UNIVERSIDAD TÉCNICA DE MANABÍ

FACULTAD DE CIENCIAS MATEMÁTICAS, FÍSICAS Y

QUÍMICAS
ESCUELA DE INGENIERÍA QUÍMICA

PROCESAMIENTO DE ALIMENTOS I

LISINA ALPHA OXIDASA

NOVENO NIVEL
MACIAS MENENDEZ ROBERTO

DOCENTE:
ING. FELIPE JADAN PIEDRA

MAYO 2017 - SEPTIEMBRE 2017

PORTOVIEJO–MANABI-ECUADOR

TEMA
 Caracterización enzimática

OBJETIVO:

 Comprender la teoría de la cinética enzimática, para caracterizar la enzima y

realizar de forma analítica el proceso de óxido reducción.

EJERCICIO:

a) Graficar el consumo de oxigeno frente al tiempo y calcule la pendiente a los 20 s,

de cada patrón interno para obtener la cinética de saturación de la lisina alpha
oxidasa.
b) Graficar en el tramo lineal la recta de calibrado.
c) Calcular la Km de la lisina alpha oxidasa utilizando la siguiente ecuación de
Hannes Woolf:

S/v= Km/Vmax+1/Vmax (S)

Y=b+mx

TABLA 1. Tiempo y consumo de oxígeno a diferentes concentraciones.

Patron Patron Patron Patron Patron Patron 1,5 Patron 2,5 Patron 5 Patron 7 Patron 8 Patron 9
Patron 0.1 mM 0.2mM 0.5mM 0.7mM 1mM 1.2mM mM mM mM mM mM mM

Tiempo( mg/l O2 mg/l O2 mg/l O2 mg/l O2 mg/l O2 mg/l O2 mg/l O2 mg/l O2 mg/l O2 mg/l O2 mg/l O2 mg/l O2
seg) consumido consumido consumido consumido consumido consumido consumido consumido consumido consumido consumido consumido

0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

10 0.003 0.006 0.02 0.02 0.03 0.044 0.051 0.084 0.121 0.115 0.122 0.108

20 0.028 0.016 0.037 0.041 0.048 0.052 0.074 0.103 0.134 0.126 0.13 0.119

30 0.045 0.023 0.056 0.051 0.073 0.055 0.094 0.129 0.147 0.133 0.137 0.127

40 0.067 0.028 0.068 0.065 0.087 0.058 0.11 0.148 0.166 0.14 0.143 0.132

50 0.068 0.033 0.078 0.078 0.101 0.062 0.124 0.16 0.177 0.146 0.148 0.136

60 0.079 0.043 0.089 0.087 0.11 0.07 0.139 0.173 0.186 0.149 0.152 0.145

70 0.103 0.051 0.101 0.1 0.123 0.073 0.15 0.185 0.195 0.152 0.157 0.15

80 0.11 0.052 0.109 0.111 0.133 0.085 0.161 0.196 0.204 0.155 0.16 0.153
 90 0.106 0.06 0.119 0.12 0.146 0.086 0.174 0.203 0.209 0.158 0.163 0.156

100 0.107 0.065 0.127 0.132 0.157 0.087 0.178 0.212 0.213 0.161 0.163 0.161

110 0.106 0.07 0.131 0.149 0.168 0.092 0.182 0.219 0.216 0.162 0.168 0.164

120 0.105 0.072 0.137 0.151 0.174 0.1 0.19 0.223 0.221 0.165 0.168 0.165

130 0.101 0.07 0.139 0.158 0.182 0.104 0.195 0.228 0.226 0.164 0.17 0.168

140 0.096 0.071 0.107 0.167 0.188 0.059 0.198 0.232 0.23 0.165 0.171 0.167

Gráfico 1. Cantidad de oxigeno consumido en relación al tiempo respecto a la concentración

Tabla 1. Concetración Vs Tiempo

0.25

0.2
y = 0.0069x
Concentración

R² = 0.7824
0.15

0.1

0.05

0
0 20 40 60 80 100 120 140 160
Tiempo

Patrón 0.1 mM mg/l O2 consumido Patrón 0.2mM mg/l O2 consumido

Patrón 0.5mM mg/l O2 consumido
Patrón 1mM mg/l O2 consumido
Patrón 1,5 mM mg/l O2 consumido
Patrón 5 mM mg/l O2 consumido
Patrón 8 mM mg/l O2 consumido
Patrón 0.1 mM
Patrón 0.5 mM
Patrón 1 mM
Patrón 1.5 mM
Patrón 0.7mM mg/l O2 consumido
Patrón 1.2mM mg/l O2 consumido
Patrón 2,5 mM mg/l O2 consumido
Patrón 7 mM mg/l O2 consumido
Patrón 9 mM mg/l O2 consumido
Patrón 0.2 mM
Patrón 0.7 mM
Patrón 1.2 mM
Patrón 2.5 mM

