos de Destilación más comunes son:

•Destilación Simple: se lleva a cabo por medio se una sola etapa,se evapora el líquido de punto de ebullición
más bajo (mayor presión de vapor) y se condensa por medio de un refrigerante
Destilación Fraccionada: se realiza en multi-etapas por medio de una columna de destilación en la cual, se
llevan a cabo continuamente numerosas evaporaciones y condensaciones

Destilación por Arrastre: se hace pasar una corriente de vapor a través de la mezcla de reacción y los
componentes que son solubles en el vapor son separados.
SUBLIMACIÓN
La Sublimación aprovecha la propiedad de algunos compuestos de cambiar del estado sólido al
estado vapor sin pasar por el estado líquido. Por ejemplo, el I2 y el CO2 (hielo seco) poseen esta
propiedad a presión atmosférica.

EXTRACCIÓN:

• Cuando los solutos se distribuyen libremente entre dos solventes inmiscibles se establece una
diferencia entre las relaciones de concentración en el equilibrio.
 CROMATOGRAFÍA

La cromatografía: engloba a un conjunto de técnicas basadas en la

separación de los componentes de una mezcla y su posterior detección,
técnica constituída por una fase móvil y una fase estacionaria

La fase móvil consiste en un fluido (gas, líquido por ejemplo) que

arrastra a la muestra a través de una fase estacionaria que se trata de
un sólido o un líquido fijado en un sólido.

FASE ESTACIONARIA SUPERFICIE

FASE MÓVIL
ELUYENTE
 PROCESO CROMATOGRÁFICO

Muestra:
tres componentes
mezclados Se dispone una mezcla
sobre una fase estacionaria
Fase
estacionaria

Se hace fluir una fase

móvil sobre la estacionaria

Dependiendo de la afinidad
relativa por ambas fases, los
componentes de la mezcla
primitiva se separan
Fase móvil
 CROMATOGRAFÍA
La cromatografía es un sistema de separación dinámica:

-Continuamente se producen equilibrios entre los componentes de la mezcla a separar con las
fases móvil y estacionaria.

-La fase estacionaria consiste en partículas, generalmente sólidas, pequeñas y con una
superficie microporosa, de forma que presenta un amplio desarrollo superficial:

a) Puede estar empaquetada en forma de columna o extendida en forma de capa .

b) En ocasiones es necesario un tratamiento químico de la fase estacionaria para conseguir

unas partículas de tamaño y poro adecuados.
La fase móvil puede ser un líquido o un gas:

-Su función es transportar a los componentes de la mezcla a través del sistema cromatográfico.

•En el proceso de separación se produce una competencia entre la fase móvil y la fase estacionaria por el
componente.

•A este proceso se le denomina partición del componente distribuido entre las dos fases.

•Se establece un equilibrio entre la concentración del componente presente en la fase móvil y la
concentración presente en la fase estacionaria.

•El coeficiente de distribución de un componente A se define como: K = [Co]/[Cw]

 LEY DE DISTRIBUCIÓN

K = [Co]/[Cw]

Donde

-K es el coeficiente de distribución del componente A,

- [Cest.] = concentración del componente A en la fase estacionaria

-[Cmóv.] = concentración del componente A en la fase en la fase móvil.

-El valor del coeficiente de distribución es característico de un

componente para una fase estacionaria y una fase móvil
determinadas.
 FUNDAMENTO DE LA CROMATOGRAFÍA

-Los componentes de la mezcla interaccionan en distinta forma con la fase estacionaria y con la fase
móvil.

-De este modo, los componentes atraviesan la fase estacionaria a distintas velocidades y se van
separando.

-La separación entre dos sustancias empieza cuando una es retenida más fuertemente por la fase
estacionaria que la otra, que tiende a desplazarse más rápidamente en la fase móvil.

-Las retenciones mencionadas pueden tener su origen en dos fenómenos de interacción que se dan
entre las dos fases y que pueden ser :

La adsorción, que es la retención de una especie química por parte de los puntos activos de la
superficie de un sólido quedando delimitado el fenómeno a la superficie que separa las fases o superficie
interfacial.

