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UNIVERSIDAD ALAS PERUANAS

FILIAL AREQUIPA

FACULTAD DE MEDICINA HUMANA Y CIENCIAS DE LA


SALUD

ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE FARMACIA


Y BIOQUÍMICA

PROYECTO:

DETETERMINACION DE MICROORGANISMOS EN LOS


LAVATORIOS DE LOS BAÑOS DE MUJERES DEL
PABELLÓN “G” REALIZADO EN LA UNIVERSIDAD
ALAS PERUANAS -AREQUIPA 2015

PRESENTADO POR:

ARONI ARIAS MAURA

CONDORI CUEVA MELISA

AREQUIPA 2015
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INTRODUCCIÓN

Algunos microorganismos son capaces de penetrar y multiplicarse en otros seres

vivos, a los que perjudican, originando una infección; son los denominados

microorganismos patógenos. Los problemas que causa una infección dependen del

tipo de patógeno, el modo en que se transfiere, dosis o concentración de patógenos,

persistencia de los microorganismos y la resistencia del organismo infectado.

En un baño público puede haber estreptococo, estafilococo, E. coli y bacterias

Shigella, hepatitis A virus y el virus de la gripe estacional. Pueden causar infecciones

leves en la piel que a veces, por falta de higiene, se diseminan a la cara y otras partes

del cuerpo.

Las manillas de las puertas, el inodoro y el lavamanos, entre otros, son artefactos que

concentran bacterias y gérmenes. Sin embargo, en los lavaderos es donde más se

encuentran estos microbios, principalmente debido a la cantidad de gente que los usa

diariamente.

En estos recintos, si no se toman las medidas apropiadas, se pueden contraer

enfermedades de varios tipos. Entre las más comunes están las infecciones de la piel

(sobre todo si hay heridas expuestas) y las patologías de tipo digestivas como la

gastroenteritis infecciosa.

Los causantes de estas alteraciones son las bacterias Micrococcuss, Streptococcus

Staphylococcus y Enterococcus, las cuales atacan la piel. También están presentes

las ambientales de áreas húmedas como las Pseudomonas, Aeromonas y

enteropatógenos de los tipos Escherichia coli y Salmonella. Además, se pueden

presentar enterovirus, norovirus, adenovirus e,incluso, hasta parásitos como las

amebas.

Para la determinacion de microorganismos ser realizaran diferente tinciones (tinción

gram . tincion simple , tincion pór esporas) Y medios de cultivo.


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CAPITULO I

1. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

1.1. DESCRIPCIÓN DE LA REALIDAD PROBLEMÁTICA

Los microorganismos incluyen a los virus, las bacterias, mohos y

levaduras. Estos seres vivos son los más diminutos que únicamente

pueden ser apreciados a través de un microscopio y que pueden ser

responsables de infecciones.

En los servicios higiénicos se pueden encontrar múltiples

microorganismos, pero es en los lavatorios que incluye a las manillas de

los caños donde se puede detectar más cantidad de microorganismos y si

no se toman medidas de prevención se puede generar infecciones,

especialmente de piel y gastrointestinal.

1.2. ANTECEDENTES TEÓRICOS

El universo de las bacterias con las que convivimos es muy grande y son

capaces de producir enfermedades debido a malos hábitos de higiene.

Los microorganismos resultan dañinos y pueden ser endógenos o

exógenos. Los endógenos se encuentran en nuestro organismo, y nos

aportan beneficios importantes sin embargo estos pueden transformarse

de comensales en patógenos oportunistas y causan enfermedad cuando

se acumulan. Los microorganismos exógenos forman parte de la

microbiota transitoria del individuo durante horas días o semanas y

depende esencialmente de la susceptibilidad del individuo.

1.3. HORIZONTES DE LA INVESTIGACIÓN

A. Delimitación Espacial: Este estudio se realizará en los

laboratorios de la Universidad Alas Peruanas- Arequipa

B. Delimitación temporal: Marzo del 2015 a Junio del 2014

C. Delimitación social: Los resultados que se esperan obtener

beneficiara a los alumnos de la Universidad Alas Peruanas ya que


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los microorganismos que se encuentran en los lavatorios de los

baños causan infecciones.

