29. CROMATOGRAFÍA DE GASES.

29.1 INTRODUCCIÓN

La primera publicación sobre cromatografía de gases (GC) fue en 1952, mientras que los
primeros instrumentos comerciales se fabricaron en 1956. James y Martin separaron los
ácidos grasos por GC, recogieron el efluente de la columna y valoraron los ácidos grasos
individuales para cuantificación. GC ha avanzado mucho desde ese primer trabajo y ahora
se considera un campo maduro que se acerca a las limitaciones teóricas.

Los tipos de análisis que GC puede realizar son muy amplios. GC se ha utilizado para la
determinación de ácidos grasos, triglicéridos, colesterol y otros esteroles, gases, análisis de
solventes, agua, alcoholes y azúcares simples, así como oligosacáridos, aminoácidos y
péptidos, vitaminas, pesticidas, herbicidas, aditivos alimentarios, antioxidantes,
nitrosaminas, bifenilos policlorados (PCB), drogas, compuestos de sabor y muchos más. El
hecho de que GC se haya utilizado para estas diversas aplicaciones no significa
necesariamente que sea el mejor método; a menudo existen mejores elecciones.

GC es ideal para el análisis de sustancias volátiles térmicamente estables. Las sustancias

que no cumplen estos requisitos (por ejemplo, azúcares, oligosacáridos, aminoácidos,
péptidos y vitaminas) son más adecuadas para el análisis mediante una técnica tal como la
cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) o la cromatografía de fluidos supercríticos
(SFC). Sin embargo, los métodos de cromatografía de gases aparecen en la literatura para
estas sustancias.

Este capítulo analizará la preparación de muestras para GC, hardware de cromatografía de

gases, columnas y la teoría cromatográfica, ya que se aplica exclusivamente a GC. Los
textos dedicados al CG en general y las aplicaciones alimentarias en particular deben
consultarse para obtener más detalles.

29.2 PREPARACIÓN DE MUESTRA PARA CROMATOGRAFÍA DE GAS

29.2.1 Introducción

Generalmente no se puede inyectar directamente un producto alimenticio en un GC sin

alguna preparación de muestra. Las altas temperaturas del puerto de inyección darán como
resultado la degradación de constituyentes no volátiles y crearán una serie de picos de GC
falsos correspondientes a los productos de degradación volátiles formados. Además, muy a
menudo el constituyente de interés debe aislarse de la matriz de alimentos simplemente
para permitir la concentración de modo que esté en límites detectables para el GC o para
aislarlo de la mayor parte del alimento. Por lo tanto, uno generalmente debe hacer algún
tipo de preparación de muestra, aislamiento de componentes y concentración antes del
análisis GC.
La preparación de la muestra a menudo implica molienda, homogeneización o, de otro
modo, reducir el tamaño de partícula. Existe documentación sustancial en la literatura que
muestra que los alimentos pueden sufrir cambios durante el almacenamiento y la
preparación de la muestra. Muchos alimentos contienen sistemas activos de enzimas que
alterarán la composición del producto alimenticio. Esto es muy evidente en el área del
trabajo con sabor. La inactivación de los sistemas enzimáticos a través del procesamiento
térmico a alta temperatura y tiempo corto, el almacenamiento de la muestra en condiciones
de congelación, el secado de la muestra o la homogeneización con alcohol pueden ser
necesarios (véase el capítulo 5).

El crecimiento microbiano o las reacciones químicas también pueden ocurrir en los

alimentos durante la preparación de la muestra. Las reacciones químicas a menudo darán
como resultado la formación de volátiles que volverán a dar falsos picos en el GC. Por lo
tanto, la muestra debe mantenerse en condiciones tales que la degradación no ocurra. Los
microorganismos a menudo se inhiben por medios químicos (por ejemplo, fluoruro de
sodio), procesamiento térmico, secado o almacenamiento congelado.

29.2.2 Aislamiento de solutos de los alimentos

29.2.2.1 Introducción

El procedimiento de aislamiento puede ser bastante complicado dependiendo del

constituyente que se analizará. Por ejemplo, si se analizan los ácidos grasos unidos a los
triglicéridos en un alimento, primero se deben extraer los lípidos (ácidos grasos libres,
mono-, di- y triglicéridos, esteroles, vitaminas liposolubles, etc.) de la comida (por ejemplo,
mediante extracción con disolvente) y luego aislar solo la fracción de triglicéridos (p. ej.,
mediante cromatografía de adsorción sobre sílice). Los triglicéridos aislados entonces
tendrían que tratarse para hidrolizar primero los ácidos grasos de los triglicéridos y
posteriormente formar ésteres para mejorar las propiedades de cromatografía de gases. Las
dos últimas etapas se pueden llevar a cabo en una reacción mediante transesterificación
(por ejemplo, trifluoruro de boro en metanol) como se describe en el Cap. 8, secc. 8.3.1.6, y
Cap. 14, secc. 14.6.2. Por lo tanto, muchos pasos que involucran varios tipos de
cromatografía se pueden usar en la preparación de muestras para el análisis de GC.

El análisis de volátiles en alimentos (por ejemplo, envases o contaminantes

medioambientales, alcoholes y sabores o sabores extraños) puede ser una tarea más simple.
Estos materiales para análisis GC pueden aislarse mediante análisis de espacio de cabeza
(estático o dinámico), destilación, cromatografía preparativa (por ejemplo, extracción en
fase sólida, cromatografía en columna sobre gel de sílice), extracción con disolvente simple
o alguna combinación de estos métodos básicos. El procedimiento utilizado dependerá de la
matriz de los alimentos así como de los compuestos a analizar. Las consideraciones
principales son aislar los compuestos de interés a partir de constituyentes alimenticios no
volátiles (por ejemplo, carbohidratos, proteínas, vitaminas) o aquellos que interferirían con
GC (por ejemplo, lípidos). Algunos de los métodos cromatográficos que podrían aplicarse a
esta tarea se han discutido en el capítulo de cromatografía básica (capítulo 27). Los
métodos para el aislamiento de sustancias volátiles se tratarán brevemente en lo que
respecta al aislamiento de componentes para el análisis cromatográfico de gases.

Se debe enfatizar que el procedimiento de aislamiento utilizado es crítico para determinar

los resultados obtenidos. Una elección inadecuada de método o técnica deficiente en este
paso niega el mejor análisis de cromatografía de gases de los solutos aislados. Se ha
demostrado la influencia de la técnica de aislamiento en el análisis cromatográfico de gases
de compuestos aromáticos. Estos sesgos se discuten en las secciones que siguen y en más
detalle en los libros editados por Marsili y Mussinan y Morello. Si bien estos libros se
relacionan con el análisis de los compuestos aromáticos en los alimentos, las técnicas para
el aislamiento de estos volátiles son las mismas que se utilizan en el análisis de otros
volátiles en los alimentos.

29.2.2.2 Métodos de espacio de cabeza

Uno de los métodos más simples para aislar los compuestos volátiles de los alimentos es la
inyección directa de los vapores del espacio de cabeza sobre un producto alimenticio. Hay
dos tipos de muestreo de espacio de cabeza: muestreo de espacio de cabeza directo (o
estático) y muestreo de espacio de cabeza dinámico.

El muestreo directo del espacio de cabeza se ha utilizado ampliamente cuando se necesita

un análisis rápido y el análisis de componentes principales es satisfactorio. En equilibrio, el
espacio de cabeza de la muestra se toma usando una jeringa a prueba de gases y luego se
inyecta directamente en el GC. Los ejemplos de aplicaciones de métodos incluyen la
medición de hexanal como indicador de oxidación y 2-metilpropanal, 2 metilbutanal y 3-
metilbutanal como indicadores de pardeamiento no enzimático. La determinación de
solventes residuales en materiales de empaque también puede abordarse mediante este
método. Desafortunadamente, este método no proporciona la sensibilidad necesaria para el
análisis de trazas. Las limitaciones instrumentales típicamente limitan los volúmenes de
inyección del espacio de cabeza a 5 ml o menos. Por lo tanto, solo los volátiles presentes en
el espacio de cabeza a concentraciones superiores a 10-7 g / l de espacio de cabeza estarían
en niveles detectables [usando un detector de ionización de llama (FID)].

El muestreo dinámico de espacio de cabeza o purga y trampa ha tenido un amplio uso

en los últimos años. Este método de concentración puede implicar simplemente pasar
grandes volúmenes de vapores del espacio de cabeza a través de una trampa criogénica o,
alternativamente, una trampa de extracción y / o adsorción más complicada. Una trampa
criogénica simple ofrece algunas ventajas y desventajas. Una trampa criogénica (si está
diseñada y operada adecuadamente) recogerá los vapores del espacio de cabeza
independientemente de la polaridad compuesta y el punto de ebullición. Sin embargo, el
agua es típicamente la más volátil en un producto alimenticio, y, por lo tanto, uno recoge un
destilado acuoso del aroma del producto. Este destilado debe extraerse con un solvente
orgánico, secarse y luego concentrarse para el análisis. Estos pasos adicionales agregan
tiempo de análisis y brindan la oportunidad de contaminación de la muestra. Una técnica
más comúnmente utilizada son las trampas adsorbentes.