La absorción, que es la retención de una especie química por parte de una masa, y debido a la
tendencia que esta tiene a formar mezcla con la primera, absorción pura, o a reaccionar químicamente
con la misma, absorción con reacción química, considerando ambas como un fenómeno másico y no
superficial.
 FUNDAMENTO DE LA CROMATOGRAFÍA

•-Después de haber pasado los componentes por la fase estacionaria y haberse separado pasan por
un detector que genera una señal que puede depender de la concentración y del tipo de compuesto.

•Los métodos cromatográficos actuales más modernos monitorean la salida de los componentes y
eluyentes,

•esto se consigue conectando a la salida del sistema cromatográfico unos aparatos electrónicos,
denominados detectores, que detectan pequeñas cantidades de componentes.

•Si se representan los valores de la concentración de esos componentes frente al tiempo o al volumen de
eluyente se obtiene unas curvas Gaussianas denominadas cromatogramas.
La parte de imagen con el identificador de relación rId2 no se encontró en el archivo.
La parte de imagen con el identificador de relación
rId2 no se encontró en el archivo.
FUNDAMENTO DE LA
CROMATOGRAFÍA

La
 FUNDAMENTO DE LA CROMATOGRAFÍA

Adsorción

La parte de imagen con el identificador

Fase Soporte Fase Técnica
de relación rId3 no se encontró en el Móvil Estacionaria
archivo.

Gas Columna GSC

Líquido Columna LC
HPLC

Líquido Capa planar TLC

PC

La
 FUNDAMENTO DE LA CROMATOGRAFÍA

La parte de imagen con el identificador de relación

Partición
rId3 no se encontró en el archivo.
Fase Soporte Fase Técnica
Móvil Estacionaria

Gas Columna GLC

Líquido Columna LC
HPLC
 FUNDAMENTO DE LA CROMATOGRAFÍA
Intercambio iónico

Fase Soporte Fase Técnica

La parte de imagen con el identificador de relación Móvil Estacionaria
rId3 no se encontró en el archivo.

Líquido Columna IEC

HPIC

La parte de imagen con el identificador de

relación rId3 no se encontró en el archivo.
 FUNDAMENTO DE LA CROMATOGRAFÍA
La parte de imagen con el
identificador de relación rId4 no se
encontró en el archivo.

Cromatografía de afinidad
La parte de imagen con el identificador de relación rId4 no
se encontró en el archivo.

La
 Permeación en geles
FUNDAMENTO DE LA CROMATOGRAFÍA
Cromatografía
La parte de imagen con el identificador de relación rId5 no se encontróde
en elpermeación
archivo.

Fase Soporte Fase Técnica

Móvil Estacionaria

Líquido Columna GPC

 FUNDAMENTO DE LA CROMATOGRAFÍA

Cromatografía planar

vCromatografía en capa fina (TLC)

vCromatografía en papel

La parte de imagen con el identificador de

relación rId3 no se encontró en el archivo.
La parte de imagen con el identificador de
relación rId3 no se encontró en el archivo.

La
 Factores que influyen sobre la retención

v Composición y propiedades de la fase móvil

v Tipo y propiedades de la fase estacionaria
v Fuerzas intermoleculares entre los componentes y las fase móvil y estacionaria
v Temperatura

FUERZAS INTERMOLECULARES

vFuerzas de van der Waals

vFuerzas de dispersión
vIntercambio iónico
vEnlaces de hidrógeno
 TIPOS DE CROMATOGRAFÍAS

Tipos Fase móvil Fase estacionaria

Cromatografía en papel Líquido Sólido
Cromatografía en capa fina Líquido Sólido
Cromatografía de gases Gas Sólido o líquido
Cromatografía líquida Sólido o líquido
Líquido (polar)
en fase inversa (menos polar)
Cromatografía líquida Líquido Sólido o líquido
en fase normal (menos polar) (polar)
Cromatografía líquida
Líquido (polar) Sólido
de intercambio iónico
Cromatografía líquida
Líquido Sólido
de exclusión
Cromatografía líquida
Líquido Sólido
de adsorción
Cromatografía de
Líquido Sólido
fluidos supercríticos
 APLICACIÓN DE LA CROMATOGRAFÍA

• La cromatografía permite no sólo separar componentes de una

muestra, si no también su identificación y cuantificación

Análisis Cualitativo à Basado en la medida de parámetros

cromatográficos como tiempos y volúmenes de retención

Análisis Cuantitativo à basado en las medida de alturas u áreas

de picos cromatográficos que se relacionan con la concentración
 CROMATOGRAFÍA PLANA

La fase estacionaria se sitúa sobre una placa plana o sobre un papel.

