INTRODUCCIÓN

La cromatografía es un potente método de separación que tiene aplicación en todas las

ramas de la ciencia.
La cromatografía agrupa un conjunto importante y diverso de métodos que facilitan la
separación, identificación y determinación de componentes estrechamente relacionados
en mezclas complejas; muchas de dichas separaciones son imposibles por otros medios.
En todas las separaciones cromatografías la muestra se disuelve con una fase móvil (que
puede ser un gas, un líquido o un fluido supercrítico) la cual se hace pasar a través de
una fase estacionaria inmiscible fija en una columna o en una superficie sólida. Las dos
fases se eligen de tal forma que los componentes de la muestra se distribuyen en grados
distintos entre la fase móvil y la fase estacionaria. Aquellos componentes que son
fuertemente retenidos por la fase estacionaria se mueven con mucha lentitud con el flujo
de la fase móvil.
En cambio, los componentes unidos débilmente a la fase estacionaria se mueven con
rapidez. Como consecuencia de las distintas velocidades de migración, los componentes
de la muestra se separan en bandas o zonas distintas que se pueden analizar en forma
cualitativa y cuantitativa.
En general, hay muy pocos métodos para el análisis químico que son específicos para
una sola especie. En el mejor de los casos, los métodos analíticos son selectivos para
unas pocas especies o para una clase de ellas. Por consiguiente, la separación del
analito de las posibles interferencias suele ser una etapa de vital importancia en los
procedimientos analíticos. Hasta mediados del siglo XX, las separaciones analíticas se
llevaban a cabo con métodos clásicos, como precipitación, destilación y extracción.
Ahora, las separaciones analíticas se realizan mediante cromatografía y electroforesis,
en especial cuando las muestras están formadas por varios componentes y son
complejas.
Las aplicaciones de la cromatografía han aumentado en forma explosiva en los últimos
cincuenta años debido no solo al perfeccionamiento de nuevos y diversos tipos de
técnicas cromatografías, sino también a las necesidades crecientes de los científicos de
mejores métodos para la caracterización de mezclas complejas.
Métodos Cromatográficos
La cromatografía es un método ampliamente utilizado para la separación, identificación
y determinación de los componentes químicos de mezclas complejas. Ningún otro
método de separación es tan poderoso y generalmente aplicable como la cromatografía.
La cromatografía es una técnica en la que los componentes de una mezcla se separan
basándose sobre diferencias de las velocidades a las cuales son acarreados por una
fase móvil gaseosa o líquida a través de una fase estacionaria fija.
El término cromatografía es difícil de definir de manera rigurosa debido a que el nombre
ha sido aplicado a varios sistemas y técnicas.
No obstante, todos estos métodos tienen en común el uso de una fase estacionaria y el
de una fase móvil. Los componentes de una mezcla son llevados a través de la fase
estacionaria por la fase móvil, y la separación se basa sobre las diferencias de las
velocidades de migración entre los componentes de la fase móvil.

 La fase estacionaria en cromatografía es aquella que está fija en su lugar, ya sea

dentro de una columna o sobre una superficie plana.
 La fase móvil en cromatografía es aquella que se mueve sobre la fase
estacionaria o a través de ésta acarreando con ella la mezcla de analitos. La fase
móvil puede ser un gas, un líquido o un fluido supercrítico.

Tipos de Métodos Cromatográficos

Existen diferentes criterios de clasificación de la cromatografía:

 Por la naturaleza de sus fases:

- Cromatografía liquido – liquido
- Cromatografía gas – liquido
- Cromatografía liquido – solido
- Cromatografía gas – solido
 Atendiendo al proceso químico-físico que va a protagonizar el proceso de
separación:
- Cromatografía de adsorción
 - Cromatografía de reparto
- Cromatografía de intercambio iónico
- Cromatografía de exclusión
 Con base en la naturaleza del soporte en el que se aloja la fase estacionaria:
- Cromatografía plana:
o Cromatografía de papel
o Cromatografía en capa fina
- Cromatografía de columna:
o Cromatografía de gases
o Cromatografía liquida

Los métodos cromatográficos son de dos tipos básicos. En la cromatografía en

columna, la fase estacionaria se mantiene dentro de un tubo delgado, y la fase móvil es
forzada a través del tubo mediante presión o gravedad. En la cromatografía plana, la
fase estacionaria está sostenida sobre una placa plana o en los poros de un papel, y la
fase móvil se mueve a través de la fase estacionaria por capilaridad o por la influencia
de la gravedad.

