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División de Ciencias Biológicas y de la Salud

Licenciatura en Química Farmacéutica Biológica


Evaluación de las materias primas para la producción de
medicamentos

REPORTE DE PRÁCTICA DE
LABORATORIO:

“VALIDACIÓN DE UN MÉTODO ANALÍTICO PARA LA


DETERMINACIÓN DE NAPROXENO SODICO POR
ESPECTROFOTOMETRÍA ULTRAVIOLETA-VISIBLE”
Equipo 2

Resumen
La entidad mexicana de acreditación (EMA ac.) establece que los parámetros
analíticos de calidad para la cuantificación de un analito son exactitud, precisión,
linealidad, especificidad, sensibilidad, sesgo, límite de detección, límite de
cuantificación, entre otros.
Introducción.
Por definición la validación es la confirmación mediante el suministro de evidencia
objetiva de que se han cumplido los requisitos del método para una utilización o
aplicación específica prevista (NMX-CH-152-IMNC-2005). La validación examina las
características de desempeño de un método para identificar y establecer cualquier
limitación que pueda esperarse del método, así como identificar los factores que
pueden influir en el cambio de dichos parámetros y limitaciones; permite demostrar
que el método es adecuado para el propósito, esto es, para resolver un problema
analítico particular (CENAM, 2005; EURACHEM, 2003). En análisis químico cuantitativo,
muchas decisiones importantes se basan en los resultados obtenidos por un
laboratorio; por lo que es necesario, disponer de un indicador sobre la calidad de
tales resultados. Hoy más que nunca se pretende que los químicos analíticos estén
en condiciones de demostrar la calidad de sus resultados, indicando el grado de
confiabilidad en que cada uno de estos parámetros demuestra su idoneidad para la
finalidad prevista. Esto supone, que se indique en qué medida se prevé que tal
resultado concordará con otros, independientemente del método aplicado. La
validación analítica de los métodos de análisis es uno de los elementos básicos en
sistemas de calidad. La validación trata de disminuir o controlar los factores que
llevan a la imprecisión o inexactitud de un dato obtenido, a través de la realización
de un trabajo analítico dentro de unos parámetros definidos generando una mayor
fiabilidad y aceptación de los datos, al estar en proporción con la calidad del proceso
de obtención de los mismos (Castineira, 2009). Entre los parámetros analíticos más
utilizados se encuentran: exactitud, sesgo, precisión.

Objetivos
1. Aplicar una metodología para determinar los parámetros mínimos de Validación
(Especificidad, Linealidad, Precisión o Repetibilidad y Exactitud) en un método
espectrofotométrico UV-Vis para la cuantificación de Naproxeno sódico
2. Realizar la validación del método espectrofotométrico para la cuantificación de
Naproxeno sódico en condiciones ideales a partir de la preparación de estándares
de trabajo a concentraciones conocidas y posteriormente determinar la aplicabilidad
del método.

Material

 10 vasos de precipitados de 100 mL


 10 vasos de precipitados de 100 mL
 10 vasos de precipitados de 250 mL
 10 pipetas volumétricas de 1 ml
 5 pipeta volumétricas de 5 mL
 5 pipeta graduada de 10 mL
 5 matraces volumétricos de 10 mL
 5 matraces volumétricos de 50 mL
 5 matraces volumétricos de 100 ml
 1 matraz volumétrico de 1 L
 5 espátulas
 5 pipetas Pasteur con bulbo
 5 vidrios de reloj

Equipo

 Balanza analítica
 Espectrofotómetro con celdas

Reactivos

 Naproxeno sódico
 NaOH

Equipo de seguridad
 Lentes de seguridad
 Bata de manga larga
 Par de guantes de látex

Procedimiento experimental.
Preparación de la solución
Solución stock 1
stock del estándar

Pesar 100 mg exactamente de Naproxeno


De la solución Stock, tomar 10 mL y colocarlo en
sódico y transferirlo a un matraz volumétrico de
un matraz volumétrico de 100 mL y aforar con
100 mL disolver con 50 mL de solución 0.1 M de
solución 0.1 M de NaOH
NaOH.