Cromatografía en papel
Técnica de mediana resolución en el cual una mezcla de solutos sembrada sobre papel de filtro logra
separarse entre si basándose en:

Los diferentes coeficientes de partición de los solutos entre la fase acuosa estacionaria débilmente unido
a las fibras de celulosa del papel y a la fase líquida orgánica móvil corriendo a través de la hoja por acción
capilar

Diferencias en la adsorción del soluto a las fibras de celulosa y disolución en la fase móvil.

Cromatografía en capa fina (TLC)

- En este caso se utiliza una placa recubierta con fase estacionaria manteniendo un pequeño espesor
constante a lo largo de la placa.

- El eluyente ascenderá, por capilaridad, por la placa y arrastrará los componentes a lo largo de ésta
produciendo “manchas” de los componentes.

- Se usan láminas de: vidrio como soporte del adsorbente, plástico (ej: acetato) ó metálicos (ej: aluminio).
Los tamaños de la placa para CCf convencional son: 20 x 20; 10 x 20 y 5 x 2.

- Hay placas que contienen un indicador de fluorescencia, para facilitar la identificación de las muestras.
Si no se usa indicador y los componentes no son coloridos se requerirán técnicas de revelado.
La parte de imagen con el identificador de La parte de imagen con el identificador de
relación rId2 no se encontró en el archivo. relación rId2 no se encontró en el archivo.
Cromatografía en capa fina (TLC)

Cualitativa

x x x x x x

Identificación Pureza Ausencia

Cuantitativa Preparativa

x x x x
 CROMATOGRAFÍA CUALITATIVA
El índice de retención Rf (Ratio of Front)

La parte de imagen con el identificador de

relación rId2 no se encontró en el archivo.

El valor de Rf depende de las condiciones

en las cuales se corre la muestra (tipo de
adsorbente, eluyente, así como las
condiciones de la placa, temperatura,
vapor de saturación, etc.). Tiene una
reproducibilidad de ± 20%, por lo que es
mejor correr duplicados de la misma
placa.

Una propiedad que permite identificar

sustancias en una mezcla

La parte de imagen con el identificador de relación

 CROMATOGRAFÍA CUANTITATIVA

Estimación del área de la mancha (por medida,

pesada)
Determinación indirecta (raspado y valoración)
Determinación directa (Densitómetro)
Detector Fuente de luz

La parte de imagen con el identificador de relación rId2 no se

encontró en el archivo.

Placa
cromatográfica
 FASE ESTACIONARIA EN CCF
w Para la selección del adsorbentes deber tomar las siguientes consideraciones:

Polaridad
Tamaño de partícula
Diámetro
Área Superficial
Homogeneidad
Silica Gel (Oxido de Silicio).
Alumina (Oxido de Aluminio).
Celulosa.
Adsorción: Fluorisil (Silicato de Magnesio).
Sulfato de Calcio.

Tierras de Diatomea
Exclusión molecular:
Sephedex (geles)
 Fase Estacionaria (3): Acido sulfónico

Intercambio Iónico: RSO2- H+

Catiónicas
Acido carbóxilico

RCO2- H+
Resinas
Ión amonio cuaternario

R3NR+ OH-
Aniónicas
Grupo amina

R3NH3+ OH-
 CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA (TLC)

