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Esta publicación pretende ser una guía de estudio de la Bacteriología Veterinaria, donde
están esbozados algunos principios básicos que, debido a lo cambiante y dinámica de esta Ciencia,
lo que hoy es válido mañana tendrá otra concepción. Es natural que ello ocurra porque está
demostrando el avance del conocimiento en el tiempo que a veces es demasiado rápido para
asimilarlo. Con las veloces formas de comunicación existentes es un desafío muy grande saber
seleccionar contenidos esenciales por lo que fue mi meta sentar las bases de esta interesante rama
de la Biología para una mejor comprensión.
INDICE
Página
Esbozo histórico 2
Morfología bacteriana 9
Metabolismo bacteriano 19
Ecología microbiana 25
Toxinas bacterianas 28
División bacteriana 37
Genética bacteriana 41
Clasificación bacteriana 47
Biología molecular 52
Antibióticos 61
Esbozo Histórico
2
Después que reveló el gran número de criaturas microscópicas presentes en la Naturaleza,
los científicos comenzaron a preguntarse el origen de estas formas de vida. Existían dos corrientes:
una, la abiogénesis o generación espontánea, apoyada desde la antigüedad por la autoridad de
Aristóteles (384 – 322 AC), sostenía la generación de vida a partir de sustancias inertes. Es así que
Sansón en el Antiguo Testamento aseguraba la creación de abejas a partir de la miel; en 1650 Van
Helmont generaba ratones a partir de basura y granos en fermentación. Esta teoría se oponía a la
biogénesis apoyada por Hipócrates en el año 400 AC, considerado el Padre de la Medicina que
separó la medicina de la teología y mitología, sostenía que había ‘miasmas’ en el aire que producían
el contagio. Clasificó las enfermedades en endémicas o propias de una región como la tuberculosis,
cólera, chagas, y epidémicas, de aparición repentina, con un gran número de enfermos y luego
desaparece (influenza o gripe humana y equina). Frascastorius (1484-1553) de Verona (Italia) creía
en la presencia de ‘seminaria morbi que contagiaban por contacto directo, por fomites (objetos,
animales o personas) o ‘ad distans’, por el aire.
En 1665 el médico italiano Francesco Redi hizo una simple demostración que acabó
temporalmente con el mito de la generación espontánea. Colocó un trozo de carne en una vasija de
barro y la cubrió con una capa de gasa. Las moscas atraídas por el olor, depositaban sus huevos en
la misma, mostrando que los gusanos o larvan no se generaban de la carne.
El mismo Leeuwenhoek sostenía que los animáculos provenían de semillas o gérmenes que
flotan en el aire.
Un monje naturalista italiano, Lázaro Spallanzani (1729-1799) calentó infusiones de carne
en vasijas cerradas herméticamente evitando la aparición de microorganismos. Needham no obtuvo
los mismos resultados al no seguir las reglas estrictamente.
A comienzos del Siglo XIX un cocinero francés François Appert aplicó esas prácticas para
conservar alimentos perecederos en latas cerradas herméticamente y calentadas. Por ello recibió un
premio de Napoleón, ya que solucionaba la alimentación de soldados en sus largas travesías. El
proceso se conoce como ‘appertización’.
A fines del Siglo XVIII tres grandes químicos de la época: Priestley, Cavendish y Lavoisier
establecieron la base química de los gases. Uno de los primeros descubiertos fue el oxígeno que se
pensó era esencial para la vida, por lo que se creyó que el cierre hermético impedía la proliferación
de microorganismos al suprimirlo.
Sin embargo, Cagniard-Latour y Schwann en 1837 y Schroeder y von Dusch en 1854,
demostraron que ni el crecimiento ni la descomposición tienen lugar en infusiones calentadas en
contacto con el aire si éste previamente se lo calentaba o pasaba a través de soluciones ácidas o
alcalinas o a través de filtros de algodón, cuyo uso se extiende hasta el presente a través de los
tapones de los tubos de ensayo.
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En el Siglo XIX se comenzó a estudiar la relación causal entre la aparición y desarrollo de
microorganismos en infusiones y los cambios químicos o descomposición que se producía. El gran
pionero fue un avezado químico francés: Luis Pasteur (1822-1895). Pero para la aceptación de este
concepto primero tenía que desterrar la teoría de la generación espontánea. Irritado Pasteur por la
experimentación defectuosa que llevó adelante esta teoría errónea, preparó matraces con cuellos de
‘cisne’ o en U. El aire entraba y salía libremente de ellos, pero era calentado en su trayecto, por lo
que las infusiones que contenía no se contaminaban. Pasteur comunicó estos hallazgos en 1864 a la
Universidad de la Sorbona diciendo con gran jactancia:
…‘los he preservado de la única cosa que está por encima del poder del hombre, que es crear,
los he preservado de los gérmenes que flotan en el aire, los he preservado de la vida… No se
conoce hoy ningún caso en el que podáis afirmar que los seres microscópicos vienen al mundo
sin gérmenes, sin padres semejantes a ellos… Quienen sostienen esto han sido juego de
ilusiones, de experimentos defectuosos, viciados de errores que no han sido capaces de
advertir ni han sabido evitar!’.
4
Cambios químicos:
Fermentación es el proceso de degradación de hidratos de carbono que da formación de alcoholes o
ácidos orgánicos.
Putrefacción: es el proceso degradativo de sustancias ricas en proteínas (carne, leche, huevos) que
da como resultado productos de mal olor.
Los químicos del siglo XIX sostenían que tanto la fermentación como la putrefacción eran
procesos puramente químicos, no eran realizados por organismos vivos. Fue Pasteur, químico
experimentado, quien demostró que los procesos fermentativos son resultado de la actividad
microbiana. Las destilerías de Lille (Francia) que producían alcohol de la remolacha azucarera
presentaron problemas con este proceso y lo llamaron a Pasteur. Él observó que los ‘fermentos
buenos’ con forma de semilla de melón o zapallo (levaduras) que llevaban a cabo la fermentación
alcohólica, habían sido reemplazados por bastones (lactobacilos) y cocos (estreptococos) ‘fermentos
malos’que producían fermentación láctica con ácido láctico como producto final.
Cómo destruir los fermentos malos sin dañar los caracteres organolépticos (color, sabor y
aroma) del producto? Pasteur ideó calentar a 63ºC durante 30 minutos para destruir la flora
indeseable y luego introducir nuevamente los fermentos buenos. A este calentamiento se lo conoce
como pasteurización. En la actualidad se elevó la temperatura y se acortaron los tiempos de
exposición al calor: 80ºC durante 15” hasta 140ºC durante 1” (ultra alta temperatura o UAT) que se
aplica a los alimentos, principalmentederivados lácteos para no dañar su valor nutritivo.
Descubrimiento de la vida anaerobia: Al examinar al microscopio líquidos de fermentación
butírica Pasteur observó que organismos móviles perdían su motilidad en los bordes del
cubreobjetos. También comprobó que corrientes de aire retrasaban la fermentación. Existía una
microbiota (anaerobios) para la cual el oxígeno era letal, era ‘la vida sin aire’.
Fue Pasteur quien demostró la relación causal de bacterias con enfermedad. Ideó cuatro
métodos de inmunización (del Latín inmunis= libre de pagar im puestos). En 1796 un médico rural
Edward Jenner (1749-1823) ideó la vacuna contra la terrible viruela observando que las
ordeñadoras sufrían una enfermedad leve (nódulos benignos), a pesar de vivir en un ambiente con la
enfermedad.
1º Método: Envejecimiento de cultivo: Para demostrar que había aislado el agente causal
del cólera aviar (luego denominado Pasteurella multocida en su honor) lo inoculó a una serie de
gallinas esperando que enfermen. Para su sorpresa las gallinas permanecían muy saludables. Al
examinar qué había pasado descubrió que había tomado un cultivo de 8 semanas, que es
considerado ‘viejo’ dado que las bacterias se reproducen cada 20’. Entonces tomó un cultivo nuevo
virulento e inoculó al lote de gallinas anterior y a otro que no había recibido la 1ª dosis. Este último
enfermó mientras que el primero se mantuvo protegido o inmune.
