Documenti di Didattica
Documenti di Professioni
Documenti di Cultura
Secuencias de
Sitio de corte reconocimiento Sitio de corte
ADN
cromosómico
ADN
Ligasa
Vector de clonación
digerido con EcoRI y
PvuII
Tipos de enzimas de restricción
m
EcoRI G-A-A-T-T-C
C-T-T-A-A-G G-A-A-T-T-C
m C-T-T-A-A-G
m EcoRI
G-A-A-T-T-C
C-T-T-A-A-G G-A-A-T-T-C
m C-T-T-A-A-G
EcoRI
m G A-A-T-T-C
G-A-A-T-T-C C-T-T-A-A G
C-T-T-A-A-G
m
La metilación del ADN en eucariotas superiores está relacionada con la
regulación de la transcripción. El uso de algunas enzimas de restricción
específicas permite distinguir entre ADN metilado y no metilado,
obteniéndose de esta manera información sobre la posible regulación
de la expresión de un gen por metilación del ADN
DpnI: Es una enzima de restricción que corta en la secuencia GATC sólo si está
metilada por dam (Gm6ATC). Utilizada en algunos protocolos de PCR para eliminar
ADN plasmídico proveniente de la bacteria sin afectar al sintetizado in vitro.
ENZIMAS DE RESTRICCIÓN
44 46 48
EcoRI G-3’
CTTAA-5’
GAATTC
CTTAAG
5’-AATTC
3’-G
Extremos protuberantes
3’ protuberantes
PstI CTGCA-3’
G-5’
CTGCAG
GACGTC
5’-G
3’-GACGTC
Extremos romos
SmaI CCC-3’
GGG-5’
CCCGGG
GGGCCC
5’-GGG
3’-CCC
Extremos compatibles (I)
EcoRI
GAATTC
CTTAAG
GAATTC
EcoRI CTTAAG
GAATTC
CTTAAG
Extremos compatibles (II)
SalI
GTCGAC
CAGCTG
GTCGAG
XhoI CAGCTC
CTCGAG
GAGCTC
Extremos romos
(siempre compatibles)
SmaI
CCCGGG
GGGCCC
CCCATC
EcoRV GGGTAG
GATATC
CTATAG
Extremos no compatibles rellenados,
transformados en romos
(siempre compatibles)
EcoRI
GAATTC G-3’
AATT-3’
CTTAAG CTTAA-5’
XhoI + dNTPs GAATT TCGAG
CTTAA AGCTC
CTCGAG 5’-TCGAG
GAGCTC GCT
3’-A3’-C
• Actividad “star”
• Metilación
Aspectos prácticos