Fase Móvil
En la elección del eluyente influyen Polaridad
varios factores: Ácidos carboxílicos
COOH
Alta OH Alcoholes
·Precio.
NH2 Aminas
•Pureza. SH Tioles
CHO Aldehídos
•No utilizar mezclas de eluyentes CO Cetonas
(reproducibilidad). COOR Esteres
OCH3 Éteres
•No utilizar compuestos muy Baja
volátiles.
Hidrocarburos No Saturados
Hidrocarburos Saturados
•Evitar que contengan trazas de
metales (catalizadores).
 CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA (TLC)

Fase Móvil
Eluyentes más comunes para cromatografía en capa fina.

w éter de petróleo w -éter dietílico

w -tolueno w -cloroformo
w -dietil-éter, t-butil-éter w -acetona
w -diclorometano w -iso-propanol
w -acetato de etilo w -etanol
w -n-pentano, n-hexano w -metanol
w -ciclohexano w -ácido acético
w -tetracloruro de carbono
 REVELADORES EN CCF
Las manchas de color son, por supuesto, inmediatamente visibles; las incoloras pueden
revelarse mediante:

• Luz UV: si la sustancia absorbe luz ultravioleta, se puede usar una fase estacionaria
impregnada con un indicador fluorescente (F254 ó F366), el número que aparece
como subíndice nos indica la longitud de onda de excitación del indicador utilizado.

• La introducción de la placa en vapores de yodo.

• El rocío con una solución de agua/H2SO4 1:1 (dentro de un compartimiento

especialmente protegido y bajo una campana de extracción de gases).

• Después calentar

Generales H2SO4 , Lámpara ultravioleta

Selectivo I2, Ftalato de anilina (azúcares)

Ninhidrina (Amino-ácidos)
Específico
Resorcina (Cetosas)
Difenilamina + U.V. 254 (I. Clorados)
 CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA TLC

Ventajas de la cromatografía en capa fina

La cromatografía en capa fina presenta una serie de ventajas

frente a otros métodos cromatográficos (en columna, en
papel, en fase gaseosa), ya que:

n El material que precisa es más simple.

n El tiempo que se necesita para conseguir las
separaciones es mucho menor y la separación es
generalmente mejor.
n El método es simple y los resultados son fácilmente
reproducibles, lo que hace que sea un método adecuado
para fines analíticos en la industria.
 CROMATOGRAFÍA EN COLUMNA

• Todo el proceso de separación acontece en la columna

•El proceso de cromatografía en columna se controla por

cromatografía en capa fina, de tal manera que se puede
separar cada componente de la mezcla.

• La cromatografía en columna se usa para separar grandes

cantidades de material: >100 mg. El proceso de
cromatografía consta de una fase móvil (eluyente) y una fase
estacionaria (adsorbente), los cuales dependen de las
sustancias.
•Es una técnica que se emplea en el fraccionamiento de proteínas
EMPAQUETADO APLICACIÓN
ELUCIÓN Y RECOGIDA DE FRACCIONES
COLUMNA MUESTRA

RESERVORIO
f. móvil
La parte de imagen con el
FASE La parte de imagen
identificador de relación rId4
con el identificador
ESTACIONARIA no se encontró en el archivo.
de relación rId4 no
se encontró en el

MUESTRA
La La
pa par La
La La
rte te pa La
parte parte
de de rte par
de de
image image FLUJO im im de te
de
n con n con gravedad ag ag im
en en ag im
el el
co co en ag
identifi identifi
n n co en
cador cador
el el n co
de de
id ide el n
relació relació
en nti ide el DIFUSIÓN
n rId4 n rId4
tifi fic nti ide
no se ntifi
ca ad fic
encont ca
or ad
de or dor
de
La parte de
SEPARACIÓN imagen
FRACCIONES PERFIL DE ELUCIÓN

La parte de imagenLa La
con el identificadorpar
de pa Moléc. distribuida
relación rId2 no sete rte en f.móvil
de
encontró en el archivo. de

1 2 3 4 5 6 7 8 9

respuesta del detector

ANÁLISIS DEL
CONTENIDO DE LAS
FRACCIONES

Espectrofotométrico

Abs 280nm – Proteínas

Otras Abs - Colorantes 1 2 3 4 5 6 7 8 9
fracción
 Cromatografía de filtración en gel

Tipos de Cromatografía de
cromatografía intercambio iónico
en columna

Cromatografía de afinidad
y de inmunoafinidad
 CROMATOGRAFÍA DE FILTRACIÓN EN GEL

Esta cromatografía se realiza empleando unas matrices formadas

por unas esferas porosas.