D. Delimitación Conceptual:

a) Área: Facultad de medicina humana y ciencias de la salud

b) Campo: Farmacia y Bioquímica.

c) Línea: Microbiología

d) Tema General: Determinación de microorganismos en

los lavatorios de los baños de mujeres del pabellón “G”

realizado en la Universidad Alas Peruanas -Arequipa 2015

e) Tema específico: Determinación de la presencia de

microorganismos en los lavatorios de los baños de

mujeres del pabellón “G” de la Universidad Alas Peruanas.

1.4. DEFINICIÓN DEL PROBLEMA

La presente investigación se basa en que las Tinciones (gram, simple,

Wirtz conklin) y el medio de cultivo con Agar glucosa Sabouraud

permitan detectar microorganismos, mediante procedimientos y métodos

sencillos.

1.5. FORMULACIÓN DEL PROBLEMA A INVESTIGAR

¿Cuáles serán resultados que se obtendrán en la determinación de

microorganismos patógenos en los lavatorios de los baños de mujeres

del pabellón “G” ?

1.6. JUSTIFICACION E IMPORTANCIA DE LA INVESTIGACION

La justificación de este proyecto de investigación, nos da a conocer las

posibles infecciones que se puede dar por una mala higiene produciendo

en el ser humano un foco infeccioso que causa infecciones en la piel y

que pueden diseminarse a otras partes del cuerpo.


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Por ello, esta investigación podría contribuir a la comunidad universitaria ,

ya que los lavatorios de los baños son importantes después haber usado

los servicios higiénicos.

CAPITULO II

2. FUNDAMENTO TEORICO DE LA INVESTIGACION

2.1. ANTECEDENTES

AUTOR: Guevara Nestor

TITULO: Identificación de microorganismos existentes en el edificio Torre

de Cristal “Jose Lopez Portillo”, Chile (2004)

RESUMEN: Este trabajo nos brinda información sobre los factores que

pueden afectar el crecimiento bacteriano ya que se necesita de una serie

de sustancias y de ambientes que faciliten su desarrollo. Estas pueden

ser:

Temperatura: teniendo en cuenta la temperatura, podemos clasificar a

los microorganismos en: Mesófilos: son capaces de desarrollarse a

temperaturas que pueden oscilar entre los 20-45ºC. Temperatura óptima

= 35-37ºC.

Termófilos: son capaces de desarrollarse a temperaturas superiores a los

45ºC.

Sicrófilos: son capaces de desarrollarse a temperaturas que oscilan entre

0-20ºC.

PH: el PH óptimo en el que se desarrollan la mayoría de los

microorganismos es neutro, que oscila entre 6,5-7,5. Los

microorganismos que se desarrollan a pH = 4 se denominan “acidófilos”.

En ocasiones, como consecuencia del metabolismo bacteriano, se

producen residuos que acidifican el medio. Para mantener el medio

neutro se utilizan tampones. El más utilizado es el de sales fosfato, que

además sirven de alimento a los microorganismos. Condiciones


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adecuadas de humedad y la luz ambiental son también uno de los

factores que puede afectar el crecimiento bacteriano.

Autor: Osanz Mur Ana Cristina

Título: Recuento de bacterias aerobias mesofilas totales en canales

bovinas mediante el método de hisopado en un camal de Lima

Metropolitana (2010)

Resumen:

Este trabajo nos brinda información sobre el método por hisopado , para

la toma de muestra de las superficies :se utilizaron hisopos estériles de

algodón para la toma de muestra para cada área, el primer hisopo fue

humedecido en la solución de peptona 0.1% y cloruro de sodio al 0.85%

durante cinco segundos ,(diluyente recomendado por NTP ISO 3100-2)

luego de escurrirlo se froto el área de muestreo en varios sentidos:

vertical ,horizontal y diagonal; durante veinte segundos para concluir

rompiendo la cabeza del hisopo en el interior de una bolsa polietileno ,

luego la misma área se froto con un segundo hisopo seco el cual también

se rompió en la bolsa de poli etileno, una vez que las muestras fueron

tomada en el camal se transportaron al laboratorio del mismo, se utilizo 8

hisopos por camal ;cuatro húmedo y cuatro secos, todos se colocaron en

la bolsa esteril y se agrego100ml del diluyente (solución acuosa de

peptona al 0.1% y cloruro de sodio al 0.9%) y se homogenizo durante dos

minutos quedando así constituida la dilución primaria .A partir de la

dilución primaria se prepararon otra diluciones decimales , luego se

inoculo 1ml de cada dilución en dos placas Petri ,luego se encubaron las

placas Petri durante 48horas mas tres horas , en una estufa.