 Cromatografía en Columna

Los métodos cromatográficos caen dentro de tres categorías basándose sobre la

naturaleza de la fase móvil: líquido, gas y fluido supercrítico. La segunda columna de la
tabla revela que hay cinco tipos de
cromatografía líquida y dos tipos de
cromatografía de gases que son
diferentes debido a la naturaleza de la
fase estacionaria y a los tipos de
equilibrio químico entre las fases.
La columna consiste en un tubo de
calibre estrecho que está empacado con
un sólido inerte finamente dividido que
sostiene la fase estacionaria en su
superficie. La fase móvil ocupa los
espacios abiertos entre las partículas del empaque. Inicialmente, una disolución de la
muestra que contiene una mezcla de A y B en la fase móvil es introducida en la cabeza
de la columna como porción estrecha en el tiempo t0. Los dos componentes se
distribuyen entre la fase móvil y la fase estacionaria.

 Cromatografía de Gases
En la cromatografía de gases, los componentes de una muestra vaporizada se separan
al ser distribuidos entre una fase móvil gaseosa y una fase estacionaria líquida o sólida
retenida en una columna. Al realizar una separación por cromatografía de gases, la
muestra es vaporizada e inyectada en la parte superior de una columna cromatográfica.
La elución ocurre por el flujo de una fase móvil inerte gaseosa. En contraste con la
mayoría de los tipos de cromatografía, la fase móvil no interactúa con las moléculas del
analito. La única función de la fase móvil es transportar al analito a través de la columna.

Ilustración 1 Diagrama de bloques de un cromatógrafo de gases

 Cromatografía gas-líquido: la fase móvil es un gas y la fase estacionaria es un
líquido que es retenido en la superficie de un sólido inerte por adsorción o por un
enlace químico.

Aplicaciones: La cromatografía gas-líquido es aplicable a especies que son

considerablemente volátiles y térmicamente estables a temperaturas de unos
pocos cientos de grados Celsius. Un gran número de compuestos importantes
tienen estas cualidades. Como resultado, la cromatografía de gases ha sido
aplicada en gran medida a la separación y determinación de los componentes en
una variedad de tipos de muestra.

Ilustración 2 Cromatogramas típicos de columnas tubulares abiertas recubiertas.

 Cromatografía gas-sólido: la fase móvil es un gas y la fase estacionaria es un

sólido que retiene los analitos por adsorción física. La cromatografía gas-sólido
permite la separación y la determinación de gases de baja masa molecular, como
 los componentes del aire, el sulfuro de hidrógeno, el monóxido de carbono y los
óxidos de nitrógeno.

Aplicaciones: La cromatografía gas-sólido es útil para la separación de especies

que no se retienen en columnas de gas-líquido, tales como los componentes del
aire, sulfuro de hidrógeno, disulfuro de carbono, óxidos de nitrógeno, monóxido
de carbono, dióxido de carbono y los gases nobles.

 Cromatografía Liquida
La cromatografía líquida de alta resolución es el tipo de cromatografía por elución más
versátil y más utilizada. La técnica es utilizada por científicos para separar y determinar
especies en una variedad de materiales orgánicos, inorgánicos y biológicos. En la
cromatografía líquida, la fase móvil es un disolvente líquido que contiene a la muestra en
la forma de una mezcla de solutos. Los tipos de cromatografía líquida de alta resolución
suelen clasificarse con base en su mecanismo de separación o según el tipo de fase
estacionaria.