Vacuna contra el cólera aviar de Pasteur. Fuente: Pelczar, Reid & Chan. Microbiología 4ª ed. Mac Graw Hill, 1982.
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2º Método: Cultivo a temperatura disgónica: Si un cultivo lo sometemos a temperaturas no
adecuadas (disgónicas), en general mayor a la óptima o eugónica, pierde virulencia pero no
antigenicidad o inmunogenicidad. Es lo que ocurre con las aves con respecto al carbunco dado que
su temperatura corporal de 42ºC no resulta favorable para Bacillus anthracis.
3º Método: Pasaje a otras especies: Algunas especies como el agente del mal rojo del cerdo
(Erysipelothrix rhusiopathiae) pierden virulencia pero n o antigenicidad por pasaje a especies que
no son las adecuadas para desarrollar Es lo que ocurre cuando se inocula a conejos y luego
nuevamente al cerdo.
4º Método: Desecación: La rabia siempre fue una enfermedad mortal. Pasteur observaba
que se la adquiría luego de la mordedura de algún animal rabioso. Inmediatamente asoció la saliva
como transmisora del agente causal que ni siquiera lo podía observar al microscopio ya que se
trataba de un virus, mucho más pequeño que una bacteria. Al comprobar síntomas nerviosos,
inoculó saliva de un perro rabioso en un conejo y, luego de presentar la enfermedad, desecó su
cerebro y médula espinal. Mezcló con glicerina e inyectó a un joven de 14 años, Joseph Meister,
que había sido mordido por un lobo rabioso, consiguiendo salvar su vida. Por este logro y en su
honor, todos los laboratorios que trabajan en rabia se denominan Instituto Pasteur, siendo el
primero inaugurado en París en 1888.
Primer vacuna antirrábica de Pasteur.Fuente: Pelczar, Reid & Chan. Microbiología 4ª ed. Mc Graw Hill, 1982.
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Postulados de Koch: En 1863 Raye y Davaine asociaron bastones con carbunco. Un médico
rural alemán, Robert Koch (1843-1910) discípulo de Henle, comprobó la presencia invariable de
bacilos en la sangre de animales muertos por carbunco. En 1876 inoculó esta sangre infectada a
ovejas para reproducir la enfermedad y luego de numerosas observaciones, incluso fue invitado al
África, estableció sus postulados que permanecen vigentes hasta el presente:
Aplicaciones de la Microbiología:
Existen numerosas y útiles aplicaciones de esta Ciencia que se pueden dividir en:
Microbiología del suelo o agrícola: Estudia la gran diversidad de microorganismos que mejoran la
fertilidad del suelo convirtieno (fijando) el nitrógeno atmosférico en sales nitrogenadas que utilizan
las plantas para la síntesis de proteínas (Azotobacter o Beijerinckia).
Además transforman la sustancia orgánica (vegetales y animales muertos) en compuestos
inorgánicos que sirven de nutrientes para las plantas. Participan muchas clases de microorganismos.
Una ha de suelo fértil contiene 1.250 kg de bacterias, + cantidades similares de hongos,
protozoarios y algas. A > cantidad de microorganismos > fertilidad.
Microbiología de los alimentos: Son muchos los tipos de microorganismos que se emplean en la
industria alimenticia para obtener los diferentes sabores y gustos. Se utilizan para elaborar pan,
derivados cárneos (embutidos), lácteos (yogur, quesos, manteca) y numerosos productos.,
Los microorganismos que contaminan alimentos pueden ser saprófitos que causan
alteraciones químicas de los caracteres organolépticos (color – sabor – aroma) o patógenos que
originan infecciones, toxiinfecciones o intoxicaciones. Por eso es tan importante la manipulación
higiénica de los mismos, mantenerlos a bajas temperaturas para frenar el desarrollo microbiano,
deshidratarlos, alterar la presión osmótica ya sea con sal (salmuera) o azúcar (jaleas, mermeladas) o
en ácidos orgánicos (láctico, cítrico, acético o vinagre).
En grandes tanques de fermentación, con medios de cultivo de bajo costo, se obtienen
bebidas alcohólicas (vinos, cervezas), antibióticos, enzimas, vitaminas.
7
Microbiología del aire:
Estudia los mecanismos para combatir la polución, por ejemplo, los óxidos corrosivos de
azufre de algunos combustibles que contaminan la atmósfera son destruidos por Ferrobacillus
ferrooxidans.
Control de plagas:
El control biológico de plagas cuida el medio ambiente ya que no deja residuos tóxicos en el
mismo. Es así que Bacillus thuringiensis al esporular produce cristales de una proteína altamente
tóxica para las orugas, la que ha sido industrializada por varios laboratorios (Agritol de Merck;
Vectobac de Bayer).
Biotecnología:
Ha sido una revolución en los últimos años con el advenimiento del ADN recombinante para
expandir el potencial de bacterias, virus y hongos como fábricas biológicas. Una de las aplicaciones
más fascinantes y prometedoras ha sido la aplicación de la terapia génica, es decir la inserción de un
gen faltante o sustitución de uno defectuoso en células humanas, de plantas y animales. Despierta
especial interés su uso futuro en enfermedades genéticas como la hemofilia (incapacidad de
coagular la sangre), diabetes (concentraciones elevadas de glucosa en sangre), drepanocitosis
(hemoglobina anormal). En agricultura se han abierto campos sumamente útiles como el desarrollo
de cepas bacterianas genéticamente modificadas para proteger las frutas de las heladas, otorgar a
las plantas resistencia a insectos, sequías y enfermedades microbianas.
La aplicación de técnicas de biología molecular permite realizar diagnósticos rápidos y
precisos del agente patógeno, características de virulencia, sensibilidad antibiótica, origen y
extensión del brote.
Biorremediación:
Es la decontaminación por medio de bacterias nativas del agua y del suelo, de derrames
tóxicos, de aceites, como el desastre por petróleo del barco Exxon Valdez en 1989 en las playas de
Alaska, que fue superado gracias a la acción de bacterias oxidantes de hidrocarburos a las que se las
estimuló con nutrientes, para acelerar su efecto.
Fuente: http://www.battelle.org/environment/exxon-valdez.stm.
8
Guerra biológica o bacteriológica:
Es el empleo deliberado de organismos vivos o sus toxinas para causar daño al hombre,
animales y plantas.
Bibliografía:
Gest, H. The discovery of microorganisms revisited. ASM News 70 (6): 269-274 2004.
Grimes, D.J. Koch’s postulates. Then and now. Microbe, ASM 1 (5): 223-228 2006.
Pelczar, M.J.; Reid, R.D. & Chan, E.C.S. Microbiología, 4ª Ed. Mc Graw Hill, 826 pp. 1982.
Stanier, R.Y.; Ingraham, J.L.; Wheelis, M.L. & Painter, P.R. Microbiología, 2ª Ed. Ed. Reverté
S.A. 750 pp, 1996.
Tortora, G.J., Funke, B.R. & Case, C.L. Introducción a la Microbiología, 9ª Ed. Ed. Méd.
Panamericana, 959 pp. 2007.
Morfología bacteriana
Las bacterias son células procariotas (del griego pro=antes, karion= núcleo o nuez) o sea
células con un nucleoide al que le falta la envoltura o membrana nuclear a diferencia de las células
eucariotas (del griego eu=normal, karion= núcleo o nuez) que poseen un núcleo verdadero o
completo, rodeado por una membrana. Se diferencian además, por no poseer organitos
citoplásmicos como mitocondrias, retículo endoplásmico, ni corrientes intracitoplásmicas.