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2.2. MARCO TEORICO

Microorganismos

Los microorganismos en el Agua tienen unas características que los

diferencian de los contaminantes químicos, por ejemplo, son organismos

vivos que no se disuelven en el agua sino que coagulan o se anexan a

substancias coloidales o sólidos en suspensión que están presentes en el

agua y en todo el ambiente .

Bacteria

La Bacteria es un organismo de una sola Célula pertenecen al reino

mónera y son unicelulares. Su forma puede ser esférica, espiral, etc.

Pueden existir como organismos individuales, formando cadenas, grupos

o pares, tríos... Las bacterias son una de las formas de vida más

abundantes en la tierra. Tienen una longitud entre 0,4 y 14 μm y sobre

0,2 a 12 μm de ancho. Consecuentemente sólo se pueden ver mediante

microscopio. Las bacterias se reproducen mediante la multiplicación del

ADN, y división en dos células independientes. En circunstancias

normales este proceso dura entre 30 y 60 minutos.

Algunas bacterias pueden formar Esporas. Estas esporas se caracterizan

por presentar una capa protectora resistente al calor y que protege la

bacteria de la falta de humedad y comida.

Las bacterias tienen un papel funcional ecológico específico. Por ejemplo,

algunas realizan la degradación de la materia orgánica, otras integran su

metabolismo con el de los seres humanos.

Si bien algunas bacterias son patógenas (causantes de diversas

enfermedades), una gran parte de ellas son inocuas o incluso buenas

para la salud.
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Levaduras y mohos

Tanto las levaduras como los mohos son eucariotas (organismos con un

núcleo celular y organelas rodeadas por una membrana) pertenecientes

al reino Fungi. Debido a que ambos son organismos oportunistas, que

actúan como parásitos sobre otras fuentes de materia orgánica, puedes

agruparlas en la categoría amplia de "organismos que crecen sobre o

dentro de la comida". Sin embargo, las dos formas de vida son

radicalmente diferentes en su estructura, su crecimiento y sus formas de

reproducción.

Peligro del microorganismos

En algunos casos se trata de alimentos en mal estado, en otros son

alimentos que se descomponen estando en nuestro poder por no ser

tratados adecuadamente. La mayoría de diarreas, fiebres, vómitos y

hasta las muertes, son causados por la ingestión de alimentos

contaminados. En la mayoría de los casos los agentes contaminantes son

microorganismos entre los que figuran bacterias, virus, hongos, parásitos.

Estos microorganismos necesitan, al igual que nosotros, ciertas

condiciones óptimas para su desarrollo, entre ellas la temperatura,

humedad, acidez, el agua, la presencia de ciertas sustancias que le van a

permitir un crecimiento y desarrollo adecuado. La mayoría de los

microorganismos, crecen a la misma temperatura del cuerpo humano o

sea a 36º C.

Algunos otros pueden crecer a temperaturas tan bajas como la de la

heladera, 4º C o más altas que la del cuerpo humano a 42º C.

Influencia del ambiente

Las actividades vitales de los microorganismos están grandemente

influidas por las condiciones físicas y químicas del medio donde estos se

desarrollan. Dichas condiciones pueden influir en las características


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morfológicas y fisiológicas de los microorganismos, de manera que es

necesario conocer cómo actúan los diferentes factores del medio

ambiente sobre un microorganismo determinado, para de esta manera

beneficiar su desarrollo, inhibirlo o destruirlo.

Temperatura

La Temperatura influye sobre el crecimiento y la supervivencia de los

microorganismos.

Temperaturas cardinales de desarrollo (= Zonas de temperatura)

Mínima: por debajo de ella el crecimiento se detiene

Máxima: por encima de ella el crecimiento no es posible

Óptima: es la más favorable para la actividad vegetativa

Las tres varían cuando se modifica el medio donde crecen los

microorganismos.

