Diagnóstico Microbiológico

Paciente

Pedido de Exame Diagnóstico e Terapia

Colheita Interpretação

Transporte
Resultado

Laboratório
Diagnóstico Microbiológico

 Produtos biológicos para análise

 Colheita e transporte de amostras

 Identificação do agente infeccioso:
 Métodos Fenotípicos

 Métodos Genotípicos

 Métodos Imunológicos
Colheitas a partir de:
 Excreções
 Secreções
 Tecidos
 Órgãos
Isolamento, Caracterização e Identificação de Bactérias
Período de incubação:

- Varia com o organismo que está sendo isolado

- Usualmente apresenta crescimento visível com 48 hs de incubação

Atmosfera de incubação

Aeróbios e anaeróbios facultativos Microaeróbios e Anaeróbios obrigatórios

Atmosfera ambiente
Atmosfera adequada através de
métodos especiais

Temperatura Usualmente 37ºC para patogênicas

Sistema para cultivo de anaeróbios
 Isolamento e Características das Colônias
Isolamento em meios Técnica do esgotamento por estrias
sólidos apropriados

Começa com a observação das

Processo de Identificação características das colônias isoladas

Critérios utilizados para a caracterização colonial

- Forma: puntiforme, circular, irregular, filamentosa, etc.;

- Tamanho: em milímetros;

- Elevação: achatada (alta, baixa), convexa, umbilicada, mamilonada;

- Bordos: inteiros, ondulados, lobados, denticulados, franjados, etc.;

- Superfície: lisa, rugosa;

- Estrutura: amorfa, granulosa, filamentosa;

- Caracteres ópticos: opaca, translúcida e transparente;

- Cromogenia ou Pigmentação: amarela, branca, preta, rósea, etc.;

Diferentes aspectos
de colônias
bacterianas em
meio sólido
 Isolamento e Características das Colônias

Esfregaços para colorações: - Coloração de Gram

- Coloração de Ziehl Neelsen (álcool-ácido resistentes)

Observação da Morfologia Microscópica:

- Forma
- Arranjos
-Tamanho
- Reação ao Gram
- Presença ou ausência de esporos (forma e localização)
- Flagelos (número e localização),
- Cápsulas
- Motilidade por exame a fresco (Exame Direto no microscópio)
Métodos fenotípicos - Observação direta
- Colorações

A= Gram positivo
Fluido CerebroEspinal B= Gram negativo
Bacillus antracis
Métodos fenotípicos - Observação direta - MO

Espiroquetas

Cryptococcus neoformans

Preparação Tzanck (infecção por vírus

herpes simplex ou varicella-zoster)
Métodos fenotípicos - Observação direta -
Imunocitoquímica
Métodos fenotípicos - Bioquímicos

• Fermentação de vários açúcares

• Hidrólise de gelatina, amido e outros
• Catalase, oxidase, coagulase
• metabolitos
 Identificação de Bactérias
Provas Bioquímicas (Metabolismo Bacteriano):
Estão fundamentadas principalmente em:

1. Na pesquisa de enzimas estruturais importantes no metabolismo do MO.

Fenilalanina desaminase, catalase,

descarboxilases, citocromo C oxidase

2. Na pesquisa de produtos metabólicos e catabólicos.

Acetoína, Indol, Ácidos orgânicos

3. Na sensibilidade a diferentes compostos.

Bacitracina, Optoquina, Novobiocina

 Teste de tolerância ao sal bile-esculina
Hidrólise de esculina em presença de bile
Glicose + Esculetina
3++ Citrato férrico
Fe
H2O
Complexo Negro
Esculina + Bile

Diferenciação de
Enterococos e Streptococos

Enterococos = positivos
Teste de CAMP
Streptococcos Beta-
hemolíticos do grupo B
(Streptococus agalactiae)

S. aureus produzem

Fator CAMP

reage

Beta-hemolisina de S. aureus

Alargamento da zona de hemólise

 Catalase
catalase Diferencia
2H2O2 → 2H2O + O2
Família Micrococcaceae

(Staphylococcus e Micrococcus) +
formação de bolhas
da família Streptococcaceae -
Citocromo oxidase
Importante na
identificação de
organismos que não
possuem a enzima ou
Anaeróbios
obrigatórios