Esquema (a) y corte longitudinal (b) de una bacteria. Fuente: Tórtora et al., Ed. Méd. Panam., 2007
La morfología comprende el tamaño (de 0,2 a 20 μ), forma (cocos, bacilos o espirales),
modo de agrupación (diplos, cadenas, tétradas, cubos o fardos, racimos) y estructura.
9
División de cocos: (a) en un plano, (b) en dos planos, (c) en tres planos, (d) múltiples planos.
Fuente: Tórtora et al., Ed. Méd. Panam., 2007
10
Disposición característica de bacilos. Fuente: Tórtora et al., Ed. Méd. Panam., 2007
11
que consta de: cápsula, membrana externa (sólo en los Gram-), pared celular y membrana
citoplásmica.
La cápsula es una formación que protege a la bacteria de la fagocitosis y con ello las hace
más virulentas al requerir menor número para producir infección. Son de diferente naturaleza: ácido
hialurónico (Streptococcus equi, Pasteurella multocida), polisacáridos ácidos (Streptococcus
pneumoniae, Klebsiella spp.), polisacárida + proteína (Yersinia pestis, Bacillus megaterium),
polipeptídica (de ácido D-glutámico: B. anthracis). La producción laxa de un polisacárido
extracelular como glucocálix se denomina capa mucilaginosa que permite que las bacterias se
adhieran sobre distintas superficies como epitelios (respiratorio, digestivo, conjuntiva) así como
también a rocas en cursos de agua, raíces de plantas, sistemas de cañerías.
Membrana externa (ME): La poseen sólo los Gram (-). Está compuesta por un
lipopolisacárido (LPS), proteína central o porina (que forman canales en la membrana y
poseen efecto barrera) y fosfolípido similar al de la membrana citoplásmica. El LPS a su vez
posee tres regiones:
región I: compuesta por cadenas laterales de oligosacáridos que constituyen el antígeno O (del
alemán Ohne Hauch = sin velo),
región II: un polisacárido central formado cetodesoxioctanato (KDO) y heptonas
región III: fosfoglucolípido o lípido A que es la fracción endotóxica, ya que cuando se libera por
lisis celular provoca fiebre, hipotensión, leucopenia y shock endotóxico.
Pared celular (PC): Es una estructura semirrígida formada por macromoléculas que le de la
forma característica a cada tipo de bacteria. Está constituida por aminoazúcares o polisacáridos
aminados (N-acetil-glucosamina = NAG y N-acetil-murámico = NAM) unidos por uniones β 1-4
glucosídicas (que la hace más estable, al igual que los anillos de piranosa) y tetrapéptidos
formados por L, D y di aa (L y D-alanina, D-glutámico y meso-diaminopimélico = m-DAP). La
secuencia alternada de L y D aa y m-DAP (heteroplímeros) le da mayor resistencia a la estructura,
que si fueran homopolímeros. También se la conoce como peptidoglican, glucopéptido,
mucopéptido o mureína. Esta estructura es única y propia de las bacterias, soporta altas
presiones osmóticas internas de 1 a 3 atm en las Gram (-) y 5 a 10 atm en las Gram (+) que son
más reforzadas ya que cuentan con 40 capas. Es el sitio blanco de enzimas: β 1-4
hexosaminidasas como lisozima y muramidasas que actúan en las uniones entre NAG y NAM,
amidasas (entre la cadena PS y el tetrapéptido), endopeptidasas (en las uniones peptídicas) y de
antibióticos como la penicilina que impide la reticulación transversal de la cadena, quedando
restos de ella (esferoplastos). Sin la PC (protoplastos) las células no pueden soportar la intensa
presión interna y explotan (lisis celular).
Los Gram (+) tienen ácidos teicoicos (del griego teichos = techo) compuestos por un
alcohol (glicerol o ribitol) y fosfato.
Los Gram (-) constan de una o muy pocas capas de PC, que se dispone en el periplasma o
espacio periplasmático muy rico en enzimas degradativas y proteínas de transporte.
Las únicas bacterias que no poseen pared celular son los micoplasmas, por eso son muy
pleomórficos y su subsistencia depende de la provisión de un medio isotónico con su medio
interno.
12
La membrana plasmática de los eucariontes también contiene esteroles como el colesterol. Debido
a la ausencia de esteroles en los procariontes, la membrana es más flexible, con excepción del
único género que, al no poseer pared celular (Mycoplasma), posee esteroles a nivel de membrana.
La membrana cumple una importante función al tener permeabilidad selectiva de
nutrientes que en su mayoría son transportados a través de ella. Las características hidrofóbicas le
permiten funcionar como una barrera impidiendo el paso libre de compuestos polares. Algunas
sustancias solubles en la fase lipídica como ácidos grasos, alcoholes y benceno, son capaces de
atravesar la barrera libremente. Sin embargo las moléculas cargadas como los ácidos orgánicos,
aminoácidos y sales orgánicas, que son hidrofílicas, no pueden atravesar la membrana por lo que
deben ser transportadas en forma específica. Los mecanismos de transporte activo permiten a las
células acumular solutos en contra de un gradiente de concentración.
Pared celular de Gram (+) y (-). Fuente: Tórtora et al., Ed. Méd. Panam., 2007
Los pilli o fimbrias, propios de los Gram (-), son apéndices más cortos, rectos y menos
numerosos que los flagelos, están constituidos por una proteína pilina (PM: 17.000D) tienen
función de adhesinas a los tejidos por lo que se denominan factor de colonización ya que de otra
manera serían arrastrados por los cilios respiratorios o los movimientos peristálticos intestinales.
Corynebacterium renale es uno de los pocos (Gram+) que poseen pilli para adherirse al tracto
urinario que infectan.
Flagelos y fimbrias en Salmonella typhi. Fuente: Brock Biología de los microorganismos, 8ªed. Prentice Hall ,
2000.
17
- 4 formación de la corteza con depósito de sales de calcio en forma de dipicolinato de Ca,
en este momento el esporo adquiere resistencia térmica y a la desecación,
- 5 formación de la cubierta, capa rica en cisteína, similar a la quitina de insectos, en este
momento adquiere resistencia a las radiaciones y agentes químicos (desinfectantes),
- 6 formación del exosporio, lipoproteica, que es la capa más externa que rodea a la
endospora,
- 7 liberación por enzimas líticas sintetizadas o activadas después de la maduración.
En estas condiciones pueden vivir cientos y miles de años hasta que, llegado el momento
propicio, se desencadena la germinación.
Ésta consta de tres fases:
- activación, que es reversible, se produce por estímulos externos como agitación, que lesiona
el exosporio,
- germinación propiamente dicha, ya es irreversible, con la entrada de agua se reanudan los
procesos metabólicos de la célula, y
- crecimiento emerge la célula vegetativa.
18
Leyenda: Terrazas de P. mirabilis difundiendo sobre la placa de agar. Una colonia originada de una
gota que contiene menos de 104 bacterias puede cubrir un diámetro de 9 cm en 12 a 16 horas de
incubación a 32°C. Fuente: www.asm.org/microbe
Los pilli o fimbrias, propios de los Gram (-), son apéndices más cortos, rectos y menos
numerosos que los flagelos, están constituidos por una proteína pilina (PM: 17.000D) tienen
función de adhesinas a los tejidos por lo que se denominan factor de colonización ya que de otra
manera serían arrastrados por los cilios respiratorios o los movimientos peristálticos intestinales.
Corynebacterium renale es uno de los pocos (Gram+) que poseen pilli para adherirse al tracto
urinario que infectan.
Flagelos y fimbrias en Salmonella typhi. Fuente: Brock Biología de los microorganismos, 8ªed. Prentice Hall ,
2000.
17
- 4 formación de la corteza con depósito de sales de calcio en forma de dipicolinato de Ca,
en este momento el esporo adquiere resistencia térmica y a la desecación,
- 5 formación de la cubierta, capa rica en cisteína, similar a la quitina de insectos, en este
momento adquiere resistencia a las radiaciones y agentes químicos (desinfectantes),
- 6 formación del exosporio, lipoproteica, que es la capa más externa que rodea a la
endospora,
- 7 liberación por enzimas líticas sintetizadas o activadas después de la maduración.
