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Sección: 4 Grupo
Alumnos:
OBJETIVO
ANÁLISIS DE LA TÉCNICA
Para lograr aislar el plásmido PuC-19, comenzamos por suspender las células en una
solución de glucosa-Tris-EDTA, los distintos componentes de esa mezclan funcionan
para distintas cosas: el tris es un agente tamponante que permitirá mantener el pH de la
solución en 8, por otra parte, el EDTA a pH de 8 presentará una carga de 4- y en esas
condiciones logra quelar al Ca++ el cual es cofactor de la DNAasa (enzima que se encarga
de lisar el DNA), al impedir que la enzima trabaje logramos evitar que el plásmido no sea
lisado.
Después de mezclar bien e incubar en hielo, agregamos 200 µL de la solución II, la cual
contenía SDS al 1% y NaOH 2N, el SDS es un detergente que llevará a cabo la ruptura
de las membranas de las células, facilitando la obtención del DNA plasmídico, por otra
parte, el NaOH realizará la hidrólisis del DNA propio de la bacteria (genómico) el cual no
es requerido en la práctica. El NaOH lleva a cabo la hidrólisis de manera inespecífica por
lo cual se requirió mezclar con mucho cuidado para que no se viera afectado el DNA
plasmídico. Posteriormente se mezcló por inversión el tubo y se puso a incubar durante
5 minutos en hielo. Se siguió con la adición de la solución III, la cual contiene acetato de
potasio en concentración 5M; con esta solución logramos precipitar las proteínas y el DNA
genómico por lo que al centrifugarse logramos obtener en el sobrenadante el DNA
plasmídico el cual pasamos a otro tubo y lo que no deseamos se queda en el fondo del
tubo.
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DNA Genómico
DISCUSIÓN
CONCLUSIONES
PREGUNTAS EXTRA:
1. ¿Qué es la agarosa?
BIBLIOGRAFÍA