SEPARACION DE LOS IONES DICROMATO [Cr2O7]2-, Y
PERMANGANATO [MnO4]- MEDIANTE UNA COLUMNA
CROMATOGRAFICA DE SILICA DE GEL
SAIRA VANIRA DIAZ POSADA, YARGELIS LOPEZ ARRIETA, MELISA SALGADO CORDERO.
RESUMEN.
Las técnicas cromatografías se emplean
para separar los componentes individuales
de una mezcla y, en ciertos casos, para
identificar un compuesto comparando su
comportamiento cromatográfico con el
desustancias conocidas empleadas como
patrón. La base de la técnica es que cuando
un determinado soluto interactúa con dos
fases, una de ellas, habitualmente sólida,
llamada fase estacionaria, experimenta una
serie de procesos (adsorción en fase sólida,
solubilización en cada fase, arrastre por la
fase móvil, etc.) que, en último extremo,
llevan a que el soluto se reparta entre
ambas fases. En el equilibrio, la relación
entre las concentraciones del soluto entre
ambas fases es constante, y se denomina
coeficiente de reparto.
Por otra parte durante esta experiencia se
realizó la separación de de una mezcla que
contenía iones dicromato y permanganato
por medio de la cromatografía en columna.
Los oleatos obtenidos fueron analizados.
INTRODUCCIÓN.
La cromatografía es un potente método de
separación que tiene aplicación en todas
las ramas de la ciencia. La técnica fue
inventada y denominada así por el
botánico ruso Mikhail Tswett a principios
del siglo XX. Él la utilizaba para separar
varios pigmentos vegetales, como
clorofilas y xantofilas, haciendo pasar
soluciones de estos compuestos a través de
una columna de vidrio rellena con
carbonato de calcio finamente dividido.
Las especies separadas aparecían como
bandas coloreadas en la columna, lo que
justifica el nombre que eligió para el
método (del griego chroma que significa
“color”, y graphein que significa
“escribir”).
La cromatografía agrupa un conjunto
importante y diverso de métodos que
facilitan la separación, identificación y
determinación de componentes
estrechamente relacionados en mezclas
complejas; muchas de dichas separaciones
son imposibles por otros medios. En todas
las separaciones cromatografías la muestra
se disuelve con una fase móvil (que puede
ser un gas, un líquido o un fluido
supercrítico) la cual se hace pasar a través
de una fase estacionaria inmiscible fija en
una columna o en una superficie sólida.
En la cromatografía en columna, un tubo
estrecho contiene la fase estacionaria a
través de la cual la fase móvil se fuerza a
pasar por presión.
Las aplicaciones de la cromatografía han
aumentado en forma explosiva en los
últimos cincuenta años debido no sólo al
perfeccionamiento de nuevos y diversos
tipos de técnicas cromatografías, sino
también a las necesidades crecientes de los
científicos de mejores métodos para la
caracterización de mezclas complejas. La
tremenda influencia de esos métodos en la
ciencia se confirmó cuando se otorgó el
Premio Nobel de Química de 1952 a A. J.
P. Martin y R. L. M. Synge, por sus
descubrimientos en este campo.
En el desarrollo de la práctica de
laboratorio sobre cromatografía de
columna para el análisis cromatográfico de
los iones cromato, dicromato y
permanganato en la separación de una
mezcla, se analizó la efectividad del
método inspeccionando los factores de
elución como la selectividad de la fase
móvil y la fase estacionaria para cada ion,
y el tipo fases usadas1.
TEORÍA RELACIONADA.
La figura 1 muestra en forma esquemática
cómo dos sustancias A y B se separan en
una columna empacada mediante elución.
La columna está constituida por un tubo
angosto relleno con un sólido inerte
finamente dividido que mantiene a la fase
estacionaria en su superficie. La fase móvil
ocupa los espacios abiertos entre las
partículas del material de empaque. Para
empezar, una solución de la muestra que
contiene una mezcla de A y de B en la fase
móvil se introduce en la parte superior de
la columna como un tapón angosto, como
se puede ver en la figura 1, en el tiempo
t=0. Entonces los dos componentes se
distribuyen entre las fases móvil y
estacionaria. La elución implica la
purificación de una especie por lavado en
una columna mediante la adición continua
de fase móvil nueva. En la cromatografía
moderna, la adición continua se consigue
por medio de una bomba en CL y en CFS
o por la aplicación de presión en CG.
Con la primera introducción de fase móvil
nueva, el eluyente (la parte de la muestra
contenida en la fase móvil) avanza hacia
abajo por la columna, donde tiene lugar un
reparto o distribución entre la fase móvil y
la fase estacionaria (tiempo t1). El reparto
o distribución entre la fase móvil fresca y
la fase estacionaria se efectúa de manera
simultánea en el sitio de la muestra
original.
A medida que la fase móvil limpia fluye
por la columna, transporta moléculas de
soluto hacia abajo de la columna en una
serie continua de transferencias entre las
dos fases. Pero como el movimiento de los
solutos sólo puede ocurrir en la fase móvil,
la velocidad media a la que una zona de
soluto migra hacia abajo en la columna
depende de la fracción de tiempo que
permanece o reside en dicha fase. Esta
fracción de tiempo es pequeña para las
sustancias que son retenidas fuertemente
por la fase estacionaria, por ejemplo, el
compuesto B en la figura 1, y grande
cuando el soluto reside principalmente en
la fase móvil (componente A). De manera
ideal, las diferencias de velocidad que
resultan hacen que los componentes de la
mezcla se separen en bandas, o zonas, que
se localizan a lo largo de la columna (ver
el tiempo t2 en la figura 26.1). El
aislamiento de las especies separadas se
logra haciendo pasar una cantidad
suficiente de fase móvil por la columna
hasta que las bandas individuales llegan al
extremo, es decir, son eluidas o lavadas de
la columna, en donde se detectan o se
recogen (tiempos t3 y t4 en la figura 1).