Agitar hasta lograr la solubilidad y llevar a


volumen. Determine la concentración de esta Determine la concentración de esta solución.
solución.

Determinar la
Solución stock 1
concentración.

Inmediatamente tome otra alícuota de 1 mL y Se pesan exactamente 100 mg de NAP, este se


aforar en un matraz volumétrico de 10 mL. transfiere a un matraz volumétrico de 100 mL.

Se añaden aproximadamente 50 ml de NaOH


Determinar la concentración. 0.1 M y se agita para disolverlo
completamente, una vez solubilizado se afora.

Se tendrán 3 muestras problemas cuya


concentración será determinada por los
alumnos
•Determinar la longitud de onda máxima realizando
Especificidad un barrido al estándar y a la muestra problema

•A partir de la solución stock del estándar 1, se


transfirieren 3, 4, 5, 6 y 7 mL a cinco matraces de
50 ml y se completó el volumen con disolvente 0.1
M de NaOH.
Linealidad •Esta determinación se realiza por triplicado cada
nivel. Determinar el rango de las concentraciones.

•La precisión se verificara mediante análisis de


repetibilidad (precisión del sistema).
•Los estudios de repetibilidad se realizaron
mediante la determinación de muestras al nivel
Precisión máximo 100 % (absorbancias de NAP).
•Realizar la determinación por sextuplicado.

•A tres muestras preparadas a los niveles de 80%,


100% y 120% se realiza la adicion de una
concetracion concoida de estándar.
•Se toman 2 mL de la solución stock 1 y se añaden
Exactitud antes de aforar la muestra.
•Con ello se busca obtener 84%, 104% y 105%. Se
determinaran los miligramos recuperados y el
porcentaje de recuperación.

•El límite de detección (LOD) es la cantidad más


baja de analito en una muestra que puede ser
Límite de detección detectada, pero no necesariamente cuantificada,
en las condiciones experimentales indicadas.
(LOD) y Límite de •Una vez determinado la concentración a 60%
cuantificación (LOQ) realizar diluciones para determinar la mínima
concentración de cuantificación y el límite de
detección.
Resultados

LINEALIDAD

1RA REPETICION 240 nm 280 nm 330 nm

80% 3 ml 0.548 A 0.088 A 0.039 A


90% 4 ml 0.723 A 0.117 A 0.053 A
100% 5 ml 0.904 A 0.162 A 0.076 A
110% 6 ml 1.065 A 0.190 A 0.080 A
120% 7 ml 1.184 A 0.280 A 0.095 A

2DA REPETICION 240 nm 280 nm 330 nm

80% 0.555 A 0.079 A 0.033 A


90% 0.737 A 0.121 A 0.055 A
100% 0.894 A 0.143 A 0.066 A
110% 1.048 A 0.178 A 0.081 A
120% 1.201 A 0.199 A 0.091 A

3RA REPETICION 240 nm 280 nm 330 nm

80% 0.570 A 0.088 A 0.035 A


90% 0.737 A 0.112 A 0.048 A
100% 0.886 A 0.145 A 0.066 A
110% 1.037 A 0.168 A 0.074 A
120% 1.188 A 0.201 A 0.091 A

PRECISIÓN

240 mn 280 mn 330 mn

1 100% 0.904 A 0.162 A 0.076 A


2 100% 0.894 A 0.143 A 0.066 A
3 100% 0.886 A 0.145 A 0.066 A

4 100% 1.036 A 0.172 A 0.078 A


5 100% 0.931 A 0.146 A 0.065 A
6. 100% 0.972 A 0.157 A 0.071 A
Muestras al 100% Media CV Desviación estándar
240 nm .937 6.08% .057
280 nm .154 7.14% .011
330 nm .070 7.14% .005