Ilustración 3 Diagrama de bloques que muestra los componentes tipicos de un aparato de HPLC
 Cromatografía de Partición: En la cromatografía de partición líquido-líquido la
fase estacionaria es un disolvente mantenido en su lugar mediante su adsorción
a la superficie de las partículas empacadas.
En la cromatografía líquido-fase enlazada, la fase estacionaria es una especie
orgánica que está unida a la superficie del empacamiento por medio de enlaces
químicos.

Aplicaciones:
- Farmacéuticos Antibióticos, sedantes, esteroides, analgésicos
- Bioquímica Aminoácidos, proteínas, carbohidratos, lípidos
- Productos alimenticios Edulcorantes artifciales, antioxidantes, aflatoxinas,
aditivos
- Químicos industriales Aromáticos condensados, surfactantes, agentes
propulsores, colorantes
- Contaminantes Pesticidas, herbicidas, fenoles, bifenilos policlorados
- Ciencias forenses Fármacos, venenos, alcohol en sangre, narcóticos
- Química clínica Ácidos biliares, metabolitos de fármacos, extractos de orina,
estrógenos

 Cromatografía de Adsorción: Se basa principalmente en las diferencias en la

afinidad relativa de los compuestos por el sólido utilizado como fase estacionaria.
Las separaciones obtenidas se determinan casi exclusivamente por interacciones
polares, siendo la fase estacionaria más polar que la fase móvil.

Aplicaciones: Esta es una de las técnicas cromatográficas más antiguas, su uso

depende del tipo de compuesto que estemos separando, o sea de su naturaleza
química, en particular se usa para la separación de compuestos isoméricos,
especies no polares, hidrocarburos alifáticos, y para compuestos con grupos
funcionales capaces de formar puentes de hidrógeno fuertes, por ello es utilizada
para separar azúcares, especialmente azucares aminados y glicoproteinas así
como oligosacáridos, y también se ha usado para obtener proteínas biliares.
 Cromatografía Iónica: En la cromatografía iónica basada en supresor, la
columna de intercambio iónico está seguida de una columna supresora, o de una
membrana supresora, que convierte un eluyente iónico en una especie no iónica
que no interfiere con la detección conductimétrica de los iones de analito.
En la cromatografía de intercambio iónico de columna única, los iones de
analito se separan en un intercambiador iónico de baja capacidad por medio de
un eluyente de baja fuerza iónica que no interfiere con la detección
conductimétrica de los iones de analito.

Aplicaciones: Eliminación de iones. Un agua completamente desionizada se

obtiene pasándola a través de un cambiador de cationes, y después a través de
un cambiador de aniones.
Separación de aminoácidos. La naturaleza anfótera de este grupo permite
cambiar el signo de su carga o eliminar la carga neta, de modo que un ácido
determinado se puede intercambiar en una resina aniónica, en una resina
catiónica o en ninguna de las dos, mediante control de pH de la solución.

 Cromatografía de Exclusión Molecular: La cromatografía de exclusión

molecular, o cromatografía en gel, es una técnica poderosa y particularmente útil
para especies de alta masa molecular. En la cromatografía de exclusión
molecular, el fraccionamiento se basa en el tamaño de las moléculas.

La filtración en gel es un tipo de cromatografía de exclusión molecular en la que

el empacamiento es hidrofílico. Se utiliza para separar especies polares.
La permeación en gel es un tipo de cromatografía de exclusión molecular en la
que el empacamiento es hidrofóbico. Se utiliza para separar especies no polares.

Aplicaciones: Una aplicación importante de la cromatografía de exclusión

molecular es la determinación rápida de la masa molecular o de la distribución de
masas moleculares de un gran número de polímeros o productos naturales.
Ilustración 4 Aplicaciones de la cromatografá de exclusión molecular: a) Separacion de ácidos grasos; b) Análisis de una resina
epoxi comercial

 Cromatografía de Afinidad: En la cromatografía de afinidad, un reactivo llamado

ligando de afinidad se une covalentemente a un soporte sólido. Los ligandos de
afinidad típicos son anticuerpos, inhibidores enzimáticos u otras moléculas que se
unen reversible y selectivamente a las moléculas de analito en la muestra. Cuando
la muestra pasa a través de la columna, solo las moléculas que se unen
selectivamente al ligando de afinidad son retenidas. Después de removerse las
moléculas indeseadas, los analitos retenidos pueden ser eluidos cambiando las
condiciones de la fase móvil.