Temperatura óptima de desarrollo:

De acuerdo a ella los microorganismos se dividen en:

Psicrófilos: se desarrollan a temperaturas relativamente bajas. Pueden

crecer a 0oC y pueden crecer a temperaturas medias (psicrófilos

facultativos). Para los psicrófilos obligados estas bajas temperaturas son

letales. Ej: organismos que deterioran la carne, los vegetales y las frutas

en lugares refrigerados.

Mesófilos: se desarrollan a temperaturas medias. Crecen desde 10-45


o
C. Ej: Algunas especies del suelo que causan enfermedades.

Termófilos: se desarrollan a temperaturas relativamente altas. Se

desarrollan a temperaturas superiores a 45 oC. Ejm: organismos que

viven en la superficie del suelo bajo radiación solar directa, en el

compost, etc.
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CAPITULO III

3. OBJETIVOS DE LA INVESTIGACIÓN

3.1. OBJETIVO GENERAL:

Determinar la presencia de microorganismos patógenos en los lavatorios

de los baños de mujeres del pabellón “G” Realizado en la Universidad

Alas Peruanas, utilizando distintos métodos.

3.2. OBJETIVOS ESPECÍFICOS

 Diferenciar bacterias Gram + y Gram - por Tinción Gram

 Identificar bacterias según su morfología por Tinción simple

 Comparar las distintas morfologías y disposiciones que adoptan

las endosporas por Tinción usando el método de Wirtz conklin

 Determinar la presencia de hongos y levaduras por medio de

cultivo con Agar glucosa Sabouraud


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CAPITULO IV

4. FORMULACION DE LA HIPOTESIS

¿Cuáles serán resultados que se obtendrán en la determinación de

microorganismos patógenos en los lavatorios de los baños de mujeres del

pabellón “G” debido a los malos hábitos de higiene y la gran cantidad que lo

usan diariamente?

CAPITULO V

5. VARIABLES

Son componentes de la hipótesis que se ponen en relación de acuerdo con un

referente teórico y según lo que se puede prever en la población del estudio.

Variable Dimensión Indicador Itemes Escala Categorizaci


ón
Tinción simple Presencia +
2
Ausencia -

Tinción Gram Gram(+) Presencia +


azul
Análisis
Microbiológico Gram(- Ausencia - 2
rosado

Presencia + nomin cualitativa


Tinción de Wirtz al
2
conklin Ausencia -
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6. DISEÑO OPERACIONAL

6.1. TIPO Y NIVEL DE INVESTIGACIÓN

El tipo de investigación que se hará es de tipo descriptivo, ya que se basa

en información tomada de textos, páginas de internet, revistas científicas.

6.2. MÉTODO DE LA INVESTIGACIÓN (DESCRIPCIÓN)

6.2.1. Preparación de la muestra

A. Muestra

Lavatorio de los baños

B. Obtención de la muestra

La muestra será obtenida de los lavatorios de los baños de

mujeres del pabellón “G” de la Universidad Alas Peruanas. Para

lo cual se realizara un muestreo tipo aleatorio.

C. Muestreo por hisopado

Fundamento: es utilizado para muestrear las superficies del

área (ej. Muros, pisos, vidrios) con un área medida; partes

completas de equipos. El dispositivo a utilizar consiste en un

tubo de ensayo provisto de un hisopo estéril sumergido en 10

ml de solución diluyente estéril y un tampón que evita la

evaporación del solvente y/o contaminación de la muestra a

analizar.

Procedimiento: humedecer el hisopo con la solución diluyente

estéril (agua peptona), humedecer en una dirección

determinada la superficie del equipo o utensilio, repetir el

hisopado pero en dirección perpendicular al pasado inicial. Las

muestras deberán ser contenidas en un contenedor, si la


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muestra va a tardar en ser analizada se debe mantener en

refrigeración menor a 10 ºC por un periodo de tiempo no mayor

a 1 hora. (4)

6.2.2. MÉTODOS

A. TINCIÓN SIMPLE

Fundamento: La tinción simple se basa en la afinidad del

colorante por los componentes celulares. La tinción puede ser

uniforme o presentar algunos gránulos en su interior. Utiliza un

solo colorante (violeta de genciana, azul de metileno, fuscina

diluida).