Las trampas adsorbentes ofrecen las ventajas de proporcionar un aislamiento volátil libre
de agua (el material de trampa normalmente tiene poca afinidad por el agua) y se
automatizan fácilmente. El adsorbente utilizado inicialmente para la captura del espacio de
cabeza era carbón. El carbón vegetal se extrajo con solvente (CS) o se desorbió
térmicamente con retrolavado (gas inerte) para recuperar los volátiles adsorbidos. El uso de
polímeros porosos sintéticos como material de trampa de espacio de cabeza ahora domina.
Inicialmente, Tenax (un polímero poroso muy similar al esqueleto de las resinas de
intercambio iónico) fue el más comúnmente utilizado; sin embargo, las combinaciones de
Tenax y otros polímeros ahora están viendo una mayor aplicación. Estos polímeros exhiben
buena estabilidad térmica y capacidad razonable. Las trampas adsorbentes generalmente se
colocan en un sistema cerrado y se cargan, desorbenan, etc., mediante el uso de sistemas
automáticos de válvulas multipuerto. El enfoque automatizado del sistema cerrado
proporciona tiempos reproducibles de retención de GC y la precisión cuantitativa necesaria
para algunos estudios. La principal desventaja de las trampas adsorbentes es su afinidad de
adsorción diferencial y capacidad limitada. Buckholz et al. han demostrado que los
componentes de aroma de maní más volátiles se romperán a través de dos trampas Tenax
en serie después de purgar a 40 ml / min durante solo 15 minutos. Por lo tanto, el perfil del
GC puede representar escasamente la composición real de los alimentos debido a los sesgos
introducidos por los pasos de purga y atrapamiento.

29.2.2.3 Métodos de destilación

Los procesos de destilación son bastante efectivos para aislar los compuestos volátiles de
los alimentos para el análisis de GC. La humedad del producto o el vapor exterior se usan
para calentar y codificar los volátiles de un producto alimenticio. Esto significa que se
produce una solución acuosa muy diluida de compuestos volátiles, y debe realizarse una
extracción con disolvente en el destilado para permitir la concentración para el análisis. El
método de destilación más comúnmente usado en la actualidad es alguna modificación del
cabezal de destilación original de Nickerson-Likens. En este aparato, se hierve una muestra
en un matraz lateral y un disolvente extractor en otro. El vapor del producto y los vapores
de disolvente se entremezclan y se condensan; el solvente extrae los volátiles orgánicos del
vapor condensado. El disolvente y el destilado extraído regresan a sus respectivos matraces
y se destilan para extraer nuevamente los volátiles del alimento. Si bien este método es
conveniente y eficiente, los artefactos de los solventes utilizados en la extracción, los
agentes antiespumantes, el suministro de vapor (agua contaminada), los cambios químicos
inducidos térmicamente y las fugas de aire de laboratorio contaminado en el sistema
pueden contaminar el aislado volátil.

29.2.2.4 Extracción de solvente

La extracción con solvente es a menudo el método preferido para la recuperación de

volátiles de los alimentos. La recuperación de compuestos volátiles dependerá de la
elección del disolvente y de la solubilidad de los solutos que se extraigan. La extracción
con solvente normalmente implica el uso de un solvente orgánico (a menos que sean de
interés los azúcares, aminoácidos o algunos otros componentes solubles en agua). La
extracción con solventes orgánicos limita el método al aislamiento de volátiles de alimentos
libres de grasa (por ejemplo, vinos, algunos panes, frutas y bayas, algunos vegetales y
bebidas alcohólicas), o se debe emplear un procedimiento adicional para separar la grasa
extraída de los volátiles aislados (por ejemplo, un método cromatográfico). De lo contrario,
la grasa interferirá con la concentración posterior y el análisis de GC.

Las extracciones con disolventes pueden llevarse a cabo en equipos bastante elaborados,
como extractores de CO2 supercríticos, o pueden ser tan simples como un proceso por lotes
en un embudo de decantación. Las extracciones por lotes pueden ser bastante eficientes si
se utilizan múltiples extracciones y sacudidas extensas. Los extractores continuos (líquido-
líquido) son más eficientes, pero requieren equipos más costosos y elaborados.

29.2.2.5 Extracción de fase sólida

Las extracciones discutidas anteriormente involucraron el uso de dos fases inmiscibles

(agua y un solvente orgánico). Sin embargo, una alternativa más nueva y de crecimiento
más rápido a tales extracciones es la extracción en fase sólida. En una versión de esta
técnica, una muestra líquida (más a menudo de base acuosa) se pasa a través de una
columna (2-10 ml vol) rellena con empaquetamiento cromatográfico o un disco filtrante
TeflonR (25-90min de diámetro) que tiene el empaque cromatográfico incrustado en eso. El
empaquetamiento cromatográfico puede ser cualquiera de varios materiales diferentes (por
ejemplo, resinas de intercambio iónico o un anfitrión de diferentes empaquetamientos de
columnas de HPLC de fase inversa o normal). Cuando se pasa una muestra a través del
cartucho o filtro, los solutos que tienen afinidad por la fase cromatográfica se retendrán en
la fase, mientras que aquellos con poca o ninguna afinidad pasarán. La fase se enjuaga a
continuación con agua, tal vez un disolvente débil (por ejemplo, pentano), y luego un
disolvente más fuerte (por ejemplo, diclorometano). El eluyente fuerte se elige de modo
que elimine los solutos de interés.

En general, la extracción en fase sólida tiene numerosas ventajas sobre las extracciones
líquidas y líquidas tradicionales que incluyen: (1) se requiere menos solvente; (2)
velocidad; (3) se necesita menos material de vidrio (menos costo y potencial de
contaminación); (4) mejor precisión y precisión; (5) evaporación de disolvente mínima para
análisis adicional (por ejemplo, GC); y (6) se automatiza fácilmente. La extracción en fase
sólida tiene limitaciones, pero las nuevas variaciones de la técnica buscan superar algunas
de ellas.

La versión más reciente de la extracción en fase sólida se llama microextracción en fase

sólida (SPME). Este método fue desarrollado originalmente para el trabajo ambiental. En
esta adaptación, la fase se une a un filamento de sílice finamente fundida
(aproximadamente del tamaño de una aguja de jeringa de 10 μl, figura 29-1). El filamento
se sumerge en una muestra o en el espacio superior sobre una muestra. Después del tiempo
de extracción deseado, el filamento se tira hacia una vaina metálica protectora, se retira de
la muestra y se fuerza a través del tabique de un cromatógrafo de gases donde los
componentes volátiles adsorbidos se desorben térmicamente del filamento (figura 29-2).

Figura 29-1. Esquema de un dispositivo de microextracción en fase sólida (SPME).

(Cortesía del Dr. Janusz Pawliszyn, Departamento de Química, Universidad de Waterloo,
Waterloo, Ontario, Canadá).

La SPME es una técnica de equilibrio y, por lo tanto, el perfil volátil (es decir, la
recuperación volátil) que se obtiene depende en gran medida de la composición de la
muestra y del control cuidadoso de todos los parámetros de muestreo. Esto incluye el
recubrimiento de fase específico y el grosor en el filamento / fibra utilizado. Varias fases
diferentes de fibra están disponibles comercialmente, y se pueden analizar compuestos con
un amplio rango de polaridad o volatilidad. PDMS (polidimetilsiloxano) es un
recubrimiento de fase no polar y se puede usar para extraer compuestos no polares.
Figura 29-2 Esquema que muestra las etapas implicadas en el uso de un dispositivo de
microextracción en fase sólida (SPME). (Reproducido con permiso de Supelco, Bellefonte,
PA 16823, EE.UU.).

los compuestos no polares. Analitos polares pueden ser extraídos con fases polares (por
ejemplo, poliacrilato y recubrimientos Carbowax). Fibras porosas tales como Carboxen o
recubrimiento divinilbenceno (DVB) son buenos para compuestos altamente volátiles. El
recubrimiento tiene diversos espesores de película. Fibras de película más gruesa (100 µm)
son mejores para los compuestos volátiles, mientras que las fibras de película delgada (7
µm y 30 µm) son mejores para moléculas más grandes. Fibras de fases múltiples (tales
como Carboxen / PDMS, Carboxen / DVB / PDMS) también están disponibles para extraer
ambos compuestos polares y no polares. Debido a su simplicidad, SPME es muy popular
para unos análisis de aroma volátiles de alimentos y bebidas. Mientras Harmon (22) señala
que el método puede dar excelentes resultados, Coleman (23) advierte que las fibras tienen
un rango lineal definido y la competencia entre los compuestos volátiles para sitios de
unión puede introducir errores. Otros motivos de preocupación son las limitaciones de
sensibilidad, la precisión y la vida del filamento. Si el filamento debe ser reemplazado
(rotura), existe el problema de la reproducibilidad de la nueva vs la vieja filamento.

Extracción dinámica en fase sólida (SPDE) es otra técnica para la extracción volátil.
SPDE es similar a SPME, excepto que el polímero se recubre el interior de una aguja
especial. Una jeringa hermética al gas se utiliza para SPDE para dibujar el espacio de
cabeza de los alimentos, y los volátiles se absorben por la fase. El proceso se puede repetir
muchas veces moviendo el émbolo hacia arriba y hacia abajo para lograr una máxima
absorción. La aguja entonces puede ser inyectada en el GC para análisis. Diferentes fases
están disponibles y el volumen de la fase es de aproximadamente 4.5 µl en comparación
con sólo 0.6 µl para SPME, por lo que el SPDE tiene menos problema con saturación
analito y la competencia.

Extracción de una barra de agitación de sorción (SBSE) es una nueva técnica para la
extracción volátil. En SBSE (Fig. 29-3), una barra magnética de agitación está encamisada
con vidrio, y el vidrio se recubre con una capa de absorbente (PDMS).

Figura 29-3 Diagrama del dispositivo de extracción (SBSE) barra de agitación de sorción.
(Cortesía de Gerstel, Inc., Linthicum, MD.)

La barra gira en la solución de muestra y absorbe los analitos a partir de la solución de

muestra. La barra de agitación también puede simplemente pasar el rato en el espacio de
cabeza para la extracción de volátiles del mismo modo que la SPME. Después de la
extracción, los volátiles entonces se desorben térmicamente y se introducen en un GC.
Barra de agitación tiene casi 50 veces más volumen de absorbente de SPME. Para SPME,
el volumen PDMS es de aproximadamente 0.5 µl; con SBSE, es 24 a 126 µl. Debido al
aumento del volumen de la fase absorbente, SBSE tiene mucho mayor sensibilidad que
SPME y tiene competencia mínimo y los efectos de saturación (24, 25). La alta sensibilidad
(PPT a PPG) y la flexibilidad de SBSE para los compuestos polares no polares y medianas
hace que sea un método efectivo y el ahorro de tiempo para la extracción de compuestos
volátiles traza de matrices complejas (25). La fase de PDMS es robusta; no absorbe el agua,
alcohol, o pigmento; y es muy bueno para la extracción de sabor en las bebidas alcohólicas.
Sin embargo, la fase de PDMS no es selectiva para los ácidos shorterchain y compuestos
polares. Otras fases de SBSE necesitan ser utilizado para analizar compuestos polares.