Aplicaciones: La cromatografía de afinidad tiene la gran ventada de ser

extraordinariamente específica.
Su uso primario es el aislamiento rápido de biomoléculas durante el trabajo
preparativo.

 Cromatografía de Fluidos Supercríticos

En la cromatografía de fluidos supercríticos (SFC, por sus siglas en inglés), el fluido
supercrítico actúa como la fase móvil. Este tipo de cromatografía combina algunas de las
características tanto de la cromatografía de gases como la de líquidos. Por lo tanto, al
igual que la cromatografía de gases, la cromatografía en fluidos supercríticos es
inherentemente más rápida que la cromatografía líquida debido a la menor viscosidad y
las mayores velocidades de difusión en la fase móvil. Sin embargo, la alta capacidad de
difusión conduce al ensanchamiento longitudinal de la banda, el cual es un factor
considerable para los gases, pero no en la cromatografía líquida.

Aplicaciones: La cromatografía de fluidos supercríticos parece tener un nicho en el

espectro de los métodos cromatográficos porque puede ser aplicada a los compuestos
que no son separados fácilmente mediante cromatografía líquida o de gases. Estos
compuestos incluyen especies no volátiles o térmicamente inestables.
La cromatografía de fluidos supercríticos actualmente es uno de los principales métodos
de separación para compuestos quirales, como los encontrados en el descubrimiento de
fármacos. Tiene el potencial de reemplazar algunas de las separaciones de HPLC en
fase inversa de estos compuestos.

 Cromatografía Plana

Los métodos de cromatografía plana incluyen la cromatografía de capa fina (TLC, por
sus siglas en inglés), la cromatografía en papel (PC, por sus siglas en inglés) y la
electrocromatografía.

Cada una de ellas utiliza una capa plana relativamente delgada de materia que puede
ser autoportante o cubierta en una superficie de vidrio, plástico o metal. La fase móvil se
desplaza a través de la fase estacionaria por acción capilar, en ocasiones facilitada por
la gravedad o por un potencial eléctrico.
La cromatografía plana alguna vez fue llamada cromatografía de dos dimensiones,
aunque hoy este término se refiere al acoplamiento de dos técnicas cromatográficas con
diferentes mecanismos de separación. Debido a que la mayoría de las cromatografías
planas se basan en la técnica de capa fina, la cual es más rápida, tiene mayor resolución
y es más sensible que su similar en papel.

 Cromatografía de Capa Fina (TLC)

La cromatografía de capa fina (TLC) puede ser considerada como una forma de
cromatografía en la que la fase estacionaria es una capa fina sobre la superficie de una
placa adecuada. La fase móvil es transportada sobre la superficie por acción capilar. Las
cromatografías de capa fina y líquida son muy similares en lo que respecta a la teoría y
a las fases móvil y estacionaria. De hecho, las placas de capa fina pueden ser utilizadas
de manera rentable para desarrollar las condiciones óptimas para separaciones en
columnas de cromatografía líquida. Las ventajas de seguir este procedimiento son la
velocidad y el bajo costo de los experimentos de exploración de capa fina. El aparato de
TLC es mucho más sencillo que un sistema de HPLC y su operación es mucho menos
costosa.

Aplicaciones: La TLC ha encontrado un amplio uso en los laboratorios clínicos y es la

columna vertebral de varios estudios bioquímicos y biológicos. También tiene un uso
extenso en los laboratorios industriales.6 Debido a estas diversas áreas de aplicación, la
TLC permanece como una técnica muy importante.

- Industria farmacéutica: Separación y cuantificación de ingredientes activos.

