Anexo 3.

Curva patrón para la determinación de etanol por el método del dicromato de potasio

Preparación de los reactivos

• Solución oxidante
Se mezclan 4.165 g de dicromato de potasio (97%) y 250 mL de ácido sulfúrico (96%) en un
vaso de precipitado de 600mL. Luego esta solución se para a un balón volumétrico aforado de
1000 mL y se completa hasta el aforo con agua destilada.

• Solución de carbonato de potasio

Se mezclan de 20 g de carbonato de potasio (98%) en un vaso de precipitado de 250mL hasta
que se disuelva. Luego esta solución se transfiere a un balón volumétrico de 100mL y se
completa con agua destilada hasta el aforo.

Después de tener las 2 soluciones anteriores preparadas se realiza la solución final:

• Solución final.
Se toman 4 mL de la solución oxidante en un tubo de ensayo y luego se adiciona, gota a gota,
2 mL de solución de carbonato de potasio hasta finalizar el burbujeo.

Procedimiento para la realización de la curva patrón

Se prepararon diferentes concentraciones de etanol en agua destilada (2,5, 5,0, 10, 15, 20, 30)
como se muestra en la tabla siguiente. Se mezclan 2 mL de la solución final con 2 mL de los
diferentes patrones en un tubo de ensayo homogeneizándose en vórtex a 1500 rpm durante
10 s. Seguidamente se realiza un calentamiento en baño termostatado de 80-85 °C, por 30
min. Se enfría a temperatura ambiente y se lee la absorbancia a una longitud de onda de 440
nm, ajustando la absorbancia con el blanco de prueba

Concentración Etanol Agua
g/l (mL) destilada(mL)
Blanco* - -
2.5 0.05 19.95
5 0.1 19.9
10 0.2 19.8
15 0.3 19.7
20 0.4 19.6
30 0.5 19.5

• El blanco se prepara con ácido sulfúrico con una concentración de 6N.

Determinación de etanol en cada muestra

Se tomaron 10mLde la muestra de medio de cultivo en un tubo de ensayo y se centrifuga a
3500 rpm durante 20 min. Se trabaja con el sobrenadante de donde se toman 2mL en un tubo
de ensayo y se mezclan con 2mL de la solución final en un vórtex por 10 segundos.
Estos tubos son puestos en un baño termostatado de 80 a 85ºC por 30 minutos. Al cabo de
esto se dejan enfriar a temperatura ambiente y se lee la absorbancia a una longitud de onda de
440 nm ajustando la absorbancia con el blanco de prueba. Los datos obtenidos se multiplican
por el factor que corresponda a cada medio que se presentan a continuación debajo de cada
grafica, para hallar la concentración en g/L.

ϰϭ