Sistemas de controlo da expressão gênica à base de Riboswitches

Embora existam vários sistemas de regulação de expressão génica, os riboswitches são capazes
de contribuir com uma nova qualidade nesta área. Estes são frequentemente ativados por
compostos pequenos e simples, reduzindo os custos de exploração desse sistema, mesmo em
escala industrial (por exemplo: o IPTG é um indutor muito mais caro de lacZsistema). Além disso,
a maioria dos ligandos é pequeno o suficiente para penetrar uma parede celular bacteriana e
membrana celular, o que significa que a sua administração ao meio é suficiente para provocar
efeitos regulatórios. Parece ser uma vantagem em comparação, por exemplo, com a estratégia
antisentido em que os oligonucleótidos antisentido devem ser administrados às células em
vetores adequados, como lipossomas.

Controlo baseado em Riboswitch da expressão de genes de Mycobacteria

Os sistemas indutíveis de expressão gênica são amplamente explorados para analisar a
essencialidade do gene, função e potenciais alvos de drogas. Existem vários sistemas de controle
de expressão gênica, no entanto, a maioria deles é limitada a bactérias Gram-negativas ou
espécies relacionadas. Existem sistemas regulatórios disponíveis para micobactérias,
nomeadamente o promotor de acetamidase Msmeginduzível com acetamida ou sistema
baseado em repressor de tetraciclina. No entanto, ambos exigem proteínas adequadas para
provocar efeitos regulatórios que tornem todo o sistema complexo, difícil de calibrar e controlar
com precisão.

Controlo baseado em Riboswitch de expressão e replicação de genes de vírus

A descoberta de que alguns vírus de ocorrência natural têm uma preferência intrínseca para
lidar com células cancerígenas leva ao conceito de fornecer "vírus oncolíticos", que são vírus que
preferencialmente infetam e matam células cancerígenas.
Recentemente, dois vírus geneticamente modificados foram manipulados: adenovírus (AdVs) e
vírus do sarampo (vírus ssRNA) com expressão de genes controlada por riboswitches. A ideia
básica de tal estratégia foi que o controle da expressão do transgene por adenovírus de
duplicação de deficiência foi conseguido através da inserção de uma aptazima, uma ribozima
autoclivada dependente do ligando sintético, na 5'/3' da unidade de transcrição. Após a infeção
produtiva de uma célula hospedeira com adenovírus, o genoma viral é transcrito no núcleo do
hospedeiro, o ARNm é traduzido no citoplasma e os viriões auto incorporam-se no núcleo. Com
adenovírus manipulados, a replicação do genoma viral ocorre apenas para OAds competentes
em replicação em células tumorais. Então, os transgenes são transcritos no núcleo
hospedeiro. O interruptor OFF aplicado, fornecido por uma aptazima, permite a expressão do
transgene na ausência do ligando (expressão do gene ON). Após a adição do ligando
(teofilina), as aptazimas podem se dobrar numa conformação ativa e a auto-divisão do mRNA
ocorre (expressão do gene DESLIGADA). Os estudos mostraram o desligamento efetivo da
expressão do gene acompanhada com aproximadamente 200 vezes a taxa de replicação
reduzida, desencadeada pela adição de teofilina no meio.
Resultados positivos também foram alcançados para o vírus do sarampo. Aqui, as mesmas
aptazimas foram incorporadas em UTRs 5 'e 3' do gene F que codificam a proteína F responsável
pela fusão do hospedeiro e da membrana celular viral após a ligação da partícula do vírus,
controlando a entrada viral na célula.
Em conclusão, devido à sua pequena atividade e intrínseca de RNA, as aptazimas podem ser
consideradas como uma alternativa para os promotores indutíveis no controlo eucariótico da
expressão gênica.
Expressão genética baseada em Riboswitch em sistemas semelhantes a células
A complexidade dos sistemas de expressão eucariótica muitas vezes dificulta a compreensão
completa de certos fenômenos. Portanto, uma alternativa interessante poderia ser artificial,
como células, que imitam os principais recursos da vida com componentes definidos, mas
simplificados e muito mais fáceis de operar e regular.

Riboswitches como riboselectores

Os Riboswitches podem controlar a expressão gênica em resposta à concentração de
metabolitos intracelulares. Assim criaram se os "riboseletores" como forma de acelerar a
evolução de microorganismos produtores de metabolitos. Um riboseletor é composto por dois
módulos: um riboswitch e um módulo de seleção. Estes podem, portanto, otimizar
eficientemente as vias metabólicas ligando a concentração intracelular de um metabolito
particular à sobrevivência da célula sob pressão de seleção.

Riboswitches como biocombustíveis

Um biossensor é um dispositivo analítico, que combina um componente biológico com um
detetor físico-químico. O reconhecimento de uma determinada molécula geralmente
desencadeia uma liberação de um sinal eletroquímico ou óptico que é quantificado pelo
detetor. O tipo mais comum de biossensor é enzimático, no entanto a produção de uma grande
quantidade de enzimas é dispendiosa e requer uma purificação minuciosa.
Os riboswitches oferecem uma nova abordagem promissora para a área dos biossensores. A
capacidade de deteção por estes pode ser gerada de novo de acordo com as suas necessidades
por um processo de seleção in vitro conhecido como Evolução Sistemática de Ligandos por
Enriquecimento Exponencial (SELEX). Este procedimento experimental permite-nos obter o
domínio aptamer de um riboswitch respondendo a quase todos os pequenos compostos. Estes
interferentes artificiais, de forma semelhante aos naturais, ligam ligandos mesmo em
concentrações muito baixas de uma maneira dependente da dose.

Controlo baseado no Riboswitch do comportamento bacteriano

As bactérias são naturalmente adaptadas para detetar e responder a sinais químicos do
ambiente à sua volta. Estas respondem por quimiotaxia que é a capacidade de recuar ou seguir
uma dada molécula de acordo com seu gradiente. Normalmente, um determinado composto
químico é reconhecido e ligado pelo recetor provocando a ativação de proteínas citossólidas
capazes de controlar o complexo motor flagelar. Permite que as bactérias evitem substâncias
nocivas e ocupem locais ricos em nutrientes.

Riboswitches como potenciais alvos de fármacos antimicrobianos

A capacidade de eliminar moléculas e a existência comum em bactérias, torna os riboswitches
um potencial alvo de fármacos antibacterianos. Este assunto tem sido bastante debatido uma
vez que a resistência bacteriana a antibióticos é cada vez mais comum. O uso dos riboswitches
traría uma série de vantagens começando por conterem menor toxicidade. A presença de um
único tipo de riboswitches em genes de bactérias múltiplas promove uma única mutação, que é
insuficiente para neutralizar o efeito de antimicrobianos.