29.2.2.6 Inyección directa

En teoría, es posible analizar algunos alimentos por inyección directa de la comida en un

cromatógrafo de gases. Suponiendo que uno puede inyectar una muestra de 2 a 3 µl en un
GC y el GC tiene un límite de detección de 0.1 ng (0.1 ng / 2 µl), se podría detectar
compuestos volátiles en la muestra a concentraciones mayores de 50 ppb. Los problemas
con la inyección directa surgen debido a la degradación térmica de cualquiera de los
constituyentes de los alimentos no volátiles, daños a la columna de GC, disminución de la
eficiencia de la separación debido al agua en la muestra de alimento, la contaminación del
puerto de la columna y la inyección por materiales no volátiles, y la reducción de eficiencia
de la columna debido a la lenta vaporización de volátiles de los alimentos (temperatura del
puerto de inyección se reduce para minimizar la degradación térmica de los constituyentes
de los alimentos no volátiles). A pesar de estas preocupaciones, inyección directa se usa
comúnmente para determinar la oxidación en los aceites vegetales (26,27). A relativamente
grandes volumen de aceite (50-100 µl) se pueden inyectar directamente en un orificio de
inyección de un GC que ha sido rellena con lana de vidrio. Dado que los aceites vegetales
son razonablemente térmicamente estables y libres de agua, este método es particularmente
adecuado para el análisis de aceite.

Hay muchos otros enfoques para el aislamiento de los compuestos volátiles de los
alimentos. Algunos son simples variaciones de estos métodos, mientras que otros son
únicos. Varios artículos de revisión están disponibles que proporcionan una visión más
completa de la metodología (11, 12, 28).

29.2.3 La derivatización de la muestra

Los compuestos se desea determinar por GC deben ser térmicamente estable en las
condiciones de GC empleadas. Por lo tanto, para algunos compuestos (por ejemplo,
pesticidas, compuestos de aroma, PCBs, y contaminantes volátiles), el analista puede
simplemente aislar los componentes de interés de un alimento como se discutió
anteriormente y se inyecta directamente ellos en el GC. Para los compuestos que son
térmicamente inestables, son demasiado bajos en volatilidad (por ejemplo, azúcares y
aminoácidos), o el rendimiento pobre separación cromatográfica debido a la polaridad (por
ejemplo, fenoles o ácidos), una etapa de derivación debe ser incluida antes del análisis GC
(véase también caps. 10 y 14). Un listado de algunos de los reactivos utilizados en la
preparación de derivados volátiles para GC se da en la Tabla 29-1. Las condiciones de uso
de estos reactivos a menudo se especifican por el proveedor o se pueden encontrar en la
literatura.

Tabla 29-1 reactivos usados para preparar derivados volátiles de los alimentos para el
Análisis de Componentes GC

Reactivo Chemical Group Constituyente de alimentos

sililo reactivos Hidroxi, ácidos Azúcares, esteroles,

aminocarboxílicos aminoácidos

trimetilclorosilano /

hexametildisilazano

BSA [N, O-bis (trimetilsilil)

acetamida

BSTFA [N, O-bis (trimetilsilil)

trifluoroacetamida]

camisetas BuDMCS

(T-butyldimethylchlorosilyl /
imidazol)

esterificación de reactivos Ácidos carboxílicos Los ácidos grasos, aminas,

aminoácidos,

HCl metanólico triglicéridos, ésteres de

cera,

metóxido de sodio metanólico fosfolípidos, ésteres de

colesterol

N, N-dimetilformamida dimetil
acetal

trifluoruro de boro (o tricloruro) /

metanol
Diverso

El anhídrido acético / piridina Alcohólica y fenólica Fenoles, grupos hidroxilo

aromáticos,

alcoholes

N-trifluoroacetylimidizole / Hidroxi y aminas Lo mismo que arriba

N-heptafluorobutyrlimidizole

ácidos alquilborónicos Los grupos polares en los

átomos vecinos

O-alquilhidroxilamina Los compuestos que Cetosteroides,

contienen ambos hidroxi prostaglandinas

y grupos carbonilo

29.3 GAS HARDWARE y columnas

Las partes principales de un GC CROMATOGRAFÍA son el sistema de suministro de gas,

el puerto de inyección, horno, columna, detector, la electrónica, y el sistema de
grabadora / manejo de datos (Fig. 29-4). El hardware, así como los parámetros de
funcionamiento utilizado en cualquier análisis GC ha de ser precisa y completa registraron.
La información que debe ser incluida se presenta en la Tabla 29-2.
Figura 29-4 Diagrama de un sistema de cromatografía de gases. (Cortesía de Hewlett
Packard Co., Analítica Formación del cliente, Atlanta, GA.)

Tabla 29-2 hardware de cromatografía de gases y condiciones de operación de inscribirse

respecto de todas las separaciones GC

Parámetro Descripción

Muestra Nombre y volumen de inyección

Inyección Tipo de inyección [por ejemplo, dividir vs.

splitless y las condiciones (de inyección de
caudales puerto)]

Columna Longitud, diámetro (columnas de material

lleno), y el fabricante

Embalaje / fase Columnas compactas - soporte sólido; malla

de tamaño; revestimiento; cargando (%)

Columnas capilares - material de fase y el

espesor
Las temperaturas Inyector; detector; horno y toda la
información de programación

gas portador Velocidad de flujo (velocidad) y el tipo de

Detector Tipo

Outpu datos Atenuación y tabla de velocidades

29.3.1 Sistema de suministro de gas

El cromatógrafo de gases se requieren por lo menos un suministro de gas portador, y, lo

más probable, los gases para el detector (por ejemplo, hidrógeno y aire para un FID). Los
gases utilizados deben ser de alta pureza y todos los reguladores, líneas de gas, y accesorios
deben ser de buena calidad. reguladores de presión de alta calidad deben ser usados para
proporcionar un suministro de gas estable y continua. Los reguladores deben tener acero
inoxidable en lugar de los diafragmas de polímero ya que los polímeros se desprender
compuestos volátiles que pueden contribuir picos a la serie de análisis. Todas las líneas de
gas deben estar limpias y no contienen aceite de dibujo residual. Nitrógeno, helio,
hidrógeno y gases se utilizan normalmente como gas portador para el transporte de los
analitos en la columna GC. La línea de gas portador debe tener trampas (trampa de
humedad, trampa de oxígeno, y trampa de hidrocarburos) en línea para eliminar cualquier
humedad y los contaminantes del gas entrante. Estas trampas deben ser reemplazados
periódicamente para mantener la eficacia.

29.3.2 puerto de inyección

29.3.2.1 Hardware

El puerto de inyección sirve el propósito de proporcionar un lugar para la introducción de la

muestra, su vaporización, y posiblemente algo de dilución y la división. Las muestras
líquidas constituyen la mayor parte de los materiales analizados por GC, y siempre se
realizan por inyección de la jeringa (manual o automático). El puerto de inyección contiene
un tabique suave que proporciona un sello estanco a los gases pero puede ser penetrado por
una aguja de jeringa para la introducción de la muestra.
 Fig. 29-5 Esquema de un puerto de inyección GC. (Cortesía de
Hewlett-Packard Co., Analytical Customer Training, Atlanta, GA)

Las muestras pueden introducirse en el puerto de inyección utilizando una técnica de

jeringa manual o un sistema de muestreo automático. La inyección de muestra manual es,
por lo general, la mayor fuente de poca precisión en el análisis de GC. Generalmente se
eligen jeringas de diez microlitros, ya que son más duraderas que las microjeringas, y los
volúmenes de inyección de muestra típicamente varían de 1 a 3 μl. Estas jeringas
contendrán aproximadamente 0,6 μl en la aguja y el cilindro (esto se suma al medido en el
cilindro). Por lo tanto, la cantidad de muestra que se inyecta en el GC depende de la
proporción de este 0,6 μl que se incluye en la inyección y la capacidad del analista para leer
con precisión el volumen de muestra deseado en el cilindro de la jeringa. Esto puede ser
bastante variable para el mismo analista y ser muy diferente entre los analistas. Esta
variabilidad entre las inyecciones y los volúmenes de muestra pequeños inyectados es la
razón por la que los estándares internos (frente a los externos) son comunes para GC.

29.3.2.2 Técnicas de inyección de muestra

La muestra debe vaporizarse en el puerto de inyección para pasar a través de la columna

para la separación. Esta vaporización puede ocurrir rápidamente por evaporación de flash
(puertos de inyección estándar) o lentamente de una manera más suave (puerto de
inyección programado por temperatura o inyección en columna). La elección depende de la
estabilidad térmica de los analitos. Debido a la variedad de muestras y los requisitos
instrumentales, hay varios diseños diferentes de puertos de inyección disponibles.
29.3.2.2.1 Inyección dividida. Las columnas capilares tienen una capacidad limitada y es
posible que el volumen de inyección deba reducirse para permitir una cromatografía
eficiente. El puerto de inyección puede cumplir la función adicional de dividir la inyección
de modo que solo una parte del analito vaya a la columna (es decir, inyección dividida)
(figura 29-5). El puerto de inyección funciona aproximadamente a 20°C más que la
temperatura máxima del horno de columna. La muestra se puede diluir con gas portador
para lograr una división (se prefiere 1:50 a 1:100), por lo que solo una pequeña porción (1
parte) del analito (más exactamente, 1 parte del flujo de gas) va a la columna, y la mayoría
(44-99 partes) de los analitos se ventilan a la ventilación dividida. La alta relación de
división típicamente da un pico agudo y estrecho.