Procedimiento: Sobre el extendido seco se colocan unas gotas

de azul de metileno y se deja actuar unos minutos. Se elimina el

exceso de colorante con agua de forma suave, con ayuda de

una piseta. Se seca el extendido y se observa al microscopio. (5)

B. TINCION GRAM

Fundamento: La tinción gran requiere cuatro soluciones,

primer colorante es un colorante básico que en contactos con

las células cargadas negativamente, reacciona con ellas

coloreándolas. El más utilizado es el cristal de violeta y

aumenta la afinidad entre el colorante y las células .los

mordientes empleados suelen ser sales metálicas , acidos o

bases , como por ejemplo una solución diluida de yodo . el

agente decolorante , es un disolvente organico por ejemplo ,

alcohol-acetona (1:1). Colorante de contraste, es un colorante

básico de distinto color que el primer colorante como, por

ejemplo la safranina . las bacterias gram positivas se tiñen de

color azul por el cristal de violeta y no perderán esta coloración


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durante los pasos sucesivos . las bacterias gram negativas

perderan la coloración incial del cristal de violeta en ,los

siguientes pasos y se teñirán de color rosa debido a la safranina

Procedimiento: Sobre un portaobjetos se coloca una pequeña

muestra. Se coloca un gota de cristal violeta por un minuto,

lavar con abundante agua, cubrir con lugol por un minuto, lavar

con agua el exceso de lugol , decolorar con alcohol acetona

hasta la que la preparación deje de perder color ( unos 30seg.) ,

lavar con abundante agua para eliminar el resto de disolvente ,

teñir con safranina durante un minuto, lavar con agua para

eliminar el colorante de contraste , secar la preparación y

examinar al microscopio . (4)

C. TINCIÓN DIFERENCIAL POR EL MÉTODO DE WIRTZ

CONKLIN

Fundamento: Las endosporas poseen unas cubiertas

exclusivas que las hacen resistentes a los factores ambientales

adversos. Además, estas cubiertas hacen que las esporas

aparezcan en el microscopio como estructuras refrigerantes y

de difícil tinción la tinción específica de esporas requiere dos

colorantes. Verde malaquita, capaz de teñir las esporas en

calientes. Safranina colorante de contraste que tiñe las formas

negativas

Procedimiento: Se teñirá con verde malaquita .colocar un

pedacito de papel del filtro encima de la muestra sobre el porta.

Añadir el colorante hasta empapar bien el papel de filtro. De

esta forma se evitara que el colorante salpique y manche toda

la zona de trabajo. Con unas pinzas de madera colocar la

muestra encima de la llama del mechero de forma que el


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colorante humee durante cinco minutos , lavar con abundante

agua el exceso de colorante , teñir con safranina por un minuto ,

lavar con abundante agua el exceso de colorante ,secar la

preparación y observar la preparación en el microscopio. (5)

D. MEDIO DE CULTIVO A SABOURAUD GLUCOSADO AGAR

Fundamento: Medio de cultivo recomendado para el aislamiento

y desarrollo de hongos, particularmente los asociados con

infecciones cutáneas (piel, pelo, etc.).

En el medio de cultivo, la pluripeptona y la glucosa, son los

nutrientes para el desarrollo de microorganismos. El alto

contenido de glucosa, la presencia de cloranfenicol y el pH

ácido, favorecen el crecimiento de hongos por sobre el de

bacterias.

Además, al medio de cultivo, pueden agregarse otros agentes

selectivos de crecimiento.

Procedimiento: Suspender 65 g de medio deshidratado en un

litro de agua destilada. Calentar agitando frecuentemente y

dejar hervir durante 1 minuto para disolver completamente los

ingredientes. Evitar el sobrecalentamiento. Esterilizar a 121°C

durante 15 minutos. Distribuir y enfriar a temperatura ambiente

antes de su utilización. (5)

6.3. UNIVERSO Y MUESTRA

Universo: servicios higiénicos

Muestra: lavatorios de los baños de mujeres de la Universidad alas

Peruanas
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7. CONTRASTACIÓN DE HIPÓTESIS

7.1. DISEÑO DE COMPROBACION DE LA HIPÓTESIS

Ho: Por el método de tinción Gram y el medio de cultivo con Agar glucosa

Sabouraud no se determina la mayor presencia de microorganismos que

por el método de Wirtz conklin, tinción simple y tinción de esporas.