En estas condiciones pueden vivir cientos y miles de años hasta que, llegado el momento
propicio, se desencadena la germinación.
Ésta consta de tres fases:
- activación, que es reversible, se produce por estímulos externos como agitación, que lesiona
el exosporio,
- germinación propiamente dicha, ya es irreversible, con la entrada de agua se reanudan los
procesos metabólicos de la célula, y
- crecimiento emerge la célula vegetativa.
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Bibliografía:
Beveridge, T.J. Visualizing bacterial cell wall and biofilms. Microbe, ASM, 1 (6): 279-294 2006.
Rothfield, L.; Taghbalout, A. & Vats, P. Bacteriall cells have cytoeskeletons, too. ASM News, 71
(2): 582 – 586 2005.
La autotrofia como modo de vida microbiana, extraído de Pace, N.R. (1999) Microbial Ecology &
Diversity. ASM News 65 (5): 328-333.
Heterótrofos quimiosintéticos u organotrofos: Son incapaces de utilizar CO2, como única fuente de
C. Requiere moléculas orgánicas (glucosa ) como donadora de e- para obtener energía (~). Incluye a
toas las ptógenas del hombre y animales. Han evolucionado con pérdida de enzimas necesarias para
sintetizar compuestos celulares que se han vuelto esenciales (parasitismo). Requieren factores de
desarrollo. Obtienen su ~ de la glucosa (C6H12O6) mediante tres mecanismos:
Respiración aerobia (+ 12 O2) = 6 CO2 + 6 H2O + 686 kcal (36 ATP/ mol de glucosa)
Respiración anaerobia (+ 12 NO3)= 12 NO2K + 6 CO2 + 6 H2O + 429 kcal (20 ATP/mol de
glucosa)
20
La fermentación es el mecanismo menos eficiente en producir ~ ya que la molécula de
glucosa no se degrada completamente. En cambio en la respiración la glucosa se degrada
completamente, siendo el O2 el aceptor final de e-. En la respiración anaerobia el aceptor final es un
compuesto inorgánico diferente del O2, el NO3 en el caso de los anerobios facultativos y SO4 y
fumarato en los anaerobios estrictos.
El piruvato o ácido pirúvico es el metabolito intermediario de diferentes vías fermentativas:
En la fermentación alcohólica llevada a cabo por levaduras (Sacharomyces cerevisae) y bacterias,
(Sarcina, Erwinia) se obtiene etanol + CO2.
En la fermentación homoláctica (Lactobacillus y Streptococcus) se produce ácido láctico y en la
heteroláctica (Leuconostoc) se le suman ácido acético, fórmico, etanol y CO2.
En la fermentación ácida mixta de las enterobacterias se obtienen diversos ácidos orgánicos, y 2-
3butanediol es característico de Klebsiella, Enterobacter, Serratia y Bacillus.
En la fermentación butírica propia de los anerobios Bacteroides, Fusobacterium y Clostridium se
produce ácido butírico, acético, etanol, acetona, isopropanol, H2 y CO2.
En la fermentación propiónica de Propionibacterium, Corynebacterium diphteriae, Veillonella y
Neisseria, se produce ácido propiónico, acético, succínico y CO2.
Todos los nutrientes son degradados a grupos acetilos: los hidratos de carbono por glucólisis
(vía Embden-Meyerhoff-Parnas, EMP, de las enterobacterias; pentosa-fosfato, PF, de Lactobacillus,
Brucella y Acetobacter o Entner-Doudoroff, ED, de Pseudomonas y Alcaligenes) donde el piruvato
es oxidado a acetilo en lugar de ser reducido a ácido; las proteínas por acción de proteasas se
degradan a aminoácidos (aa) y por desaminación a acetilo; los lípidos por acción de lipasas dan
ácidos grasos y por oxidación acetilos, éstos son transferidos a la coenzima A, que actúa como
aceptor transitorio de grupos químicos, dando acetil-CoA. De esta forma ingresa al ciclo de Krebs
o de los ácidos tricarboxílicos donde es oxidada originando 8 H+ que son transportados a nivel de
membrana (cadena respiratoria) produciendo un gradiente o cascada de protones, cuya ~ genera
ATP, mecanismo conocido como fosforilación oxidativa.
21
Esquema general de la respiración aerobia.
Fuente: De Robertis & De Robertis. Biología Celular y Molecular, Ed. El Ateneo 1981.
Agua: Es el vehículo por el cual los materiales esenciales penetran en la célula y salen los de
desecho. Forma parte del 80% del peso celular.
Sales inorgánicas:
Cumplen tres funciones principales:
1) Mantienen estado coloidal del citoplasma o citosol y presión osmótica.
2) Mantienen equilibrio ácido-básico
3) Forman parte de enzimas o actúan como activadores de reacciones enzimáticas.
Los vestigios o impurezas de los medios de cultivo suelen satisfacer la necesidad inorgánica celular.
S: forma parte de los aa cisterna y metionina y de la vitamina tiamina (B1). Puede ser
suministrado en forma de sulfato (inorgánico) o en forma orgánica (aa y/o vitamina).
Fe: esencial para funciones de varias enzimas como catalasa, peroxidasa, citocromo. De su
concentración depende la producción de toxina diftérica.
P: para almacenamiento y transporte de ~.
N: provisto como sales de NH3, aa y nucleótidos.
Co: bacterias producen cianocobalamina o vitamina B12.
Ca: compuesto de pared celular y esporos bacterianos en forma de dipicolinato de Ca.
K y Mg: para el normnal funcionamiento de ribosomas.
Mb: para fijación de N y reducción de nitratos.
Zn y Mn: para funcionamiento de ciertas enzimas.
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Anaerobias facultativas: desarrollan en condiciones aerobias como anaerobias. Enturbian todo el
medio de cultivo líquido. Ej.: Staphylococcus, Streptococcus, Enterobacterias.
Anaerobias obligadas: sólo desarrollan en medios con bajo potencial redox (Eh) o donde el O2 ha
sido eliminado por diferentes métodos:
- Agregando compuestos reductores (con radicales SH2) como tioglicolato de Na, cisteína, ácido
ascórbico, extracto de carne o hígado.
- Reemplazando el aire con una bomba de vacío e inyectando gases inertes como N, He, mezcla de
N + CO2
- Utilizando sobres generadores de H2 que se combinan con O2 y forman H2O en jarras anaeróbicas
(Gas-Pak).
Crecimiento de (a) aerobias obligadas, (b) anaerobias estrictas, (c) anaerobias facultativas y
(d) microaerófilas. Fuente: Brock Biología de los microorganismos, 8ªed. Prentice Hall , 2000.
Requerimiento de CO2
Las bacterias no desarrollan cuando se priva por completo de CO2 (asimilación heterotrófica
de CO2). Sirve para:
- Mantener ácidos dicarboxílicos para síntesis de ácidos tricarboxílicos del ciclo de Krebs.
- Síntesis de ácidos grasos, purinas.
Requerimiento de temperatura:
Cada especie bacteriana posee un rango de temperatura dentro del cual desarrolla. Existe un
límite de máxima y mínima y una temperatura óptima intermedia en la que el crecimiento es más
rápido. Para todas las patógenas y algunas saprófitas el rango es entre 25 y 40ºC, con una óptima de
37ºC. Son las mesófilas. Algunas tienen rangos amplios como Pseudomonas (entre 5 y 43ºC) y
otras muy estrecho (30-39ºC) como Streptococcus y Neisseria. Ningún mesófilo crece por debajo
de 5ºC ni por encima de 45ºC.
Psicrófilas: Crecen mejor a temperaturas inferiores a 20ºC. Entre 0 y -7ºC si el medio no se
congela o posee crioprotector. Causan alteraciones en alimentos refrigerados o congelados:
Pseudomonas, Achromobacter, mohos (Cladosporium).