Figura 1. Diagrama que muestra la
separación de una mezcla de
componentes A y B.
Figura 2. Esquema de una columna de
cromatografía de filtración en gel.
PRINCIPIO DE LA
CROMATOGRAFÍA DE
FILTRACIÓN EN GEL.
Con la cromatografía de filtración en gel
se separan moléculas en virtud de sus
diferencias de tamaño. La capacidad
separadora reside en el gel cuya matriz
consta de un gran número de esferas
porosas microscópicas. Estas esferas están
constituidas por largas cadenas de
polímeros unidas entre sí por enlaces
químicos para formar una red
tridimensional. El gel, una vez hidratado,
se deposita adecuadamente en una
columna hueca de vidrio (Fig. 2) quedando
listo para su uso.
¿QUÉ ABSORBENTES SE
UTILIZAN?
Por lo general se usa alúmina o silica de
gel para este tipo de separaciones
cromatográficas, El material que se escoja
para la fase estacionaria dependerá del tipo columna. Las mejores separaciones se
de muestra que estemos corriendo. Cada obtienen aplicando volúmenes de muestra
tipo de gel presenta poros de distinto iguales o menores al 5% del volumen total.
tamaño. Los geles más comunes y
- Empaquetado del gel en la columna.
comerciales marca Sephadex, separan
Las propiedades separadoras del gel se
moléculas en rangos diversos entre 3,000
alteran profundamente, e incluso
y 10,000 o entre 20,000 – 600.000 daltons.
desaparecen, cuando un gel no está
Moléculas mayores a estos rangos no
empaquetado homogéneamente en la
estarán a los poros de las esferas.
columna o se encuentra excesivamente
¿QUÉ ELUYENTES SE UTILIZAN? comprimido2.
Igual que los absorbentes, los eluyentes METODOLOGÍA.
dependerán del tipo de muestra que se
preparar la silica de
desee correr. Para una muestra biológica es gel adicionando una
necesario utilizar solventes orgánicos de cantidad mínima de
polaridad relativamente media para alguno de los acidos
para hidratar el
observar una elección uniforme. Es absorbente.
necesario verter los distintos eluyentes uno
por uno para observar a que analitos son
más selectivos con el sistema. Para nuestro
caso se utilizaron soluciones de ácido introducir un trozo algodón
sulfúrico y ácido nítrico. en la parte inferior de la
bureta para retener la silica.
¿QUÉ FACTORES QUE INFLUYEN
EN LA SEPARACIÓN?
Además de la diferencia intrínseca de
Se recoge
tamaño existente entre las moléculas que vertir la muestra en la
el eluato
columna y se adiciona ácido
van a ser cromatografiadas, hay diferentes
sulfúrico hasta separar lostubos
en
factores que influyen en una correcta iones permanganato de ensayo.
separación de las mismas:
- Longitud de la columna. La capacidad
de separación de sustancias de diferente
tamaño aumenta con la longitud de la Una vez separados los iones
permanganato se vierte
columna. ácido nítrico para separar
los iones cromato y
-Flujo. La resolución de la separación dicromato.
disminuye al aumentar el flujo del líquido
con que son arrastradas las moléculas a lo
largo de la columna. Normalmente el flujo
oscila entre 2 y 10 cm*h-1.
Se recoge el eluato en tubos
- El volumen de la muestra a de ensayo.
cromatografiar. Debe ser pequeño
comparado con el volumen total de la
RESULTADOS