Ha: Por el método de tinción Gram y el medio de cultivo con Agar glucosa

Sabouraud se determina la mayor presencia de microorganismos que

por el método de Wirtz conklin, tinción simple y tinción esporas.

7.2. DESCRIPCIÓN DE LAS TÈCNICAS QUE SE UTILIZARÁN EN LA

INVESTIGACION

A) Técnicas de muestreo : Para la obtención de la muestra se

determinara mediante el método no probabilístico según criterio del

investigador

B) Técnicas para recolectar información

Se realizara diferentes métodos para detectar microorganismos.

Recursos virtuales

 Páginas web

 Videos

 Grabaciones

Recursos físicos

 Centrifuga

 Libros
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8. CRONOGRAMA Y PRESUPUESTO, HONORARIOS Y LUGARES DE

TRABAJO

8.1. CALENDARIO DE ACTIVIDADES

El presente cronograma es elaborado de acuerdo a la temporalidad del

presente anteproyecto y proyecto de investigación, se da a partir de

marzo del 2015 a junio 2015 y el tiempo que se considera necesario

para su presentación y sustentación.

Cronograma de actividades

MARZO ABRIL MAYO JUNIO

Actividades 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4

selección del tema X


Formulación metodológica X
del problema
Elaboración del X
anteproyecto
Primera corrección del X
anteproyecto
Segunda corrección del X
anteproyecto
Ultima corrección del X
anteproyecto
Aprobación del X
anteproyecto
Elaboración del proyecto X

Primera corrección del X


proyecto
Segunda corrección del
proyecto
Ultima corrección del
proyecto
Aprobación del proyecto
Recolección de datos
Análisis de datos
Elaboración del informe
final
Presentación del informe
final
Sustentación del informe
final
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8.2. LISTADO DE EQUIPOS, MATERIALES, INSUMOS Y REACTIVOS A

UTILIZAR EN LA INVESTIGACIÓN

8.2.1. Materiales

El presente cuadro está elaborado de acuerdo a la cantidad y

material de laboratorio que se considera necesario para la

realización de los diferentes métodos.

CUADRO Nº 2

Cantidad/ Materiales

unidades

20 porta objetos

50 hisopos

2 vasos de precipitado 250 ml

2 tubos de ensayo

2 matraz

1 autoclave

1 balanza

1 bagueta

1 luna de reloj

1 pizeta

1 Microscopio

2 mechero

10 Placas Petri

1 Asa de micrón
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8.2.2. Reactivos

El presente cuadro da a conocer los reactivos que se van a utilizar

para la detección de microorganismos.

CUADRO N° 3

REACTIVOS

Violeta de cristal

Lugol

Alcohol

Safranina

Verde malaquita

Azul de metileno

Agua peptonada

Agar sabouraud

glucosado

8.3. PRESUPUESTO

El presente cuadro de presupuesto es elaborado de acuerdo al precio

unitario y el precio total dependiendo de la cantidad y/o tiempo

empleado por cada rubro designado en el cuadro.


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CUADRO Nº 4

Rubros Precio Cantidad Total

unitario y/o tiempo


S/.

Materiales biológicos 1.00 50 g 50.00

Internet 1.00 20 horas 20.00

Copias 0.10 50 50.00

Impresiones 0.10 50 50.00

Pasajes 0.80 15.00

Otros gastos 40.00

Total 225.00

8.4. Lugar de trabajo

El trabajo de experimentación se realizara en el laboratorio de la

Universidad Alas Peruanas.


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9. BIBLIOGRAFÍA

1. Guillem P. Microbiología y Parasitología Médicas. Ed. Médica

Panamericana; 2013.

2. Raúl Romero Cabello Microbiología y Parasitología Humana Bases

etiológicas de las enfermedades infecciosas y parasitarias. Ed. Médica

Panamericana; 2007.

3. López I. Manual práctico de microbiología 2da Ed. Barcelona.

4. Kenneth J. Microbiología Medica. 5ta Ed. Madrid: Barcelona; 2010.

5. Velázquez A. metodología de la investigación científica. Ed. Lima: San

Marcos; 2007.