Psicrotrofas: Es una categoría donde se ubicó a las patógenas que desarrollan en frío, entre
10 y 25ºC como Listeria monocytogenes, Yersinia enterocolitica y Clostridium botulinum E.
24
Termófilas: Desarrollan entre 55 y 80ºC. Clostridium perfringens, Bacillus
stearothermophilus, Brocothrix thermophacta.
Hipertermófilos o termófilas extremas: Se reproducen por encima de los 80ºC, viven en
aguas termales generalmente asociadas con la actividad volcánica (el azufre suele ser importante en
su actividad metabólica) y en las fumarolas hidrotermales de las profundidades marinas. Pertenecen
a las Archeaebacteria (Thermococcus, Thermoplasma, Pyrolobus, Pyrococcus). De hecho la ADN
polimerasa utilizada en PCR, que soporta 95ºC sin desnaturalizarse, se extrajo de Thermus
aquaticus, de allí su denominación Taq polimerasa.
Requerimiento de pH:
La mayoría de los patógenos crecen bien a pH ligeramente alcalino 7,2 – 7,4. Algunas son
acidófilas, desarrollan a bien a pH 6 o inferior como lactobacilos y levaduras y las basófilas como
Vibrio cholerae necesita pH 9 para desarrollar. Soluciones ácidas de SO4H2 al 5% o alcalinas de
NaOH al 4% son letales con excepción del género Mycobacterium (agente de la tuberculosis) que
las soportan 15 minutos sirviendo de esta manera para decontaminar la muestra.
Regulación metabólica:
La actividad de las cadenas enzimáticas se regula por medio de un control genético que es
lento y un control catalítico que es rápido. En el primero, la presencia del sustrato (Ej.: lactosa)
induce o desencadena el mecanismo de síntesis de las enzimas que lo degradarán. Por otro lado, la
acumulación de un producto final (Ej.: triptofano) inhibe la síntesis de las enzimas que se necesitan
para su elaboración (represión).
En el segundo tipo de control, la presencia de un precursor (Ej.: glucosa-6-P) activa a la
última enzima de la cadena (glucógeno-sintetasa) y con ello se pone en funcionamiento toda la
cadena que la degrada. En cambio la acumulación de un producto final como citidin-tri-P inhibe
por retroalimentación o feed-back a la primer enzima (aspartato-transcarbamilasa) de la cadena y
con ello entra en reposo evitando gasto inútil de energía..
25
Regulación enzimática por control genético (inducción y represión) y catalítico (activación por precursor y
retroinhibición). Fuente: De Robertis & De Robertis. Biología Celular y Molecular, Ed. El Ateneo 1981.
Bibliografía:
Carter,G.R.; Chengappa, M.M. & Roberts, A.N. Essentials of Veterinary Microbiology, 5th ed.
Williams & Wilkins, 1995.
De Robertis, E.D.P. y De Robertis, E.M.F. Biología Celular y Molecular, 10ª ed., Ed. El Ateneo,
613 pp, 1981.
Ecología microbiana
La ecología estudia a los organismos en sus ambientes naturales, es decir todo lo que rodea
a un organismo. Los microorganismos forman comunidades y éstas los ecosistemas.
Las células individuales se agrupan formando → poblaciones
Las poblaciones relacionadas metabólicamente forman → comunidades
26
Las comunidades microbianas interactúan con los macroorganismos y definen el → ecosistema.
Los habitats de los microorganismos son muy diversos, el crecimiento en la naturaleza
depende de los nutrientes o recursos disponibles y las condiciones de crecimiento (temperatura, pH,
agua, luz, O2). Estos elementos definen el nicho ecológico, donde cada microorganismo crece
mejor.
Todos los seres superiores están colonizados por una microbiota normal que nos protege de
ciertas enfermedades al impedir el crecimiento de microorganismos perjudiciales. Esta población no
es un accidente sino que refleja la adpatación evolutiva. En el intestino del hombre y animales por
ejemplo son la fuente de vitaminas del grupo B.
La resistencia natural a enfermedades es proporcionada por la piel, mucosas, cilios, acidez
estomacal y algunas sustancias químicas como el interferón. Escherichia coli es un habitante
normal del intestino grueso de los vertebrados y su presencia es beneficiosa porque ayuda a
producir vitaminas y degrada alimentos.
La relación entre organismos se puede clasificar de la siguiente manera:
Mutualismo o simbiosis: Ambos organismos se benefician: los rumiantes con bacterias del rumen
que producen celulasa para hidrolizar celulosa en almidón y otros polisacáridos (PS) a moléculas de
bajo peso molecular como ácidos orgánicos (acético, propiónico, butírico que son absorbidos por la
corriente sanguínea y oxidados para producir ATP para los requerimientos del animal), H2 y CO2.
Las metanógenas usan el H2 producido en grandes cantidades como fuente de ~ y CO2 como
aceptor de electrones, resultando en CH4 que es excretado por medio de los eructos.
Parasitismo: Un organismo se beneficia a expensas del otro.
Comensalismo: Es un estado parasitario en el cual un organismo vive dentro o sobre el hospedador
sin causarle enfermedad. El organismo se beneficia de esta relación y el otro no se perjudica. El
término patógeno oportunista o potencial es usado para hacer notar que un organismo comensal
bajo determinadas circunstancias como disminución de la resistencia del hospedador o aumento de
la virulencia de aquél, puede causar enfermedad. Por ejemplo Staphylococcus aureus puede causar
mastitis como resultado de daño en la ubre y Pasteurella haemolytica (sola o en combinación con
otras bacterias y virus) origina neumonía en bovinos fatigados y debilitados por un largo viaje y frío
(fiebre del transporte). Existen más de 200 especies de bacterias y hongos saprófitos que pueden
causar infecciones oportunistas como Pseudomonas aeruginosa y Acinetobacter spp. entre las 1as y
Penicillium, Aspergillus y Candida entre los 2dos.
Varios patógenos bacterianos forman comunidades complejas que causan infecciones
crónicas y resisten los tratamientos estandar, son los biofilmes que son microcolonias de células
bacterianas adheridas por polisacáridos excretados por las propias células. El exopolisacárido
glococálix protege a Pseudomonas aeruginosa de la fagocitosis ya que los macrófagos y neutrófilos
los encuentran pero no los pueden engolfar o fagocitar.
27
Biofilme de P. aeruginosa. Fuente: ASM MicroteLibrary.org
28
este fenómeno de colaboración para transformar elementos, se presenta con frecuencia en
la naturaleza y se conoce con el nombre de sintrofía: comiendo juntos, como por ej.:
bacterias nitrosificantes y nitrificantes que oxidan el NH3 a NO3-.
Bibliografía:
Clutterbuck, A.L.; Woods, E.J.; Knottenbelt, D.C.; Clegg, P.D.; Cochrane, C.A. &
Percival, S.L. Biofilms and their relevance to veterniary medicine. Vet. Microbiology,
121(1-2):1-17 2007.
Konopka, A. Microbial ecology. Searching for principles. Microbe, ASM 1 (4): 175-179
2006.
Leid, J.G. Bacterial biofilms resist key host defenses. Microbe, ASM, Features, Feb.2009.
Madigan, M.T.; Martinko, J.M. & Parker, J. Brock Biología de los microorganismos,
8ªed. Prentice Hall , 1064 pp, 2000.
Toxinas bacterianas
ENDOTOXINA EXOTOXINA
________________________________________________________________
Bacterias productores Gram (-): Enterobacterias, Gram (+): Bacillus,
Brucella sp, Haemophilus Clostridium, Staphylococcus
29
Estabilidad Estables. No pierden toxicidad Inestables. Pierden toxicidad
a 60ºC, ni por agentes químicos a 60ºC o por agentes químicos
Componentes intracelulares:
Las bacterias Gram (-) difieren de otras bacterias y de células mamíferas en que tienen una
membrana citoplasmática interna y otra externa que consiste en una bicapa lipídica y proteínas de
membrana. Contiene un lipopolisacárido (LPS) que provee una barrera a los metales pesados,
moléculas grandes (enzimas líticas, ADN) y a agentes disolventes de lípidos como las sales biliares.