Tabla 1: Valores calculados de la pendiente, pendiente a 20 segundos, correlación y S/V

Concentración Pendiente Pendiente /20 R^2 S/V
seg
0.1 0.0012 0.00006 0.7952 1666.66667
0.2 0.0008 0.00004 0.9755 5000
0.5 0.002 0.0001 0.9998 5000
0.7 0.002 0.0001 0.9998 7000
1 0.0025 0.000125 0.9755 8000
1.2 0.003 0.00015 0.8347 8000
1.5 0.004 0.0002 0.9453 7500
2.5 0.0058 0.00029 0.8594 8620.68966
5 0.0078 0.00039 0.7864 12820.5128
7 0.0073 0.000365 0.7779 19178.0822
8 0.0076 0.00038 0.7552 21052.6316
9 0.0069 0.000345 0.7824 26086.9565

Gráfica 2. Concentración del consumo de oxigeno respecto a la pendiente a 20 segundos

CONCENTRACIÓN VS PENDIENTE
0.0005
Velocidad de consumo de O2

0.0004

0.0003

0.0002
y = 0.0001x + 2E-05
0.0001 R² = 0.9922
0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
mM Lys

Gráfica 3. Recta de mejor ajuste entre la concentración de consumo de oxígeno y la

pendiente a 20 segundos

CONCENTRACIÓN VS PENDIENTE
0.0004

0.0003

0.0002

0.0001 y = 0.0001x + 2E-05

R² = 0.9922
0
0 0.5 1 1.5 2 2.5 3
Series1 Linear (Series1)

Gráfica 4. Velocidad de reacción respecto a la concentración de oxigeno consumido.

Ecuacion de Hanes Woolf

30000
n (S/V )

25000
y = 2144.3x + 4525.3
R² = 0.967
)
En la gráfica se representa la relación concentración de sustrato/velocidad de reacción
frente a la concentración de sustrato (S), y nos ayuda a calcula el Km ya que es una de las
formas de linealizar la ecuación de Michaelis-Menten

Gráfica 5. Recta de mejor ajuste de la velocidad de reacción en relación a la

concentración de oxigeno consumido

Velocidad de Reacción (VS/V) Vs Concentración

0.00025
Velocidad de reacción(mgO2/L*s-1)

y = 0.0001x + 1E-05
0.0002 R² = 0.9874

0.00015

0.0001

0.00005

0
0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 1.4 1.6
Concentración Lys (mM)

 CALCULOS
 𝑠 𝑘𝑀 1
= +𝑠
𝑣 𝑣𝑚𝑎𝑥 𝑣𝑚𝑎𝑥
1 1
𝑣𝑚𝑎𝑥 = = = 0,000306
𝑚 3265,9

𝐾𝑀
= 4624,9
𝑣𝑚𝑎𝑥
𝐾𝑚 = 4624,9 ∗ 0,000306 = 1,41

CONCLUSIÓN:

 La cinética enzimática de Michaelis-Menten estudia la velocidad de las

reacciones catalizadas por enzimas al realizar este estudio de forma analítica nos
proporciona información directa acerca del mecanismo de la reacción catalítica y
de la especifidad de la enzima. El Km corresponde a la concentración del sustrato
el cual en los cálculos realizados dio un valor de 1.41; y al comparar con la tesis
doctoral de Jadán F, (2015) en el cual le dio un valor de 2.14 por lo que podemos
notar que la enzima tiene una gran afinidad al sustrato, sabiendo que a menor es
el Km mayor es su afinidad. Aunque la variación en la comparación no es mucha
debemos tener en cuenta que pequeñas variaciones en el sustrato pueden suponer
grandes cambios en la velocidad de toda una ruta metabólica, quizás variaciones
ajenas utilizadas.

BIBLIOGRAFIA:

 Felipe Arturo Jadán Piedra, 2015. Tesis de Doctorado. SENSORES

ENZIMATICOS COMO HERRAMIENTAS PARA EL CONTROL RAPIDO
DE LA CALIDAD DE LA CARNE Y PRODUCTOS CARNICOS. (Pagina 96).