- Industria de alimentos: Cuantificación de edulcorantes, preservantes y
vitaminas.
- Materias primas: Cuantificación de pureza.
- Otras aplicaciones: Separación de componentes en muestras botánicas, de
productos naturales y bioquímicas
  Cromatografía de Papel (PC)

Las separaciones por cromatografía en papel se realizan de la misma manera que

aquellas en placas de capa fina. Los papeles son fabricados a partir de celulosa de gran
pureza con un estricto control sobre la porosidad y el grosor. Este tipo de papeles
contiene suficiente agua adsorbida para conformar la fase estacionaria acuosa. Sin
embargo, puede hacerse que otros líquidos desplacen al agua, proporcionando un tipo
distinto de fase estacionaria. También existen en el mercado papeles especiales que
contienen un adsorbente o una resina de intercambio iónico, permitiendo la
cromatografía en papel de adsorción e intercambio iónico.

Aplicaciones: Actualmente, la cromatografía en papel se utiliza poco y ha sido

ampliamente reemplazada por la cromatografía en capa fina. No obstante, todavía se
utiliza como una poderosa herramienta pedagógica.
CONCLUSIÓN
La cromatografía ha llegado a ser el principal método para la separación de especies
químicas estrechamente relacionadas entre sí. Además, se puede emplear para la
identificación cualitativa y para la determinación cuantitativa de las especies separadas.
Actualmente los métodos cromatrograficos han demostrado tener una aplicación muy
amplia en la separación, purificación e identificación de sustancias ya sea orgánicas e
inorgánicas así como sustancias biológicas de alto peso molecular.
Una de las particularidades de las técnicas cromatograficas, es que es más práctica en
comparación de otras mucho más costosas y complicadas. Los resultados más
relevantes se han alcanzado en el campo de los pigmentos vegetales y productos
naturales, pero hoy día la cromatografía es de empleo cotidiano en todos los laboratorios
e industrias a nivel mundial para logra separaciones elegantes y prácticas de mezclas.

Se emplea un conjunto de técnicas basadas en el principio de la retención selectiva para

separar los componentes de una mezcla en un alto estado de pureza, o para identificarlos
en una mezcla y determinar su proporción exacta.
De esa manera, la cromatografía consiste en la exposición de una mezcla determinada
a un soporte específico (gas, papel, un líquido neutro, etc.) para así aprovechar las
diferencias en la velocidad de adsorción de cada componente de la mezcla,
identificándolas a partir del espectro de color que la mezcla arroje en el tiempo.

En nuestra vida cotidiana tenemos presente la cromatografía por ejemplo en los análisis
de sangre para poder separar e identificar sustancias contenidas en ella así como
también en los examen de orina que en una mezcla de diversos compuestos, cuya
presencia o ausencia revela el funcionamiento de organismo y se utiliza la cromatografía
para buscar residuos inusuales.
Otra de las aplicaciones de la cromatografía en la separación de tintas ya que están
compuestas de diversos pigmentos en un medio líquido, es posible separar estos
pigmentos mediante cromatografía y evidenciar las diferencias entre cada uno. Esta
aplicación se usa frecuentemente para explicar la cromatografía en rotuladores de
colores.
Bibliografía

Douglas A. Skoog, D. M. (2015). Fundamentos de Quíimica Analítica. México:

CENGAGE Learning.

Douglas A. Skoog, F. J. (2008). Principios de Análisis Intrumental. Mexico, D.F. :

CENGAGE Learning.

Gallego, I. R. (18 de Marzo de 2015). Cromatografía del Gas Natural. Obtenido de

https://www.dspace.espol.edu.ec/retrieve/91597/D-68860.pdf

Trujillo, D. L. (19 de Junio de 2012). Universidad Tecnológica de Pereira. Obtenido de

Universidad Tecnológica de Pereira:
http://blog.utp.edu.co/docenciaedwin/files/2014/09/TIPOS-
CROMATOGRAF%C3%8DA.pdf

Universidad Nacional Autonoma de México (04 de Diciembre de 2007). Introducción a

los métodos de separación. Obtenido de Facultad de Quimica:
http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/M.Cromatogrficos_6700.pdf