29.3.2.2.2 Inyección Splitless. Para aumentar la sensibilidad, se puede usar un modo de

inyección sin división. En inyección splitless, la válvula de ventilación dividida se cierra y
todo el analito va a la columna (figura 29-5). De forma similar a la inyección dividida, la
temperatura del inyector se opera a 20°C por encima de la temperatura máxima del horno
de columna. La inyección Splitless requiere configurar la temperatura inicial de la columna
al menos 20°C por debajo del punto de ebullición del solvente de la muestra, por lo que el
solvente puede recondensarse en la columna para una cromatografía aceptable de los
compuestos de elución temprana.

29.3.2.2.3 Inyección programada a temperatura. Para puertos de inyección programados por

temperatura, la muestra se introduce en un puerto de temperatura ambiente y

luego está programada la temperatura a alguna temperatura deseada. Dado que la muestra
no se introduce en el inyector caliente, se desea la técnica para analitos sensibles a la
temperatura. Además, esta técnica es muy útil para inyectar una gran cantidad de muestra
cuando se usa junto con un modo de inyección split / splitless para aumentar la
sensibilidad. Por ejemplo, se pueden inyectar 10 μl de muestra líquida a baja temperatura
usando una alta relación de división para permitir que el solvente se ventile y luego el modo
de inyección puede cambiarse a "splitless" a medida que el inyector se calienta para
transferir todos los analitos a la columna .

29.3.2.2.4 Inyecciones en columna. La inyección en columna es una técnica mediante la

cual la muestra se introduce directamente en la columna cuya temperatura se encuentra en
la del horno GC o la de la sala. La muestra se volatiliza lentamente a medida que el horno
se calienta. La temperatura inicial del horno debe estar por debajo del punto de ebullición
del solvente. Esta técnica es buena para analitos térmicamente lábiles.

29.3.2.2.5 Inyección de desorción térmica. Los volátiles pueden introducirse en la cabeza

de la columna GC para la separación cromatográfica directamente de las muestras de
alimentos a través de la desorción térmica. La muestra se calienta en una unidad de
desorción térmica, y los volátiles se llevan a través de un gas de purga a un inyector
dividido / sin división. Se necesita un crioenfoque con nitrógeno líquido en el inyector o en
la columna para obtener picos agudos. Alternativamente, los volátiles pueden retenerse
usando una trampa tal como TenaxTM durante la etapa de purga y luego desorberse
térmicamente sobre la columna. Las muestras pueden extraerse con SPME o SBSE
descritas anteriormente (Sección 29.2.2.5) y luego desorberse térmicamente en la columna
para su análisis. Esta técnica ha ganado popularidad para analizar los compuestos de aroma
volátiles en alimentos, incluidas las frutas (29, 30) y el vino (31).

29.3.3 Horno

El horno controla la temperatura de la columna. En GC, se aprovecha tanto la interacción

del analito con la fase estacionaria como el punto de ebullición para la separación de
compuestos. Por lo tanto, la inyección a menudo se realiza a una temperatura más baja del
horno y luego se programa la temperatura a una temperatura elevada. Si bien los análisis se
pueden realizar isotérmicamente, el tiempo de elución y la resolución de los compuestos
dependen en gran medida de la temperatura, por lo que los ciclos programados de
temperatura son los más comunes. Debería ser obvio que las temperaturas más altas harán
que la muestra eluya más rápido y, por lo tanto, tendrá un costo de resolución. Las tasas del
programa de temperatura del horno pueden variar desde tan poco como 0,1 ° C / hora a la
velocidad máxima de calentamiento a temperatura que el GC puede proporcionar. Una
frecuencia de 2-10 ° C / min es la más común.

La columna capilar también se puede calentar directamente con un cable calefactor aislado
basado en tecnología de baja masa térmica (LTM). Un sensor de temperatura está montado
en la columna. La columna, el cable de calentamiento y el sensor están enrollados y
envueltos con papel de aluminio. La columna puede calentarse uniformemente muy
rápidamente para mejorar la separación y la eficiencia. Como el sistema no tiene mucho
volumen vacío y otros materiales de aislamiento, se enfría muy rápido. El ciclo de
calentamiento y enfriamiento total es mucho más corto que el horno de GC estándar
tradicional, lo que lo hace ideal para un rápido análisis de GC. El módulo está disponible
con casi cualquier columna capilar GC estándar.

29.3.4 Columna y fases estacionarias

La columna GC puede estar empaquetada o capilar. La cromatografía temprana se realizó

en columnas empaquetadas, pero las ventajas de la cromatografía capilar superan con
creces las de la cromatografía en columna empaquetada, por lo que ya no se venden
algunos instrumentos de columna compactada (figura 29-6). Mientras que algunos utilizan
cromatografía de gases de alta resolución (HRGC) para designar GC capilar, hoy en día GC
significa cromatografía capilar para la mayoría de las personas.

29.3.4.1 Columnas empaquetadas

La columna empacada se fabrica con mayor frecuencia de acero inoxidable o vidrio y
puede tener un diámetro exterior de 1,6 a 12,7 mm y una longitud de 0,5 a 5,0 m
(generalmente de 2 a 3 m). Se empaqueta con un material granular que consiste en un
recubrimiento "líquido" sobre un soporte sólido supuestamente inerte. El soporte sólido es
con mayor frecuencia tierra de diatomeas (esqueletos de algas) que ha sido purificada,
posiblemente modificada químicamente (por ejemplo, tratada con silano), y luego tamizada
para proporcionar un tamaño de malla definido (60/80, 80/100 o 100/120).

La carga de líquido generalmente se aplica al soporte sólido al 1-10% en peso del soporte
sólido. Si bien el recubrimiento líquido puede ser uno de los aproximadamente 200
disponibles, los más comunes son las fases a base de silicona (metilo, fenilo o ciano
sustituido) y Carbowax (a base de éster).

La fase líquida y la carga porcentual están determinadas por el análisis deseado. La

elección del líquido es típicamente tal que tiene una polaridad similar a la de los analitos
que se van a separar. La carga influye en el tiempo de análisis (el tiempo de retención es
proporcional a la carga), la resolución (generalmente mejorada al aumentar la carga de fase,
dentro de los límites) y el sangrado. Los revestimientos líquidos son algo volátiles y se
perderán de la columna a altas temperaturas (esto depende de la fase misma). Esto da como
resultado una línea base creciente (sangrado de columna) durante la programación de
temperatura.

Se han desarrollado hasta 200 diferentes fases líquidas para GC. Como GC ha cambiado de
columnas empaquetadas a capilares, ahora se usan menos fases estacionarias ya que la
eficiencia de la columna ha sustituido a la selectividad de fase (es decir, la alta eficiencia ha
resultado en mejores separaciones aunque la fase estacionaria sea menos adecuada para la
separación). Ahora encontramos menos de una docena de fases de uso común (cuadro 29-
3). Las fases más duraderas y eficientes son las basadas en polisiloxano (-Si-O-Si-).

La selección de fase estacionaria implica cierta intuición, conocimiento de la química y

ayuda del fabricante de la columna y de la literatura. Existen reglas generales, como elegir
fases polares para separar los compuestos polares y la fase de columna inversa o basada en
fenilo para separar los compuestos aromáticos. Sin embargo, la alta e fi ciencia de las
columnas capilares a menudo da como resultado la separación aunque la fase no sea
óptima. Por ejemplo, una fase de metil silicona sustituida con fenilo al 5% aplicada a una
columna capilar separará los
compuestos tanto polares como no
polares y es un revestimiento de fase
comúnmente utilizado.
 Fig. 29-6 Comparación de la separación por cromatografía de gases
de la base de perfume utilizando columnas compactadas (superior) y
capilares (inferior). (Cortesía de Hewlett-Packard Co., Analytical
Customer Training, Atlanta, GA).

29.3.4.2 Columnas capilares

La columna capilar es un tubo hueco de vidrio de sílice fundida (<100 ppm de impurezas)
con una longitud variable de 5 a 100 m. Las paredes son tan delgadas, ca. 25 μm, que son
flexibles. Las paredes exteriores de la columna están recubiertas con un material de
poliamida para mejorar la resistencia y reducir la rotura. Los diámetros internos de la
columna son típicamente 0.1 mm (microbore), 0.2-0.32 mm (capilar normal), o 0.53 mm
(megabore).

Las columnas de megabore (0,53 mm i.d.) se diseñaron inicialmente para reemplazar

columnas empaquetadas sin modificación de hardware de instrumentación. Las columnas
capilares más comúnmente usadas son ahora 0.32 mm y 0.25 mm i.d. columnas Las
columnas de diámetro más pequeño (0,10 mm y 0,18 mm i.d.) se utilizan para el análisis
rápido de GC. Las longitudes más comunes de la columna GC son 15, 30 y 60 m, aunque
las columnas especiales pueden superar los 100 m. Las columnas más largas requieren un
tiempo de análisis más largo. Aunque una columna más larga proporciona una resolución
mejorada, este beneficio de una mejor separación no es particularmente obvio debido a la
potencia de alta resolución de la columna GC capilar.

El recubrimiento líquido se une químicamente a las paredes de vidrio de las columnas

capilares y se reticula internamente para proporcionar grosores de fase que varían de 0,1 a 5
μm. El grosor de la película afecta directamente la separación. Las películas más gruesas
retienen los compuestos durante más tiempo en la fase estacionaria, por lo que los analitos
tendrán una mayor interacción con la fase estacionaria para lograr la separación.
Generalmente, se debe usar una columna con filtro grueso para separar los compuestos muy
volátiles. Por ejemplo, una columna FFAP con un espesor de película de 1 μm puede
contener y separar eficazmente el sulfuro de dimetilo (H2S) y otros compuestos de azufre
altamente volátiles (32). Sin embargo, una película gruesa también dará una línea base más
alta debido a sangrado. Normalmente se usa una columna de película delgada (0,25 μm)
para separar compuestos de alto peso molecular; los analitos permanecerán en la fase
estacionaria menos tiempo. Las columnas de película delgada también tienen menos
reproducción a alta temperatura y se usan con frecuencia para GC-MS.