ESPECIFICIDAD

STOCK 1 240 nm 280 nm 330 nm


STOCK 2 263 nm 272 nm 331 nm

EXACTITUD

240 nm 280 nm 330 nm

80% 3.2 ml 0.461 A 0.101 A 0.054 A


80% 3.2 ml 0.554 A 0.137 A 0.085 A
80% 3.2 ml x x x

100% 5.2 ml 0.825 A 0.162 A 0.082 A


100% 5.2 ml 0.805 A 0.153 A 0.078 A
100% 5.2 ml x x x

120% 7.2 ml 1.074 A 0.209 A 0.103 A


120% 7.2 ml 1.119 A 0.199 A 0.089 A
120% 7.2 ml x x x

Muestras al 80% Media CV Desviación estándar


240 nm .507 12.82% .065
280 nm .119 21.00% .025
330 nm .069 30.43% .021

Muestras al 100% Media CV Desviación estándar


240 nm .815 1.71% .014
280 nm .157 3.82% .006
330 nm .080 2.50% .002

Muestras al 120% Media CV Desviación estándar


240 nm 1.096 2.82% .031
280 nm .204 3.43% .007
330 nm .096 9.37% .009
Muestra Absorbancia Concentración Concentración Concentración % de
inicial de la del patrón de la muestra Recuperación
muestra añadido + patrón
añadido
240 nm 0.06 M .1 M .062 2%
80% 280 nm 0.06 M .1 M .059 1%
330 nm 0.06 M .1 M .062 2%
240 nm .1 M .1 M .11 10%
100% 280 nm .1 M .1 M .1 90%
330 nm .1 M .1 M .12 20%
240 nm .14 M .1 M .143 3%
120% 280 nm .14 M .1 M .143 3%
330 nm .14 M .1 M .144 4%

CONCENTRACION DE LAS MUESTRAS

Muestras Concentración mg/ml Concentración µg/ml


STOCK 1 0.1 mg/ml 100 µg/ml
STOCK 2 0.01 mg/ml 10 µg/ml
80% 0.06 mg/ml 60 µg/ml
90% 0.08 mg/ml 80 µg/ml
100% 0.1 mg/ml 100 µg/ml
110% 0.12 mg/ml 120 µg/ml
120% 0.14 mg/ml 140 µg/ml

Conclusiones
Acorde a la política de calidad, todos los laboratorios de análisis deben trabajar
con el objetivo de generar y garantizar resultados confiables.
En esta práctica de validación analítica se aplicaron métodos de especificidad,
linealidad, precisión, y exactitud en los cuales se tomaron varias repeticiones de
cada una, esto tiene por objetivo representar que en promedio no hay variación en
cada una de las muestras, la validación del método espectrofotométrico para la
cuantificación de Naproxeno sódico trata de disminuir o controlar los factores que
llevan a la imprecisión o inexactitud de un dato obtenido, a través de la realización
de un trabajo analítico dentro de unos parámetros definidos generando una mayor
fiabilidad y aceptación de los datos.
Entonces, ¿Cuál es el propósito de la validación analítica?
Esta práctica se pretende que los estudiantes químicos estén en condiciones de
demostrar la calidad de sus resultados aplicando métodos analíticos, indicando un
grado de confiabilidad en que cada uno de estos parámetros, proporcionando
métodos reproducibles y reproducibles.
Bibliografía
- Fernando Orozco D., Análisis Químico Cuantitativo, Ed. Porrua S.A., México, 1994
- Douglas A. Skoog, Química Analítica, Ed. McGraw-Hill, México, 2000

- Julia Vinagre. (2016). Producción y manejo de datos de composición química de alimentos


en nutrición.. 2017, de CALIDAD DE METODOS ANALITICOS Sitio web:
http://www.fao.org/docrep/010/ah833s/ah833s15.htm

- El Instituto de Salud Pública de Chile. Diciembre de 2010.. Aspectos generales sobre la


validación de métodos”. En GUÍA TÉCNICA N º 1 (Validación de métodos y
determinación de la incertidumbre de la medición: 27-49) Santiago: Soraya Sandoval
Sección Metrología Ambiental y de Alimentos Departamento de Salud Ambiental .