El LPS también posee cadenas laterales variables de carbohidratos u oligosacáridos que le dan la
antigenicidad O. Éstas hacen más resistente al microorganismo a las defensas del hospedador,
reduciendo por ejemplo la fijación de complemento que las destruiría. Varias de estas funciones
también las presentan los Gram (+) a través de los ácidos lipoteicoicos.
El LPS parece ser vital para las bacterias Gram (-); los genes de su biosíntesis, al igual que
de los ácidos lipoteicoicos, evolucionaron mucho antes de la existencia de las defensas de las
células mamíferas, son altamente conservados por más de un billón de años y su mutación es letal
para la bacteriua. Es encontrado en una gran variedad de géneros y especies sugiriendo que es
importante para las células procariotas.
Las bacterias con largas cadenas de polisacárido (antígeno, Ag O) son, en general, más
resistentes a la lisis mediada por complemento y a la fagocitosis. Algunos organismos Gram (-) no
entéricos que tienen muy poco o casi nada Ag O, utilizan otras estructuras hidrocarbonadas con
función similar. Por ejemplo las variaciones de fase de los antígenos de superficie es un paso común
de algunas bacterias para evadir el sistema inmunológico. Ha sido bien documentado en LPS de
Bordetella pertussis, Haemophilus influenza, Neisseria meningitidis y N. gonorroeae.
Aunque los patógenos entéricos requieren de grandes Ag O para la resistencia a los ácidos
biliares, no hay datos convincentes que sugieran qué diferencias en los LPS contribuyen a la
virulencia. Los patógenos intestinales usualmente poseen otros determinantes de patogenicidad
como los pillis, fimbrias o adhesinas, motilidad, exotoxinas o enterotoxinas, factores de
penetración, haciendo que el LPS parezca menos significatiuvo en el desarrollo de gastroenteritis y
otras noxas causadas por este grupo de bacterias. Por el contrario, el LPS tanto de flora normal
como de bacterias virulentas, puede ser una molécula altamente tóxica si se libera al torrente
sanguíneo (endotoxina), produciendo fiebre o hipertermia, leucopenia, hipotensión, shock y muerte.
Diferencias en la estructura del LPS se correlacionan con la habilidad para activar
macrófagos, liberar mediadores (citokinas) y producir shock séptico. Los mediadores causan
aumento en la permeabilidad vascular, disminución en la contractilidad cardíaca, vasodilatación,
30
hipertensión pulmonar y coagulación intravascular diseminada (CID) que finalmente llevan a la
muerte.
Componentes extracelulares
Toxina tetánica: Es una neurotoxina secretada por Clostridium tetani siguiendo una multiplicación
en un ambiente anaeróbico dentro del tejido infectado. Es responsable del espasmo muscular
localizado o generalizado en el tétanos (parálisis espástica) y puede actuar en diferentes áreas del
sistema nervioso vía los nervios periféricos, placas motoras, columna vertebral, cerebro o sistema
simpático. El sitio blanco es la placa mioneural donde bloquea a la acetilcolinesterasa dando como
resultado la diseminación incontrolada de impulsos nerviosos e hiperreflexia de los músculos
esqueléticos. La acción de la toxina es presináptica mientras que la estricnina, de efecto similar, es
postsináptica. La toxina no produce cambios histológicos evidentes ni daño al sistema nervioso.
Otras exotoxinas
Los diferentes tipos de Clostridium perfringens (A, B, C, D, E y F) producen diversos
productos tóxicos que desarrollan roles específicos en los diferentes cuadros. De las 12 toxinas, 4
son consideradas letales mayores:
La toxina α (alfa) es una lecitinasa o fosfolipasa producida en gran cantidad por las cepas
del tipo A. Causa hidrólisis de fosfolípidos de membrana, incluidos los eritrocitos, siendo la
característica más remarcable de esta toxina la masiva hemólisis intravascular. Esta toxina se hace
sistémica siguiendo la absorción desde el intestino y, a medida que causa hemólisis generalizada,
afecta la pared de los capilares llenando de fluido las cavidades.
La toxina β (beta) producida por C. perfringens tipo B y C, está asociada con
enteropatogéneis (disentería del cordero y enteritis hemorrágica de ovinos y caprinos como así
también en terneros y lechones). Es producida en grandes cantidades siguiendo un crecimiento
exuberante en el contenido intestinal. Es necrotizante e induce a la inflamación de la mucosa
intestinal acompañada de hemorragia, ulceración y pérdida de la mucosa.
La toxina ε (épsilon) aumenta la permeabilidad de la mucosa intestinal, actuando sobre el
endotelio vascular, favoreciendo su diseminación por el torrente sanguíneo junto con la toxina
resultando un a toxemia β con ambos efectos combinados. El mecanismo por el cual la toxemia
contribuye a la muerte del animal no es conocido aunque están implicados falla del corazón e
hipotensión. La toxina ε se puede unir a receptores de una variedad de tejidos, especialmente
aquéllos del cerebro, riñones e hígado y su efecto es mediado por el sistema de la adenilciclasa. El
edema resultante se puede observar en corazón, cerebro y pulmones.
La toxina ι (iota) es producida por C. perfringens tipo E. Aunque el organismo esté
asociado con enterotoxemia en corderos y terneros, no es un patógeno significativo. Al igual que la
toxina ε, aumenta la permeabilidad capilar que interfiere con la absorción intestinal.
La exotoxina A de Pseudomonas aeruginosa tiene una actividad similara la de la toxina
diftérica, ambas son potentes inhibidoras de la síntesis proteica ribosomal de células eucariotas.
Inactivan la enzima denominada factor de elongación 2. Aunque se conoce este mecanismo, no se
sabe cómo contribuye a la letalidad de las infecciones por Pseudomonas.
31
La exotoxina de Bacillus anthracis es un complejo formado por tres componentes: factor
letal, factor edema y antígeno protector (antifagocítico) que tienen su máximo efecto cuando actúan
juntos.
Staphylococcus aureus produce un rango de productos extracelulares, pero al menos dos de
ellos pueden ser clasificados como exotoxinas: la toxina α y la leucocidina. Ambas tienen
actividad antifagocítica y la primera puede llegar a ser letal en cantidad suficiente. Su actividad
antifagocítica difiere: mientras que la toxina α induce a disrupción lisosomal dentro de los
neutrófilos, la leucocidina lleva a una extrusión de los gránulos lisosomales. La primera interactúa
con los lípidos, especialmente de las membranas celulares y se puede ligar, por ejemplo, al
endotelio vascular de los músculos produciendo contracciones, espasmos, isquemia y anoxia.
Enterotoxinas
Las enterotoxinas de Vibrio cholerae y Escherichia coli han sido extensamente
caracterizadas. La primera es una proteína que estimula la secreción a través de la adeniciclasa en la
mucosa intestinal. Posee cinco receptores celulares que se fijan a la membrana citoplásmica del
entericito llevándolo a una activa secreción con grandes pérdidas de agua y electrolitos. El paciente
colérico puede llegar a morir por deshidratación grave.
E. coli produce dos clases de enterotoxinas: una termolábil y otra termorresistente. La
primera es idéntica en su mecanismo de acción a la colérica; la segunda estimula otra enzima: la
guanilato ciclasa, pero ambas se traducen en el mismo efecto: aumento de la permeabilidad
intestinal con pérdia de agua y electrolitos, disminución de la absorción, aumento de la motilidad
intestinal, todo lo cual lleva al cuadro de diarrea que puede ser fatal, sobretodo en animales jóvenes.