La mayoría de los compuestos se pueden separar usando columnas no polares al 5% de

fenil 95% dimetilpolisiloxano (por ejemplo, DB-5, HP-5, RTX-5). Este tipo de columna
tiene un rango de temperatura muy amplio (-60 ° C a 325°C) y es muy estable. Sin
embargo, para separar compuestos muy polares, tales como alcoholes y ácidos grasos
libres, se necesita una columna polar tal como XX-WAX (polietilenglicol) o XX-FFAP
(polietilenglicol tratado con ácido nitrotereftálico). Una columna tipo cera tiene un poder de
separación superior; sin embargo, tiene un rango de temperatura utilizable estrecha (40-
240°C). Sangra mucho a alta temperatura y se vuelve sólido (pérdida de potencia de
separación) a baja temperatura. También es sensible al oxígeno residual en el gas portador,
y se deteriora rápidamente si no se elimina el oxígeno en el gas portador. Se han
desarrollado otras columnas de fase especial para mejorar la resolución específica. Las
columnas basadas en cianopropilo (SP-2560, CP-Sil 88) son buenas para los ésteres de
ácidos grasos trans. Una columna basada en ciclodex es útil para separar estereoisómeros
de muchos compuestos de sabores.

a Las notas de aplicación específicas de los proveedores de columnas proporcionan

información para elegir una columna específica.
b Las constantes McReynolds se usan para agrupar fases estacionarias en función de las
propiedades de separación.

c Las fases estacionarias tienen límites de temperatura superior e inferior. El límite inferior
de temperatura a menudo se debe a un cambio de fase (líquido a sólido) y límite de
temperatura superior a una volatilización de fase.

La mayoría de los compuestos se pueden separar usando materiales no polares Columnas

con 5% de fenil 95% dimetilpolisiloxano (por ejemplo, DB-5, HP-5, RTX -5). Este tipo de
columna tiene un amplio intervalo de temperaturas (- 60 ◦ C a 325◦ C) y es muy estable. Sin
embargo, separar muy polar compuestos, tales como alcoholes y ácidos grasos libres,
una se necesita una columna polar como XX-WAX (polietileno) glicol) o XX-
FFAP (polietilenglicol tratado con ácido nitrotereftálico). Una columna tipo cera
tiene poder de separación superior; sin embargo, tiene un estrecho intervalo de temperatura
utilizable (40- 240 ◦ C). Sangra mucho a alta temperatura y se vuelve sólido (separación
perdida potencia) a baja temperatura.También es sensible al residuo de oxígeno en el gas
portador, y se deteriora rápidamente si el oxígeno no se elimina en el transportista gas. Se
han desarrollado otras columnas de fase especial para mejorar la resolución
específica. Cyanopropylbasedlas columnas (SP-2560, CP- Sil 88) son buenas
para trans ésteres de ácidos grasos. Una columna basada en ciclodex es útil
para estereoisómeros separados de muchos compuestos de sabor.

29.3.4.3 Cromatografía gas-sólido (PLOT)

La cromatografía gas-sólido es un área muy especializada de la cromatografía realizada sin

usar un líquido fase - la interacción del analito es con un poroso material. Este material ha
sido aplicado tanto a columnas empaquetadas y capilares. Para la columna capilar, el
material poroso es química o físicamente

( por deposición) cubierto en la pared interna de el capilar y la columna se llaman capas

porosas columna de tabulación abierta (PLOT). El más popular materiales porosos son
óxido de alúmina, carbono, molecular tamiz y polímeros sintéticos
como Poropak o Chromosorb (nombres comerciales de polímeros basados
en vinilbenceno). Las separaciones generalmente involucran agua o otros compuestos muy
volátiles como el gas headspace composición (N2 , O2 , CO2 , CO) en alimentos envasados
y etileno durante la maduración y el almacenamiento de la fruta.

29.3.5 Detectores

Hay numerosos detectores disponibles para GC, cada uno ofreciendo ciertas ventajas en
cualquier sensibilidad (por ejemplo, captura de electrones) o selectividad (p. ej., emisión
atómica detector). Los detectores más comunes son el FID,conductividad
térmica ( TCD ), captura de electrones ( ECD ), llama fotométrica ( FPD ), llama
pulsada fotométrica ( PFPD ) y fotoionización ( PID ) detectores. los principios
operativos y aplicaciones alimentarias de estos los detectores se discuten a
continuación. Las características de estos detectores se resumen en la Tabla 29-4 .

29.3.5.1 Detector de conductividad térmica

29.3.5.1.1 Principios de funcionamiento Como el gas portador pasa sobre un filamento

caliente (tungsteno), enfría el filamento a una cierta velocidad en función del gas
portador velocidad y composición La temperatura del filamento determina su resistencia a
la corriente eléctrica.
29.7 F igura Esquema del detector de conductividad térmica. (Cortesía de Hewlett-Packard
Co., Analytical Entrenamiento al cliente , Atlanta, GA) enfriamiento el efecto en el
filamento es típicamente menor, lo que resulta en un aumento de temperatura en el
filamento y un aumento en resistencia que es monitoreada por la electrónica del
GC. Los TCD de estilo antiguo usaban dos detectores y dos adaptadores columnas; un
sistema sirvió como referencia y el otro como el sistema analítico. Los diseños más nuevos
solo usan un detector (y columna), que emplea un operador valor de conmutación de gas
para pasar alternativamente gas portador o efluente de columna a través del detector
(figura 29-7 ). los la señal es entonces un cambio en la refrigeración del detector como una
función de qué gas pasa a través del detector desde la columna analítica o suministro de gas
portador (flujo de gas de referencia).

La elección del gas portador es importante ya que las diferencias entre sus propiedades
térmicas y los analitos determinar la respuesta. Mientras que el hidrógeno es la mejor
opción, el helio se usa más comúnmente ya que el hidrógeno es inflamable.

29.3.5.1.2 Aplicaciones Las propiedades más valiosas de este detector son que
es universal en respuesta y no destructivo para la muestra. Por lo tanto, se usa
en aplicaciones de alimentos para las cuales no hay otro detector que responderá
adecuadamente a los analitos (por ejemplo, agua, gases permanentes, CO) o cuando el
analista desea recuperar los compuestos separados para más análisis (por ejemplo, atrapar
el efluente de la columna para infrarrojos, resonancia magnética nuclear ( RMN ) o análisis
sensorial).

No encuentra un uso amplio porque es relativamente insensible, y a menudo el analista

desea especificidad en respuesta del detector para eliminar compuestos que interfieren del
cromatograma

29.3.5.2 Detector de ionización de llama

29.3.5.2.1 Principios de funcionamiento Como compuestos eluidos de la columna analítica,

se queman en una llama de hidrógeno (figura 29-8 ). Un potencial (a menudo 300 V) se
aplica a través de la llama. La llama llevará una corriente en todo el potencial que es
proporcional a los iones orgánicos presentes en la llama de la quema de un compuesto
orgánico. La corriente que fluye a través de la llama se amplifica y se graba. El
FID responde a los orgánicos en una base de peso. Da virtualmente sin respuesta
a H 2 O , NO 2 , CO 2 , H 2 S y limitado respuesta a muchos otros compuestos. La
respuesta es mejor con compuestos que contienen enlaces C - C o C - H.
29-8

29-8 F igura Esquema del detector de ionización de llama diseñado para uso con columnas
capilares. (Cortesía de Hewlett Packard Co., Analytical Entrenamiento al cliente, Atlanta,
GA)

29.3.5.2.2 Aplicaciones El analista de alimentos es más trabajando a menudo con

compuestos orgánicos, a los cuales esto detector responde bien. Su muy buena sensibilidad,
amplia rango lineal en respuesta (necesario en cuantificación ), y confiabilidad hacen que
este detector sea la elección para la mayoría del trabajo de comida. Por lo tanto, este
detector se utiliza para prácticamente todos los análisis de alimentos para los cuales un
detector específico es no deseado o la destrucción de la muestra es aceptable (columna el
eluyente se quema en llamas). Esto incluye, para ejemplo, estudios de sabor, análisis de
ácidos grasos, carbohidratos análisis, esteroles, contaminantes en los alimentos
y antioxidantes.

29.3.5.3 Detector de captura de electrones

29.3.5.3.1 Principios de funcionamiento El ECD contiene un cobre radiactivo que emite

electrones a medida que se somete decaimiento (Fig. 29-9 ). Los electrones son
recolectados en un ánodo, y la corriente permanente es monitoreada porelectrónica de
instrumentos. Como un analito eluye del Columna GC, pasa entre la lámina radioactiva y el
ánodo. Compuestos que capturan electrones reducir la corriente permanente y así dar un
valor medible respuesta. Compuestos halogenados o aquellos con enlaces dobles
conjugados dan el mayor detector respuesta. Desafortunadamente este detector se
satura con bastante facilidad y por lo tanto tiene un lineal muy limitado rango de respuesta.

