La cinética enzimática estudia la velocidad de las reacciones catalizadas por enzimas.

Estos estudios proporcionan

información directa acerca del mecanismo de la reacción catalítica y de la especifidad del enzima. La velocidad de una
reacción catalizada por un enzima puede medirse con relativa facilidad, ya que en muchos casos no es necesario purificar o
aislar el enzima. La medida se realiza siempre en las condiciones óptimas de pH, temperatura, presencia de cofactores, etc,
y se utilizan concentraciones saturantes de sustrato. En estas condiciones, la velocidad de reacción observada es la velocidad
máxima (Vmax). La velocidad puede determinarse bien midiendo la aparición de los productos o la desaparición de los
reactivos.

Al seguir la velocidad de aparición de producto (o de desaparición del sustrato) en

función del tiempo se obtiene la llamada curva de avance de la reacción, o
simplemente, la cinética de la reacción. A medida que la reacción transcurre, la
velocidad de acumulación del producto va disminuyendo porque se va
consumiendo el sustrato de la reacción (Figura de la derecha). Para evitar esta
complicación se procede a medir la velocidad inicial de la reacción (v0). La
velocidad inicial de la reacción es igual a la pendiente de la curva de avance a
tiempo cero (Figura de la derecha). De esta forma, la medida de v0 se realiza antes
de que se consuma el 10% del total del sustrato, de forma que pueda considerarse
la [S] como esencialmente constante a lo largo del experimento. Además, en
estas condiciones no es necesario considerar la reacción inversa, ya que la cantidad de producto formada es tan pequeña
que la reacción inversa apenas ocurre. De esta forma se simplifican enormemente las ecuaciones de velocidad.

Para estudiar la cinética enzimática se mide el efecto de la concentración

inicial de sustrato sobre la velocidad inicial de la reacción, manteniendo
la cantidad de enzima constante. Si representamos v0 frente a
[S]0 obtenemos una gráfica como la de la Figura de la derecha. Cuando
[S]0 es pequeña, la velocidad inicial es directamente proporcional a la
concentración de sustrato, y por tanto, la reacción es de primer orden. A
altas [S]0, el enzima se encuentra saturada por el sustrato, y la velocidad
ya no depende de [S]0. En este punto, la reacción es de orden cero y la
velocidad es máxima (Vmax).
• El proceso enzimático sigue las siguientes etapas: En primer lugar el sustrato (S) y la enzima
(E) se unen y forman un complejo enzima-sustrato (ES). Una vez formado el complejo ES, este
o bien se disocia en enzima más el sustrato o se transforma el sustrato en producto formado el
complejo enzima-producto (EP), que se disocia para dar enzima (E) más producto (P). • El
proceso fue modelizado por Michaelis y Menten y le permitio obtener una ecuación, ecuación
de Michaelis-Mente en donde la velocidad de la acción de un enzima es función de la cantidad
de sustrato presente, la cantidad de enzima y las características del enzima, la afinidad del
enzima por el sustrato y el poder catalítico del enzima • La Km nos da una idea la afinidad que
tiene el enzima por su sustrato, cuanto mayor es Km menor es la afinidad (predominan las
formas E y S libres), cuanto menor es Km may • La velocidad máxima Vmáx estima el número
de centros activos del enzima. Recordar que hemos definido la Vmáx como la velocidad que
obtendríamos cuando todo el enzima se encuentra unido al sustrato. • A la constante k2
(poder catalítico del enzima) se la reconoce con el nombre de número de recambio, es el
número de moléculas de sustrato convertidas en producto por unidad de tiempo. Por lo que la
Vmáx depende de dos cosas, la cantidad de enzima presente y la capacidad catalítica del
enzima, es decir la velocidad con que transforma al sustrato La representación gráfica de la
velocidad en función de la concentración de sustrato: Del estudio del modelo se desprende
que la velocidad de transformación de sustrato en producto en una reacción enzimática
depende: - La cantidad de sustrato presente. [S] - La afinidad del enzima por el sustrato. Km -
La cantidad de enzima presente. [E] - El poder catalítico del enzima. [k2] Cualquier mecanismo
que altere alguno de estos parámetros provocara una modificación de la velocidad enzimática,
por lo que una vía podrá ser modulada o controlada. Además no todos los enzimas siguen una
cinética de Michales-Menten, algunos presenta una cinetica sigmoidal, los enzimas que
presentan modulación alosterica cooperativa, es decir aquellos en el que el sustrato actua
como un modulador positivo. Estudia las diferencias de un enzima con modulación alosterica
cooperativa positiva y un enzima que sigue la cinética de Michaelis-Menten. La velocidad de
acción de un enzima también se puede ver afectada por la presencia de inhibidores, que
pueden actuar de diferentes maneras. Estudia los efectos sobre la velocidad de la presencia de
Efecto de la concentración del sustrato Km: Concentración de (S) a la cual se alcanza la mitad
de la Vmax. Es una constante de afinidad de la enzima por un sustrato específico. Km es una
medida inversa de la afinidad. Vmax Se alcanza cuando todos los sitios activos de la E, está
saturados por el S, siendo (S) >>Km. - Existe un PH en el cual se obtiene un máximo de
velocidad -> pH óptimo. - Cada enzima tiene un pH óptimo. Amilasa salival 6,5; Pepsina 1,8. -
Puede influir en la afinidad, % de saturación de E, por S, estabilidad de la E, en las constantes
cinéticas Efecto del PH Efecto de la temperatura - La T óptima de nuestras enzimas es la de la
temperatura corporal. - Por encima de esta T, la enzima va disminuyendo su actividad
catalítica hasta desnaturalizarse 55-60 ºC. - Por debajo también disminuye hasta inactivarse.
Pero recupera su actividad en la T, óptima. CONCLUSIONES Y/O ACTIVIDADES DE
INVESTIGACIÓN SUGERIDAS Grupo de seminario realiza exposición correspondiente de esta
clase. Revisa en plataforma blackboard, en subcarpeta de Actividades Académicas, la Guía de
Práctica. Revisa en plataforma blackboard, el material asignado a esta clase en subcarpetas de
lectura y webgrafía. Isoenzimas - Son diversas formas moleculares de una enzima. - Catalizan la
misma reacción química. - Tienen secuencia de AA semejantes pero no idénticas. - Presentan
distintas propiedades cinética, reguladoras, antigénicas e incluso distribución celular.
Inhibidores -Son sustancias químicas que participan en la regulación enzimática. - Suministran
información importante acerca de la estructura y/o grupos funcionales del sitio activo. -
Permite conocer la especificidad de la enzima por un tipo de reacción o sustrato. - Muchos
agentes terapéuticos ejercen su acción farmacológica actuando como inhibidores enzimáticos.