También se han reconocido enterotoxinas con efectos similares en otras enterobacterias
como Salmonella y Klebsiella, en Aeromonas, Campylobacter jejuni, Serpulina hyodysenteriae y
Bacteroides fragilis.
C. perfringens tipo A también produce una enterotoxina responsable de intoxicación
alimentaria en el hombre. Primariamente afecta al íleum donde altera el transporte de fluidos, iones
y glucosa, causando daño tisular e inhibiendo procesos metabólicos por mecanismos aún no
definidos.
La enterotoxina B de S. aureus afecta al sistema nervioso autónomo que resulta en una
peristalsis excesiva que causa vómito profuso. Es la responsable de la intoxicación alimentaria de
‘sobremesa’, ya que se manifiesta a las dos horas de haber ingerido el alimento contaminado.
Exoenzimas
Muchas bacterias elaboran productos extracelulares que no son directamente tóxicos para las
células pero contribuyen con el proceso de la enfermedad.
S. aureus produce coagulasa que coagula el plasma sanguíneo transformando el fibrinógeno
en fibrina; el coágulo formado lo ayuda a evadir la fagocitosis. En etapas posteriores sintetiza
hialuronidasa o factor de difusión que le sirve para diseminar la infección a través de los tejidos.
P. aeruginosa produce dos proteasas (proteasa alcalina y elastasa) que contribuyen en su
virulencia y están involucradas en el daño corneal asociado con queratitis. El epitelio bronquial
también es afectado por una hemolisina.
Bacteroides elabora una variedad de enzimas que tienen actividad contra un rango de tejidos
y células y contribuyen al cuadro patogénico. Están incluidas colagenasas, proteasas contra
inmunoglobulina A (IgA), hialuronidasa, condroitín sulfatasa (destruye el casco), fibrinolisina,
neuraminidasa, heparinasa y ADNasas.
Citotoxinas
El sobrenadante de un cultivo de Pasteurella haemolytica es especialmente tóxico para
leucocitos bovinos y juega un rol considerables en el desarrollo de neumonía o fiebre del transporte
en la que intervienen también P. multocida, Haemophilus pleuropneumoniae, Mycoplasma y
diversos virus respiratorios.
32
Bordetella bronchiseptica posee una toxina que destruye los cornetes nasales del cerdo
provocándole rinitis atrófica.
Cepas enteropatógenas de E. coli (EPEC) producen una verocitotoxina, conocida como
Shiga-like-toxin (SLT) por su similitud con la producida por Shigella y es responsable de la
enfermedad de los edemas en los cerdos y del síndrome urémico hemolítico (SUH) en el hom bre.
Bibliografía:
Blanke, S.R. Portals and pathways: Principles of bacterial toxin entry into host cells. Microbe,
ASM, 1(1): 26-32 2006.
Cicuta, M.E. Toxinas bacterianas. Cátedra de Microbiología, FCV/UNNE, 5 pp. 1998.
Desde el punto de vista médico y del laboratorio de Microbiología, trabajar con medios
estériles es de fundamental importancia, de otra manera no se podría llevar a cabo ningún estudio.
La destrucción completa de microorganismos se realiza por medios físicos (esterilización
por calor, radiaciones o filtración) o por medios químicos (desinfección por líquidos, desinfectantes
o antisépticos, vapores o gases).
Esterilización entonces es la destrucción completa de toda forma de vida existente en el
interior o superficie de cualquier material.
Desinfección es el conjunto de prácticas para prevenir o destruir gérmenes patógenos.
Asepsia es la privación total de gérmenes, sean patógenos o no.
Antisepsia es la creación de un medio disgenésico para destruir o impedir el desarrollo.
Generalmente se usan tópicos o antisépticos.
Germicida o desinfectante: destruye bacterias (bactericida), virus (viricida) u hongos
(fungicida).
Agente bacteriostático o fungistático: impide el crecimiento o reproducción de bacterias u
hongos.
33
Radiaciones: (Esterilización en frío) La energía se transmite en el espacio a través de radiaciones
ionizantes (rayos cósmicos, particulados o de e- α, β, mesones o mesotrones, electromagnéticos o δ,
Röentgen o X), de longitud de onda pequeña, gran poder de penetración y alta energía (~) y no
ionizantes (radiaciones ultravioleta o UV e infrarrojas o IR), de longitud de onda amplia, poco
poder de penetración (no atraviesan vidrio) y baja ~.
La energía radiante de la luz solar procede de la fusión nuclear de 4 átomos de H en uno de
He que libera gran cantidad de energía en forma de muchos tipos de radiaciones caracterizada cada
una por la frecuencia y longitud de onda (λ). La luz viaja en pequeños paquetes de ~, fotones o
cuantos similares a los protones y electrones pero sin carga eléctrica. Cuando una molécula absorbe
luz, recibe ~. La cantidad es inversamente proporcional a λ (a > λ < ~ ). Cuando la luz choca con
una molécula, un e- puede ser transportado a un orbital más alejado del núcleo con una nueva
distribución electrónica de la molécula que queda excitada (forma más activa que la inicial). La
vuelta al estado inicial produce fluorescencia o fosforescencia. En la fotosíntesis la célula
transforma la energía lumínica en energía química al sintetizar sus compuestos hidrocarbonados.
Cuando la ~ absorbida es = o > a 10 electro-voltios se produce la eyección o expulsión de e-
y la molécula queda ionizada. En el espectro visible y UV la ~ es insuficiente para extraer e- pero
produce cambios fotoquímicos. En la zona de los rayos IR la energía absorbida se disipa en forma
de calor.
Rayos β, catódicos o de e-: Se obtienen e- en un tubo catódico al vacío y son acelerados por fuerzas
electrostáticas o microondas. Tienen bajo poder de penetración por carga de materia y masa. Se
emplean para esterilizar material de suturas y quirúrgicos, son rápidamente irradiados sobre
mesadas durante la fabricación.
Rayos δ: Son emitidos por 60Co y 137Ce. Tienen gran poder de penetración. Las variables que
afectan son tensión de O2, son más efectivos en medios con peróxido u ozono (O3). Los radicales
SH2 y agentes reductores actúna como protectores por reducir la tensión de O2. La pérdida de agua
disminuye la la formación de peróxido. Las bacterias vegetativas son más sensibles que los esporos,
hongos, levaduras y virus. También se aplican para elementos de cirugía, plásticos (jeringas,
tubuladuras) prótesis, catéteres, equipos de transfusión, antibióticos, vitaminas y hormonas.
Desafortunadamente cuando se quisieron usar en alimentos, el sabor de los mismos puede ser
afectado.
En los rayos no ionizantes UV la λ bactericida más efectiva o sea de mayor absorción por el
ADN, es de 260 nm. El mecanismo de la acción letal es que forma dímeros de pirimidina (timina)
que distorsionan el ADN y producen errores al dificultar el apareamiento de bases. Existen sin
embargo reparaciones pre-replicativas (fotorreactivación) cuando se activan enzimas que hidrolizan
los dímeros o por acción de endonucleasas yu post-replicativas cuando se diluyen los dímeros en la
progenie. La radiación UV se produce artificialmentye en lámparas de vapor de mercurio (Hg).
Debido a su bajo poder de penetración tiene aplicación limitada a superficies de mesadas y pasillos
que deben estar limpios dados que la materia orgánica, polvo o suciedad protege a la bacteria.
Vibraciones ultrasónicas: El pasaje de sonido a través de un líquido provoca cambios
alternativos de presión (cavidades) de 10 μ que crecen hasta colapsar violentamente produciendo
altas velocidades y presiones de 1.000 atmósferas que desintegran la célula. Las bacterias Gram (-)
son más sensibles que las Gram (+) que resisten debido a su gruesa pared celular. Hay muchos
sobrevivien tes, se usa para estudiar componentes bacterianos.
Ondas de radiofrecuencia: La industria alimentaria fue pionera en su uso. No es práctica ya que se
necesitan difcerentes frecuencias para matar todos los tipos de microorganismos, además puede
interferir con sistemas de comunicación local.