29-9

29-9 F igure Esquema del detector de captura de electrones. (Cortesía de Hewlett-Packard

Co., Analytical Entrenamiento al cliente, Atlanta, GA)

29-10

29.3.5.4 Detector fotométrico de llama y

Detector fotométrico de llama pulsada

29.3.5.4.1 Principios de funcionamiento El detector FPD funciona quemando todos

los analitos eluidos de la analítica columna y luego medir longitudes de onda específicas de
la luz que se emite desde la llama usando un filtro y fotómetro (figura 29-10 ).
29-10 Figura Esquema del detector fotométrico de llama. (Cortesía de Hewlett-Packard
Co., Analytical Entrenamiento al cliente, Atlanta, GA)

527-529

Las longitudes de onda de luz que son adecuadas en términos de intensidad y singularidad
son características del azufre (S) y el fósforo (P). Por lo tanto, este detector proporciona una
señal muy mejorada para estos dos elementos (varios miles de veces para moléculas
orgánicas que contienen S o P frente a moléculas orgánicas que no contienen S o P). La
respuesta del detector a las moléculas que contienen S no es lineal y, por lo tanto, la
cuantificación debe realizarse con cuidado. El PFPD es muy similar al FPD. A diferencia
de la detección fotométrica de llama (FPD) tradicional, que utiliza una llama continua, la
PFPD se enciende, se propaga y auto termina 2-4 veces por segundo (figura 29-11). Los
elementos específicos tienen su propio perfil de emisión: los hidrocarburos completarán la
emisión temprana, mientras que las emisiones de azufre comenzarán en un momento
relativamente posterior a la combustión. Por lo tanto, un "retraso de compuerta"

temporizado puede permitir selectivamente que solo se integren las emisiones debidas al
azufre, produciendo un cromatograma limpio. Este "retardo de puerta" temporizado mejora
enormemente la sensibilidad. El PFPD puede detectar compuestos que contienen azufre a
un límite de detección mucho más bajo que casi todos los demás métodos de detección
(33).
29.3.5.4.2 Aplicaciones

Tanto el FPD como el PFPD han encontrado aplicaciones alimentarias importantes en la

determinación de pesticidas organofosforados y compuestos de azufre volátiles en general.
La determinación de los compuestos de azufre ha sido típicamente en relación con los
estudios de sabor.

29.3.5.5 Detector de fotoionización

29.3.5.5.1 Principios de funcionamiento

El detector de fotoionización (PID) usa radiación ultravioleta (UV) (usualmente 10.2 eV)
para ionizar
analitos eluidos de la
columna analítica
(figura 29- 12). Los iones
son acelerados por
un electrodo de
polarización a
un electrodo de
recolección.
La pequeña
corriente formada se
magnifica por el
electrómetro
del GC para
proporcionar
una señal medible. Este
detector ofrece las
ventajas de ser bastante
sensible y no destructivo
y puede operarse en un
modo de respuesta selectiva. La selectividad proviene de poder controlar la energía de la
ionización, que determinará las clases de compuestos que se ionizan y así se detectan.
29.3.5.5.2 Aplicaciones

El PID encuentra uso primario en análisis para los cuales se requiere una sensibilidad
excelente de un detector no destructivo. Esta es la mayoría de las veces una aplicación de
sabor en la que el analista desea oler el efluente de GC para determinar el carácter sensorial
de los picos de GC individuales. Si bien este detector podría tener un uso más amplio, la
amplia disponibilidad del FID (que es adecuado para la mayoría de las mismas
aplicaciones) cumple con la mayoría de estas necesidades.

29.3.5.6 Detector de conductividad electrolítica

29.3.5.6.1 Principios de funcionamiento

Los compuestos que entran en el detector de conductividad electrolítica (ELCD) se mezclan

con un gas reactivo (oxidante o reductor dependiendo del análisis) en un tubo de reacción
de níquel que produce especies iónicas. Estos productos se mezclan con un disolvente
desionizado, los iones que interfieren se eliminan del efluente y el producto de
transformación del analito iónico se detecta dentro de la celda de conductividad del
electrolito. Este detector puede usarse para la detección específica de moléculas que
contienen azufre, nitrógeno o halógeno. Por ejemplo, cuando se opera en el modo
nitrógeno, el analito se mezcla con gas H2 y se hidrogena sobre un catalizador de níquel a
850 ° C. Los productos de hidrogenación ácida se eliminan del efluente mediante el paso a
través de una trampa Sr (OH) 2 y el NH3 del analito pasa a la celda de conductividad donde
se mide (34).

29.3.5.6.2 Aplicaciones
Este detector se puede usar en muchas aplicaciones para las cuales se desea la especificidad
del elemento. Los ejemplos serían el análisis de pesticidas, herbicidas, nitrosaminas o
sabores. El ELCD es muy selectivo y bastante sensible con límites de detección de 0.1-1 pg
de compuestos clorados, 2 pg de azufre y 4 pg de nitrógeno.

29.3.5.7 Detector termoiónico

29.3.5.7.1 Principios de funcionamiento

El detector termoiónico (también llamado detector de fósforo de nitrógeno, NPD) es un FID

modificado en el que se utiliza un cordón cerámico no volátil para suprimir la ionización de
hidrocarburos cuando pasan a través de un combustible a baja temperatura o un plasma de
hidrógeno. El cordón cerámico se compone típicamente de rubidio que se calienta a 600-
800 ° C. Lo más común es que este detector se use para la detección selectiva de
compuestos que contienen nitrógeno o fósforo. No detecta nitrógeno inorgánico o
amoniaco.

29.3.5.7.2 Aplicaciones

Este detector se utiliza principalmente para la medición de clases específicas de compuestos

de sabor, nitrosaminas, aminas y pesticidas.

29.3.5.8 Técnicas cromatográficas de gas con guiones

Las técnicas de cromatografía de gases con guiones son aquellas que combinan GC con otra
técnica importante. Ejemplos son GC-AED (detector de emisión atómica), GC FTIR
(transformada de Fourier infrarroja) y GC-MS (espectrometría de masas). Si bien todas las
técnicas son métodos de análisis establecidos en sí mismas, se convierten en herramientas
poderosas cuando se combinan con una técnica como GC. GC proporciona la separación y
la técnica con guiones del detector. Desde hace mucho tiempo, se sabe que GC-MS es la
herramienta más valiosa para la identificación de compuestos volátiles (ver Capítulo 26).
La MS, sin embargo, puede realizar la tarea de servir como un detector específico para el
GC centrándose selectivamente en fragmentos de iones únicos para los analitos de interés.
El analista puede detectar y cuantificar componentes sin su resolución de cromatografía de
gases de esta manera. Se pueden hacer las mismas afirmaciones sobre GC-FTIR (ver
Capítulo 24). El FTIR puede servir fácilmente como un detector de GC. Una combinación
relativamente nueva es GC-AED. En esta técnica, el efluente de la columna GC ingresa a
un plasma de helio generado por microondas que excita los átomos presentes en los
analitos. Los átomos emiten luz a sus longitudes de onda características, y esta emisión se
monitorea usando un detector de rayos de diodo similar al usado en HPLC. Esto resulta en
un detector elemental muy sensible y específico.

29.3.5.9 Cromatografía de gases multidimensional

La cromatografía de gases multidimensional (MDGC) aumenta en gran medida la
capacidad de separación de la cromatografía de gases (35). Simplemente acoplando dos
columnas GC, cada una de polaridad opuesta, se puede lograr una mejora general en la
separación (36). Sin embargo, esta operación en tándem de columnas GC en realidad no
representa multidimensionalidad, sino que se asemeja al uso de una columna de fase
estacionaria mixta (35). El verdadero MDGC implica un proceso conocido como
separación ortogonal en el que una muestra se dispersa primero en una columna, y las
submuestras simplificadas se aplican luego en otra columna para una separación posterior.
Las técnicas de MDGC se pueden dividir en general en dos clases: (1) convencional, o
"corte de corazón", MDGC y (2) cromatografía de gases bidimensional exhaustiva (GC ×
GC).

29.3.5.9.1 GC bidimensional convencional

El GC bidimensional convencional se consigue utilizando columnas capilares acopladas

para las cuales una pequeña porción, o corte de corazón, del efluente de la primera columna
("preseparación") se transfiere a la segunda columna ("analítica"). El concepto de MDGC
convencional es casi idéntico al de las operaciones de GC preparativas, para lo cual se
utiliza una columna para obtener una fracción parcialmente separada de una mezcla de
aromas compleja, que luego se reinyecta en otra columna de GC, generalmente con una
fase estacionaria opuesta, para mayor separación La única diferencia es que con MDGC no
hay requisitos para la recolección manual del efluente obtenido de la columna de
preaparación ya que las dos columnas están conectadas directamente. Debido a que la
segunda columna en el sistema MDGC solo se inyecta con una pequeña porción de la
muestra total a la vez, una gran cantidad de la muestra puede inyectar en la primera
columna sin la preocupación de que la banda cromatográfica se corra durante las
separaciones analíticas (37). Por lo tanto, los compuestos traza se pueden enriquecer
fácilmente para una detección e identificación más exitosa. La técnica MDGC es
particularmente útil para estudiar enantiómeros de compuestos de sabor. El compuesto
interesado puede ser "cortado en el corazón" y transferido a una columna analítica con una
fase estacionaria enantioselectiva para una buena separación de compuestos quirales
específicos

29.3.5.9.2 GC integral bidimensional

El MDGC bidimensional integral se encuentra entre las técnicas de cromatografía de gases
bidimensionales más potentes que se han desarrollado en la actualidad (figura 29-13). A
diferencia del MDGC convencional en el que solo se transfieren segmentos particulares de
la columna de preseparación a la columna analítica, MDGC integral o GC × GC implica la
transferencia de todo el efluente desde la primera columna a una segunda columna
mediante una modulación

interfaz para que se puedan obtener datos bidimensionales completos para la ejecución
completa de la primera columna. El funcionamiento del modulador implica la generación
de bandas de inyección estrechas desde la primera columna, que se envían de manera
continua, pero individual, a la columna secundaria para la separación final. GC × GC
requiere que la segunda columna pueda operar con la suficiente rapidez para generar un
conjunto completo de datos durante el tiempo que un solo pico se eluye de la primera
columna de GC, generalmente dentro de 5 s (35, 38). Los datos de ambos ejes de tiempo se
combinan para crear un conjunto de coordenadas para cada pico, de modo que el
cromatograma resultante sea en realidad un plano bidimensional (2D) en lugar de una línea
recta. La información del área máxima se puede obtener al sumar la integración en ambas
dimensiones.