Aeromonas
Pseudomonas
Enterobacteriaceas Pasteurella

negativo
positivo
Utilizado na identificação de bactérias
Gram negativas
 Citrato
Algumas bactérias podem obter energia utilizando o citrato
como única fonte de carbono

citratase
Citrato de sódio Produtos metabólicos alcalinos - pH

Azul de bromotimol Azul de bromotimol

citratase
(verde) pH 6,9 (azul) pH 7,6

Importante para identificação de alguns membros de Enterobacteriacea

E. coli Enterobacter e Klebsiella

Citrato negativo Citrato positivas

 Fermentação de Açúcares
Na reação de fermentação de açúcares, há a formação de ácidos
orgânicos como metabólitos

Diminuição do pH do meio

Indicador de pH (vermelho de fenol)

pH ácido = coloração amarela

Carboidratos que podem ser testados: glicose, lactose, sacarose, manose,

sorbitol, manitol, xilose, adonitol, ranose, melibiose, arabinose, celobiose,
dulcitol, trealose, entre outros.
 Fermentação do Manitol
Diferencia colônias de:

S. aureus Staphylococcus sp

Colônias amarelas circundadas Pequenas colônias vermelhas

por um halo da mesma cor circundadas por um halo
vermelho ou púrpura

Meio com 7,5 % de NaCl

 Produção de Indol

Reagente de Kovacs e Ehrlich

Meio rico em triptofano

 Vermelho de metila (VM)
Teste da produção de ácidos orgânicos a partir da fermentação da glicose

E. coli Enterobacter aerogenes

VM positivo VM negativo
 Voges-Proskauer (VP)
Fermentação da glicose pela via da acetoína

Klebsiella, Enterobacter, Hafnia e Serratia VP positivo

 Testes bioquímicos

Indol

VM
Indol

Citrato
VP
VM

Citrato
VP

E. coli Klebsiella/Enterobacter
 Motilidade
Crescimento em meio semi-sólido
Enterobacteriacea 0,4 % de ágar

Bactérias móveis Bactérias imóveis

Crescimento difuso que se

Crescimento somente na
estende lateralmente a partir
linha de inoculação
da linha de inoculação

+ -
Cultura-tipagem fenotípica e bioquímica
 Após cultura segue-se identificação:
Cultura-tipagem fenotípica e bioquímica
 Após cultura segue-se identificação:
 Sistemas Miniaturizados
Sistema API de Identificação Microbiana
Microtubos com
substratos
desidratados

Reações de cor são

lidas após incubação

Identificação

Catálogo analítico do
fabricante
Software de interpretação
15 sistemas de
identificação

550 espécies diferentes

 Sistemas Automatizados
de Identificação Microbiana
MiniAPI
Densitômetro que padroniza o inóculo
Substratos liofilizados

Leitura e interpretação dos resultados

VITEK
Cartões de teste VITEK
Inoculados e incubados pelo equipamento

Metodologia da turbidez para a

análise dos resultados

Teste de susceptibilidade a MO
Métodos de diagnóstico
 Fenotípicos
 Morfológicos
Baseados em cultura
 Fisiológicos/Bioquímicos
 Químicos
 Genotípicos
Podem ser
 Imunológicos independen-
tes de
cultura
Métodos genotípicos – sondas moleculares
 Pesquisa de DNA
Mycobacterium leprae e Chlamydia sp

Sondas Genéticas
 Métodos genotípicos
 PCR

Visualização

Utilização noutras técnicas

 Pesquisa de DNA

PCR
Reação da Polimerase em Cadeia
Métodos Imunológicos
Métodos Imunológicos
 Detecção de Antígenos
Teste de aglutinação: partículas de látex
adsorvidas com Ac específicos contra Ag
bacterianos

Método imunológico de suporte sólido:

ELISA
Cultura – Permite antibiograma