Después de finalizado el proceso de

elución se observó claramente que el ion
permanganato fue eludido en primera
instancia al utilizar ácido sulfúrico 0.1M
mientras que el ion dicromato fue
totalmente eludido al utilizar ácido nítrico
0.5M como fase móvil. Como se observan
en las siguientes imágenes:

Obteniendo finalmente las fracciones

eluidas de los iones.

Fracción del ion permanganato.

Luego se realizó la elución del ion Fracción del ion dicromato.

dicromato utilizando solución de ácido
nítrico como fase móvil.
DISCUSIÓN DE LOS RESULTADOS. BIBLIOGRAFÍA
De acuerdo a los resultados obtenidos, la 1. Skoog Douglas A., Holler F.
especie menos retenida en la columna fue James, Crouch Stanley R.
el ion permanganato este hecho esta Principios de análisis intrumental.
atribuido al tamaño del ión y su a McGraw Hill. 6a. Edición.
interacción con la fase móvil, el ion México: Cengage Learning, 2008.
permanganato posee una sola carga 2. Cromatografía de filtración en gel
negativa y una estructura relativamente http://www.uco.es/dptos/bioquimi
más pequeña que el ion dicromato siendo ca.biolmol/pdfs/13%20FILTRACI
así más selectivo en la superficie porosa %C3%93N%20EN%20GEL.pdf
del absorbente; adicionalmente el ácido
sulfúrico aumenta la de polaridad del ion
en la columna, lo que hace que sea
arrastrado hacia abajo.
En comparación a la separación del ion
dicromato el volumen gastado de fase
móvil (ácido sulfúrico) fue mayor por lo
que la elución se dio más lenta.
Para el ion dicromato se dio una elución
más rápida gastándose una cantidad menor
de volumen de fase móvil (ácido nítrico)
para migrar los iones de la columna, a
partir se deduce que predominaron
mayormente las interacciones ion-fase
móvil y debido a esto sale más rápido de la
columna.

CONCLUSIÓN.
En esta práctica de laboratorio logramos
separar con cierto grado de eficacia los
iones dicromato y permanganato presente
en la mezcla inicial poniendo en práctica
los conceptos teóricos estudiados.
La cromatografía en columna demostró ser
una técnica eficaz para la separación de los
iones dicromato y permanganato si se tiene
sumo cuidado en la fabricación de la
columna y la elección de la fase móvil.