En GC × GC integral, las dos columnas funcionan independientemente una de la otra, por

lo tanto, la capacidad máxima general se convierte en el producto de las capacidades para
cada columna. Debido a que los analitos se eluyen de la segunda columna tan rápidamente,
la adquisición de datos debe ser suficientemente rápida para una detección adecuada. La
espectrometría de masas de tiempo de vuelo (TOF-MS) y la espectrometría de masas
cuadrupolar de barrido rápido (qMS) se han utilizado como métodos de detección efectivos
para GC × GC para obtener información espectral de masas (39, 40). Aunque la
instrumentación puede ser bastante costosa, el uso de GC × GC integral para el análisis de
aroma volátil ha aumentado exponencialmente en los últimos años a medida que las
metodologías se han establecido más y los sistemas se han vuelto disponibles
comercialmente. En general, la aplicación de MDGC, tanto convencional como integral, ha
permitido que se produzcan separaciones avanzadas de aromas complejos mediante el uso
de instrumentación de última generación.

29.4. TEORÍA CROMATOGRÁFICA

29.4.1. Introducción

GC puede depender de varios tipos (o principios) de cromatografía para la separación. Los

principios de la separación cromatográfica se discuten en el Cap. 27, secc. 27.4. Por
ejemplo, la cromatografía de exclusión por tamaño se usa en la separación de gases
permanentes como N2, O2 y H2. Se usa una variación de exclusión de tamaño para separar
compuestos quirales en columnas basadas en ciclodextrina; una forma enantiomórfica se
integrará mejor en la cavidad de la ciclodextrina que la otra forma, lo que da como
resultado la separación. La cromatografía de adsorción se usa para separar compuestos
polares muy volátiles (p.alcoholes, agua y aldehídos) en columnas de polímeros porosos
(por ejemplo, fase Tenax R). La cromatografía de partición es el caballo de batalla para las
separaciones por cromatografía de gases.

Hay más de 200 fases líquidas diferentes que se han desarrollado para el uso de
cromatografía de gases a lo largo del tiempo. Afortunadamente, la gran mayoría de las
separaciones se puede lograr con solo unas pocas de estas fases, y las otras fases han caído
en desuso. GC depende no solo de la adsorción, partición y / o exclusión por tamaño para la
separación, pero también en el punto de ebullición del soluto para poderes de resolución
adicionales. Por lo tanto, las separaciones logradas se basan en varias propiedades de los
solutos. Esto le da a GC poderes de resolución virtualmente inigualables en comparación
con la mayoría de otros tipos de cromatografía (por ejemplo, HPLC, papel o cromatografía
de capa fina).

Una breve discusión de la teoría cromatográfica seguirá. El propósito de esta discusión

adicional es aplicar esta teoría a GC para optimizar la eficiencia de la separación para que
los análisis puedan hacerse más rápido, menos costoso o con mayor precisión y precisión.
Si uno entiende los factores que influyen en la resolución en GC, uno puede optimizar el
proceso y ganar en eficiencia de operación.
29.4.2 Eficiencia de la separación

Una buena separación tiene picos de base estrecha e idealmente, pero no esencial para la
calidad de los datos, la separación de los compuestos en la línea base. Esto no siempre se
logra. Los picos se ensanchan a medida que pasan por la columna: cuanto más se
ensanchan, más pobre es la separación y la eficiencia. Como se discutió en el Cap. 27, secc.
27.5.2.2.2, una medida de este ensanchamiento es la altura equivalente a una placa teórica
(HETP). Este término se deriva de N, el número de placas en la columna, y L, la longitud
de la columna. Una buena columna empacada puede tener N = 5000, mientras que una
buena columna capilar debe tener aproximadamente 3000-4000 placas por metro para un
total de 100,000-500,000 placas dependiendo de la longitud de la columna. HETP variará
de aproximadamente 0.1 a 1 mm para buenas columnas.

29.4.2.1 Tasas de flujo de gas del portador y parámetros de columna

Varios factores influyen en la eficiencia de la columna (ampliación del pico). Como se

presenta en el Cap. 27, estos están relacionados por la ecuación de Van Deemter [1]: (los
valores de HETP deben ser pequeños).

HETP = altura equivalente a una placa teórica

A = difusión de remolino

B = ensanchamiento de la banda debido a la difusión

u = velocidad de la fase móvil

C = resistencia a la transferencia de masa

A es difusión de remolino; esto es una dispersión de los analitos en la columna debido a
que el gas portador tiene varias vías o flujo no uniforme (figura 29-14). En la cromatografía
en columna empaquetada, la mala uniformidad en el tamaño del soporte sólido o un
empaquetamiento pobre da como resultado la canalización y múltiples vías para el flujo del
portador, lo que da como resultado la dispersión del analito en la columna. Por lo tanto, se
obtiene una eficiencia mejorada mediante el uso de soportes sólidos de alto rendimiento y
columnas comercialmente empaquetadas.

En la cromatografía capilar, el término A es relativamente muy pequeño. Sin embargo, a

medida que aumenta el diámetro de la columna capilar, las propiedades de flujo se
deterioran y se produce la dispersión de la banda. Las columnas capilares más eficientes
tienen diámetros pequeños (0.1 mm), y la eficiencia disminuye rápidamente a medida que
uno va a las columnas de megabores (figura 29 15). Las columnas megabore son solo un
poco más eficientes que las columnas compactas. Mientras que la eficiencia de la columna
aumenta a medida que vamos a columnas más pequeñas, la capacidad de la columna
disminuye rápidamente. Las columnas de microagujeros se sobrecargan fácilmente (la
capacidad puede ser de 1-5 ng por analito), lo que da como resultado una cromatografía
deficiente. Por lo tanto, el diámetro de la columna generalmente se elige como 0.2-0.32 mm
para comprometer la eficiencia con la capacidad.

B es la banda que se ensancha debido a la difusión; los solutos pasarán de una

concentración alta a baja. El término u es la velocidad de la fase móvil. Por lo tanto,
velocidades de flujo muy lentas resultan en grandes cantidades de banda de difusión que se
expanden, y velocidades de flujo más rápidas minimizan este término. El término u está
influenciado por la elección del gas portador. Los gases portadores de mayor peso
molecular (por ejemplo, nitrógeno) son más viscosos que los gases de peso molecular más
ligero (por ejemplo, helio o hidrógeno) y así la dispersión máxima es menor para el
nitrógeno que para los gases portadores de helio o hidrógeno. Esto da como resultado un
nitrógeno que tiene el HETP más bajo de los gases portadores y, teóricamente, es la mejor
opción para un gas portador. Sin embargo, otras consideraciones que serán discutidas en la
Secc. 29.4.2.2 hacer que el nitrógeno sea una opción muy pobre para un gas portador.

C es resistencia a la transferencia de masa. Si el flujo (u) es demasiado rápido, el equilibrio

entre las fases no se establece y se obtiene una baja eficiencia. Esto se puede visualizar de
la siguiente manera: si una molécula de soluto se disuelve en la fase estacionaria y la otra
no, la molécula no disuelta continúa moviéndose a través de la columna mientras que la
otra se retiene. Esto da como resultado la difusión de bandas dentro de la columna. Otros
factores que influyen en este término son el grosor de la fase estacionaria y la uniformidad
del recubrimiento en el soporte de fase. Las películas gruesas proporcionan una mayor
capacidad (capacidad de manejar cantidades mayores de un soluto) pero a un costo en
términos de extensión de banda (e fi ciencia de separación) ya que las películas gruesas
proporcionan más variación en las propiedades de difusión dentro y fuera de la fase
estacionaria. Por lo tanto, el grosor de fase es un compromiso entre maximizar la eficiencia
de separación y la capacidad de muestra (demasiada muestra - sobrecargar una columna -
destruye la capacidad de separación). Los espesores de fase de 0.25-1 μm se usan
comúnmente para la mayoría de las aplicaciones.

Si se traza la ecuación de Van Deemter, dando la figura discutida en la figura 27-13, vemos
un flujo de entrada óptimo debido a los efectos opuestos de los términos B y C. Cabe
señalar que el GC no puede operarse a una velocidad de flujo de portador que produzca la
máxima eficiencia (HETP más bajo). El tiempo de análisis es directamente proporcional a
la velocidad de flujo del gas portador. Si el tiempo de análisis puede acortarse
significativamente operando por encima de la velocidad de flujo óptima y aún se obtiene
una resolución adecuada, se deben usar velocidades que excedan por mucho del óptimo.
29.4.2.2 Tipo de gas portador

La relación entre HETP y la velocidad de flujo del gas portador está fuertemente
influenciada por la elección del gas portador (figura 29-16). El nitrógeno es el gas portador
más e fi ciente (HETP más bajo), como se discute en la Sect. 29.4.2.1, pero su HETP
mínimo ocurre a una velocidad de flujo muy baja. Esta baja velocidad de fase móvil da
como resultado tiempos de análisis innecesariamente largos. Considerando los datos
trazados en la figura 29-16, el nitrógeno tiene un HETP de aproximadamente 0,25 a una
velocidad de flujo óptima de 10 cm / s. El HETP de helio es solo de aproximadamente 0,35
a 40 cm / s de velocidad de flujo. Esta es una pequeña pérdida de resolución para reducir el
tiempo de análisis cuatro veces (10 cm / s para nitrógeno vs. 40 cm / s para helio).

Uno puede incluso empujar la velocidad del flujo hasta 60 o 70 cm / sy lograr la separación
incluso en tiempos más cortos. Las parcelas de la figura 29-16 sugieren que el hidrógeno es

una opción incluso mejor para un gas portador que el helio (es decir, tiene una relación
plana entre la velocidad de flujo del gas portador y HETP). Sin embargo, existen algunas
preocupaciones sobre la posibilidad de que el hidrógeno sea inflamable y se informa en la
literatura que algunos compuestos pueden ser hidrogenados en el sistema GC. Además,
algunos detectores no pueden usar hidrógeno como un gas portador (por ejemplo, un
espectrómetro de masas) y, por lo tanto, uno puede estar limitado al helio como un buen
compromiso.
29.4.2.3 Resumen de la eficiencia de la separación

En resumen, un objetivo importante del análisis es lograr la separación necesaria en el

tiempo mínimo. Se deben considerar los siguientes factores:

1. En general, se deben usar columnas de pequeño diámetro (empaquetadas o capilares) ya

que la eficiencia de la separación depende en gran medida del diámetro de la columna.
Mientras que las columnas de pequeño diámetro limitarán la capacidad de la columna, la
capacidad limitada a menudo se puede compensar aumentando el grosor de la fase. El
aumento del espesor de la fase también disminuirá la eficiencia de la columna, pero en
menor medida que el aumento del diámetro de la columna.