-El volumen de los poros es muy elevado y su diámetro está

determinado.

-En esta cromatografía se eluyen primero las proteínas mayores,

y en segundo lugar las menores.

- Columnas largas y de mayor volumen aseguran separaciones de

mayor calidad.
 CROMATOGRAFÍA DE FILTRACIÓN EN GEL

PRINCIPIO DE LA CROMATROGRAFÍA

Las moléculas pequeñas penetran en los pequeños conductos

que presentan las esferas de gel, donde la velocidad de flujo
de solvente es menor.

Las moléculas grandes, incapaces de penetrar en los pequeños

conductos de las esferas de gel, se mueven entre ellas donde
la velocidad de flujo de solvente es mayor.

Como consecuencia las moléculas de mayor peso molecular son

eluidas antes que las de menor peso molecular.
 CROMATOGRAFÍA DE FILTRACIÓN EN GEL
La parte de imagen con
el identificador de
relación rId2 no se
encontró en el archivo.
SOPORTE à Resina de micropartículas
esféricas formadas por polímeros hidrofílicos
(dextrano, agarosa, poliacrilamida o mezcla de FASE MÓVIL

ellos).

Tamaños de poro à intervalo o rango de

fraccionamiento.
F. ESTACIONARIA
P.e. Sephadex G25: 1000 – 5000 Da MICROPARTÍCULAS
Sephadex G200: 5000 – 250000 Da
 CROMATOGRAFÍA DE FILTRACIÓN EN GEL
La parte de imagen con
el identificador de
relación rId2 no se
encontró en el archivo.
FASE MÓVIL

F. ESTACIONARIA à (LÍQUIDA) solvente

acuoso (el mismo que el de la fase móvil) que
se encuentra dentro de micropartículas.

F. ESTACIONARIA

MICROPARTÍCULAS
F. MÓVIL à (LÍQUIDA) solvente acuoso que
atraviesa la columna por los espacios
intersticiales (entre las micropartículas).
 La parte de
Molec. GRANDES à RÁPIDAS
La parte de imagen con el imagen
identificador
con el
* Avanzan con mayor velocidad a través
de relación rId2 no se encontró en el de
identificador
archivo. relación rId2
no se encontró de los espacios intersticiales (con f.
móvil)

Molec. PEQUEÑAS à LENTAS

* Son retenidas por las fibras de las

micropartículas y avanzan con menos
velocidad (con f. estacionaria).
PERFIL DE ELUCIÓN
APLICACIÓN grande
MUESTRA
pequeña
respuesta del detector
ELUCIÓN

1 2 3 4 5 6 7 8 9
fracción
 CROMATOGRAFÍA DE INTERCAMBIO
CATIÓNICO

Se utiliza cuando se quiere. separar una mezcla cuyos

componentes son especies químicas que, a un pH adecuado, se
disocian en iones
Permite separar y purificar determinados analitos que, con
posterioridad, se cuantifican por absorción molecular,etc..

En el interior de la columna se sitúa la fase estacionaria, que es un

gel intercambiador de iones, el cual debe de acondicionarse
previamente al paso de la fase móvil, que contiene la muestra.

Tras el paso de dicha muestra, se eluyen los componentes no unidos a

la fase estacionaria, y posteriormente se eluyen los componentes
unidos (separándose en fracciones, si fuera el caso) que se
cuantificaran por otros métodos ya mencionados.
 La parte de imagen con el
identificador de relación
SOPORTE à Resina de micropartículas rId2 no se encontró en el
archivo.
formadas por polímeros sintéticos o naturales
(dextranos, celulosas, agarosa).

F. ESTACIONARIA à (SÓLIDA) Grupos con FASE MÓVIL

cargas iónicas unidos al soporte.

Carga positiva (+) à intercambiadores de

aniones (-):
cromatografía aniónica F. ESTACIONARIA
Carga negativa (-) à intercambiadores de
cationes (+): MICROPARTÍCULAS

cromatografía catiónica
 La parte de imagen con el
identificador de relación
rId2 no se encontró en el
F. MOVIL à (LÍQUIDA) Solvente que anula la archivo.
interacción electrostática.

2 posibilidades:
FASE MÓVIL
Gradientes de pH à cambio de cargA de las
moléculas de la muestra.

Gradientes iónicos (salinos) à competencia

por grupos electrófilos. F. ESTACIONARIA

MICROPARTÍCULAS
•Gradiente de pH
Molec. MENOR CARGA (+) à
•Gradiente salino RÁPIDAS

* Son desplazadas más fácilmente por

La parte de
La parte de imagen con el identificador
imagen con el
de relación rId2 no se encontró en el
archivo.
identificador de la f.móvil.
relación rId2 no
se encontró en

Molec. MAYOR CARGA (+) à LENTAS

* Son retenidas por los grupos cargados

iónicamente de la f. estacionaria.

PERFIL DE ELUCIÓN
q+
APLICACIÓN Q+
MUESTRA
respuesta del detector
+

Na+
ELUCIÓN

-
* Cromatografía
1 2 3 4 5 6 7 8 9
catiónica fracción
 CROMATOGRAFÍA DE AFINIDAD

• Se trata de un tipo especial de cromatografía de adsorción

sólido-líquido en la que la sustancia de naturaleza bioquímica
(anticuerpos, cofactores, inhibidores enzimáticos y otras
moléculas) denominadas ligandos de afinidad y enlazados
químicamente en soportes sólidos adecuados, retienen a los
solutos (analitos), también de naturaleza bioquímica, de manera
reversible y selectiva.
 CROMATOGRAFÍA DE AFINIDAD

PRINCIPIO

Las esferas de gel están recubiertas de un ligando por el que

tiene afinidad alguna de las proteínas a aislar. Al pasar la
muestra a través de la columna ésta proteína es retenida en la
superficie de las esferas, eluyéndose las demás.

Para eluir la proteína retenida por afinidad se suele aumentar la

fuerza iónica la solución de solvente o incluir en éste el ligando
soluble a altas concentraciones de manera que compita con el que
está unido en las esferas.
 La parte de
imagen con
el
SOPORTE à Matriz de micropartículas identificador

hidrofílicas sin carga, con rigidez, inerte y

de relación
rId3 no se
estable (agarosa, acrílica). encontró en
el archivo.

FASE MÓVIL

F. ESTACIONARIA à (SÓLIDA) Ligandos La parte

(grupos químicos) específicos unidos a la de
imagen
matriz. con el
identifica
dor de
-- Comerciales:
Concavalina A à une glicoproteínas
F. ESTACIONARIA
Proteína A à une IgG (anticuerpos)
MICROPARTÍCULAS

-- No comerciales: anclaje covalente ligando -

matriz
 La parte de
imagen con
el
identificador
de relación
rId3 no se
F. MÓVIL à (LÍQUIDA) Solución que anula o encontró en

disminuye la afinidad con el ligando de la fase

el archivo.

estacionaria. FASE MÓVIL

-- Solución con el propio ligando à Molécula + La parte

de
ligando libre imagen

-- Solución con algo que interacciona con el

con el
identifica
ligando à Molécula dor de

F. ESTACIONARIA

MICROPARTÍCULAS
 La parte de imagen con el identificador de relación
rId2 no se encontró en el archivo.
La parte de
Molec. NO INTERACCIÓN à
imagen con el RÁPIDAS
identificador de
relación rId2 no
* No se unen al ligando de la fase
estacionaria.
Molec. INTERACCIÓN à LENTAS

* Se unen al ligando de la f.
estacionaria.
Elución específica.

PERFIL DE
ELUCIÓN ELUCIÓN
LAVADO ESPECÍFICA

APLICACIÓN respuesta del detector

MUESTRA

LAVADO
1 2 3 4 5 6 7 8 9
ELUCIÓN
ESPECÍFICA