2. Se deben usar temperaturas de operación de columna más bajas: si se requieren

temperaturas de columna elevadas para que los compuestos de interés eluyan, use una
columna más corta si la resolución es adecuada.

3. Se deben mantener las columnas lo más cortas posible (el tiempo de análisis es
directamente proporcional a la longitud de la columna; la resolución es proporcional a la
raíz cuadrada de la longitud).

4. Use hidrógeno como gas portador si el detector lo permite. Algunos detectores tienen
requisitos específicos de gas portador.

5. Opere el GC a la velocidad máxima del gas portador que proporciona resolución.

La pirámide que se muestra en la figura 29-17 resume los compromisos que deben
realizarse al elegir la columna analítica y las condiciones de funcionamiento de la
cromatografía de gases. No se pueden optimizar las condiciones de operación y las
opciones de columnas para obtener una de estas propiedades sin comprometer otra
propiedad. Por ejemplo, optimización de la resolución cromatográfica (diámetro capilar de
pequeño calibre, revestimiento de fase delgada, largo las longitudes de las columnas, y la
velocidad de flujo del gas portador lenta u óptima) serán a costa de la capacidad (columnas
de gran diámetro y recubrimiento de fase gruesa) y de velocidad (revestimiento de película
delgada, altas velocidades de flujo de gas portador, y columnas cortas). La capacidad tendrá
un costo de resolución y velocidad, etc.
La elección de la columna y los
parámetros operativos considere las
necesidades del analista y los
compromisos involucrados en
estas elecciones.
29.5 APLICACIONES DE GC

Si bien se han presentado algunos detalles sobre la aplicación de GC a los análisis de

alimentos en los Capítulos. 10, 14 y 18, algunos ejemplos adicionales se presentarán a
continuación para ilustrar las separaciones y las condiciones cromatográficas. Tomaron
estas decisiones.
FIG. 29-18. Separación cromatográfica de gases capilar típica de residuales volátiles en una
película de envasado de alimentos.

29.5.1 Residuales Volátiles en Materiales de Embalaje.

Los residuales volátiles en los materiales de empaque pueden ser un problema tanto para la
salud (si son tóxicos) como para la calidad (producen sabores en los alimentos). A medida
que la industria ha pasado del vidrio a los materiales poliméricos, ha habido más problemas
a este respecto. GC es el más comúnmente utilizado para determinar los volátiles residuales
en estos materiales. Los cromatogramas presentados en la figura 29-18 se produjeron
vaporizando una película de envasado de alimentos, y extrayendo los volátiles del destilado
en un disolvente orgánico, concentrando el extracto de disolvente y luego
cromatografiándolo en una columna capilar (cromatograma superior en la figura 29). -18)
(41). La extrema complejidad del cromatograma requirió que el concentrado se fraccionara
adicionalmente en gel de sílice y cada fracción se recromatografió. Los cromatogramas
marcados como "cortes 1-5" son los cromatogramas que resultan de eluir el gel de sílice
con: (1) hexano que elimina hidrocarburos saturados del lecho de gel (corte 1); (2) 10% de
CH2Cl2 / hexano eliminando los hidrocarburos insaturados y aromáticos (corte 2); (3)
CH2Cl2 eliminando las cetonas y aldehídos (corte 3); (4) metil-t-butiléter eliminando los
ácidos, cetonas insaturadas y aldehídos (corte 4); y (5) alcohol eliminando los volátiles
polares restantes (corte 5). Se puede ver que la refracción de los volátiles de los envases
extraídos simplificó en gran medida la cromatografía y permitió al investigador centrarse en
los volátiles responsables del mal olor en el material de envasado.
29.5.2 Separación de estereoisómeros

GC ha encontrado una extensa aplicación en la separación de compuestos volátiles quirales

en alimentos (por ejemplo, D y L-carvona). Las separaciones quirales se logran más
comúnmente usando columnas de cromatografía de gases basadas en ciclodextrina. Las
ciclodextrinas son moléculas (anillos de glucosa de 6, 7 u 8 miembros) que tienen una
cavidad interna de dimensiones adecuadas para permitir la inclusión de muchas moléculas
orgánicas pequeñas. Si bien los isómeros ópticos de las moléculas tienen propiedades
físicas prácticamente idénticas y, por lo tanto, son difíciles de separar por la mayoría de los
métodos cromatográficos, difieren en la configuración espacial.

Los estereoisómeros de un compuesto dado se incluirán en la cavidad de ciclodextrina de la

columna de cromatografía de gases en mayor o menor medida a medida que fluyen a través
de una columna capilar de ciclodextrina y se separan.

El cromatograma presentado en la figura 29-19 muestra la separación de seis

estereoisómeros de α y β-irona (42). Esta separación se realizó usando una columna capilar
octakis (6-O-metil-2,3-di-O pentil) -γ-ciclodextrina / OV-17.

29.5.3 Análisis del espacio de cabeza del óxido de etileno en las especias

el óxido de etileno (ETO) es un compuesto altamente volátil que se ha utilizado en la

industria alimentaria como fumigante de especias (43). Se ha clasificado como carcinógeno
humano sospechoso y, por lo tanto, su concentración residual
 análisis de cromatografía de gases de
óxido de etileno en especias. a) 3 μg de
ETO puro, (b) 1 μg de ETO puro, (c) 3 μg
de ETO en la especia, (d) 1 μg en la
especia, (e) la especia pura.

Análisis enantiomérico de estereoisómeros de hierro

en especias es motivo de preocupación. Debido a su volatilidad, ETO es muy adecuado

para la determinación por GC. Woodrow et al. (43) eligió usar un método de espacio de
cabeza para la determinación de ETO. Esto es razonable ya que ETO es muy volátil, la
sensibilidad es adecuada y las técnicas de espacio de cabeza son simples de realizar. El
método consistió en agregar 1 g de especias molidas a un vial de espacio de cabeza de 22
ml (un vial que tiene un cierre de tabique de teflón o muestreo), agregando patrón interno
(1-octanol), incubando el vial a 60 ° C por 20 min, y luego removiendo e inyectando ca. 1
ml del espacio libre en el cromatógrafo de gases. ETO se separó de otros volátiles en la
muestra usando una columna capilar de polímero poroso (homopolímero de
divinilbenceno). Los cromatogramas típicos de ETO puro, especias y especias enriquecidos
con ETO se muestran en la figura 29-20.

Se muestran siete compuestos de aroma seleccionados que contribuyen al sabor de la

mantequilla calentada. Los cambios en las concentraciones de los compuestos de sabor
volátiles pueden estar relacionados con cambios en las propiedades de sabor de los
alimentos y proporcionar información sobre el papel del procesamiento, almacenamiento,
ingredientes, envases, etc. en el sabor de los alimentos. Los compuestos de sabor volátiles
que originalmente aportaron propiedades de sabor deseables también pueden volverse
indeseables a niveles elevados y dar como resultado un desarrollo de mal sabor. Por
ejemplo, un defecto de sabor desagradable en la mantequilla desarrollado durante el
almacenamiento se ha relacionado con un aumento en la concentración de lactona, como la
δ-decalactona (44). La predicción de la vida útil del producto basada en el desarrollo de
sabor desagradable típicamente involucra compuestos muy volátiles, como el hexanal (un
indicador común de la oxidación de los lípidos) (45).

A diferencia de la mayoría de las otras técnicas cromatográficas, el GC tradicional ha

alcanzado los límites teóricos en términos de resolución y sensibilidad. Por lo tanto, este
método no cambiará significativamente en el futuro, salvo para innovaciones menores en
hardware o software de computadora asociado. Sin embargo, los GC de dos dimensiones,
tanto el GC GC recortado por el corazón como el GC × GC completo, aún se desarrollan
rápidamente tanto en instrumentación como en aplicaciones, especialmente en el campo del
análisis del sabor.

GC como técnica de separación se ha combinado con AED, FTIR y MS como técnicas de

detección para hacer de GC una herramienta aún más poderosa. Es probable que estas
técnicas con guiones continúen desarrollándose y perfeccionándose.
29.6 RESUMEN

GC ha encontrado una amplia aplicación tanto en la industria alimentaria como en la

academia. Es excepcionalmente adecuado para el análisis de compuestos volátiles
térmicamente estables.

Esto se debe a las excelentes propiedades de resolución del método y a la gran variedad de
detectores que pueden proporcionar sensibilidad o selectividad en el análisis.

La preparación de la muestra generalmente implica el aislamiento de solutos de los

alimentos, lo que puede lograrse mediante análisis del espacio de cabeza, destilación,
cromatografía preparativa (incluida la extracción en fase sólida) o extracción (líquido-
líquido). Algunos solutos pueden analizarse directamente, mientras que otros deben
derivatizarse antes del análisis. El cromatógrafo de gases consiste en un suministro de gas y
reguladores (control de presión y flujo), puerto de inyección, horno de columna y columna,
detector, electrónica y un sistema de grabación y procesamiento de datos. El analista debe
estar bien informado sobre cada uno de estos componentes GC: gases de portador y
detector; temperaturas del puerto de inyección y operación en modos split, splitless,
temperatura programada o en columna; opciones de columna y optimización (flujos de gas
y perfil de temperatura durante la separación); y detectores (TCD, FID, NPD, ECD, FPD,
PFPD y PID). Las características de estos GC

los componentes y una comprensión de la teoría cromatográfica básica son esenciales para
equilibrar las propiedades de resolución, capacidad, velocidad y sensibilidad.