34
a) Espectro completo en escala exponencial; b) Regiones ultravioleta, visible e infrarroja en escala aritmética.
Fuente: Stanier et al. Microbiología 2ª Ed. Ed. Reverté S.A. 1996
Filtración: Se utiliza para soluciones, líquidos orgánicos (plasma, suero, leche) o gases que no
pueden ser calentados. Se necesita vacío o presión para que pase la solución a través del filtro. En la
actualidad los más usados son los filtros de membrana (Millipore) que son discos porosos de
ésteres de celulosa (acetato o nitrato de celulosa), con un diámetro de poro de 0,2 μ. En el proceso
hay que proceder a pasar primero por filtros clarificantes para retener las partículas más grandes
hasta llegar a lo filtros esterilizantes.
Existen también filtros de aire de alta eficiencia para retener partículas (HEPA = high
efficiency particulate air) muy utilizados en las cabinas de flujo laminar para trabajar en ambientes
estériles y de protección al operador. Estos filtros deben reunir una eficiencia mínima del 99,97%
en la partícula más difícil de filtrar de 0,3 μ.
35
- potencia germicida, que sea efectivo a bajas concentraciones,
- velocidad de acción, que sean rápidos, por ejemplo los halógenos son más veloces que los
metales pesados,
- activo en presencia de materia orgánica,
- soluble,
- poca toxicidad para el tejido (fenol precipita proteínas)
- económico.
Valoración: Coeficiente fenol (CF) es la división de la mayor dilución germicida que destruye en
10 minutos a la bacteria, por la correspondiente dilución fenólica que actúa en igual tiempo.
Ej. desinfectante X dilución 1/300, fenol 1/90 300/90 = 3,33 cuando el resultado es > 1 su
potencia es > que fenol y a la inversa si es < 1 su potencia es < al fenol.
Halógenos: Yodo y cloro (CF = 200) son los más utilizados. Son excelentes esporicidas o
sea que tienen un amplio espectro microbicida (bactericida, fungicida, viricida). Se ligan e inactivan
con proteínas, corroen metales.
I: + alcohol = tintura de I , es efectiva al 1 o 2%
+ detergente o agentes activos de superficie = yodofores, povidona I, se usa para preparar
campos quirúrgicos por su alta efectividad.
+ agua = solución acuosa de Lugol.
Cl: Se usa como cloraminas o hipoclorito de Na. Cl + agua = ácido hipocloroso en la forma no
disociada efectiva, a una concentración de 0,2 ppm se combina con proteínas primero y luego oxida
las bacterias liberando O2 que tiene efecto desodorante. Extermina la mayoría de los gérmenes en 20
segundos.
La lavandina pura viene a una concentración de 5,25% (52.500 ppm) de Cl útil. Se utiliza diluida
1/100 = 525 ppm, excelente desinfectante para baños, instrumental y equipos de la industria
alimentaria, lugares públicos.
Metales pesados: mercurio (Hg), plata (Ag), cobre (Co), zinc (Zn). Las sales solubles
precipitan proteínas con grupos SH2 dando proteinatos insolubles. No son esporicidas,
bacteriostáticos de acción lenta.
Hg: Sales inorgánicas solubles: cloruro y bicloruro de Hg son muy tóxicos.
Compuestos inorgánicos insolubles: óxido de Hg rojo y amarillo.
Compuestos orgánicos: timerosal o tiomersal, mertiolate (CF 40), mercurocromo
Ag: (CF 6,7) Las sales inorgánicas como nitrato de Ag se usaban en la oftalmía
gonocóccica del neonato. Luego se combinaron con compuestos orgánicos haciéndolas más suaves
como el vitelinato (Argirol) y albuminato (Protargol) de Ag.
36
Alcoholes: El más usado es el alcohol etílico (CF 0,4) al 70-90% en agua, desnaturaliza
(coagula) proteínas y disuelve membranas lipídicas, tiene acción germicida rápida. Es efectivo
contra virus desnudos y envueltos, no es esporicida. El alcohol isopropílico es más tóxico, provoca
narcosis.
Ácidos: Depende del grado de disociación de H+. Los ácidos orgánicos débiles (ácido acético
o vinagre, ácido benzoico, láctico, cítrico y propiónico) son más efectivos que los fuertes. Se usan
como conservantes de alimentos. Los ácidos más fuertes (inorgánicos) se usan para limpiar
incrustaciones minerales, óxido de hierro, etc.
Fenol o ácido carbólico: Se extrae del alquitrán de hulla por destilación o por síntesis. Se
usa al 5%, puro es cáustico. Caracterizado por uno o más grupos carboxilos unidos al anillo
benceno. Coagula proteínas, destruye la permeabilidad selectiva de membrana resultando en
pérdida de constituyentes celulares y muerte. Son muy eficaces para BAAR. Se usan para
desinfectar ambientes, pisos, paredes y equipos.
Alquifenoles metilados en posición orto, meta y para-cresol (creolina, lisol)
Halofenoles: cloroxilenol (CF 70, Espadol) y hexaclorofeno (CF 125, Fisohex) luego prohibido
por toxicidad neurológica en bebés por absorción dérmica.
37
grasas animales con NaOH o KOH. Tienen acción bactericida débil, más bien actúan englobando y
arrastrando las bacterias y suciedad.
Detergentes catiónicos: Compuestos de amonio cuaternario (NH4) como cloruro de benzalconio
(CF 275), bromuro de cetilpiridinio, cetrimide, lauril sulfato de Na. Son potentes germicidas
(bacterias, virus), no esporicidas ni efectivo contra BAAR. Se usan para limpiar y desinfectar
instrumentos, utensilios, elementos de goma y también en el tambo e industria láctea. Son
inactivados por proteína, jabones y fibras de celulosa.
Detergentes no-iónicos: Poseen poca o ninguna actividad desinfectante. Tween 80 facilita la
separación y dispersión de micobacterias y proporciona fuente de ácido oleico.
Bibliografía:
Stanchi, N.O. Microbiología Veterinaria. 1ª ed. Ed. Intermédica. Buenos Aires. 2005.
Stanier, R.Y.; Ingraham, J.L.; Wheelis, M.L. & Painter, P.R. Microbiología, 2ª Ed. Ed. Reverté
S.A. 750 pp, 1996.
División Bacteriana
La molécula de ADN es una doble hélice constituida por un par complementario de cadenas
polinucleotídicas que se mantienen unidas por dos o tres puentes laxos de hidrógeno entre bases que
permitan la distancia ( A=T y G=C). Es una secuencia lineal de pares de nucleótidos cuyo orden
constituye el mensaje genético que contiene toda la información necesaria para determinar la
estructura y función de la célula.
Las bacterias son haploides: el único cromosoma que poseen se encuentra superenrollado y
en contacto con un mesosoma en el lugar donde se forma la horquilla duplicativa o replicón (oriC).
El ADN bacteriano tiene una longitud de 1 mm lo que corresponde a 5 x 106 pares de bases (pb) y
un peso molecular de 3 x 109 Daltons (D). Es una molécula fuertemente cargada ya que cada pb
contiene un resto P (extremo 5`) y OH (extremo 3`) ionizados. En los eucariotas los neutralizan
proteínas histonas mientras que en las bacterias existen pequeñas poliaminas (espermina,
espermidina y putrescina).
Para duplicarse debe primero desenrollarse por acción de una topoisomerasa o ADN girasa
que alivia el superenrollamiento para que los termine las helicasas. Las proteínas de unión a cadena
simple o SSB se adhieren a las cadenas abiertas de ADN que quedan expuestas a la acción de la
ADN-polimerasa III que polimeriza o sintetiza ADN nuevo en sentido 5’ → 3’. Sólo una cadena
parental, la conductora o líder, es copiada de manera continua en esta dirección; la cadena
antiparalela, es retrasada o rezagada porque necesita la síntesis previa, por medio de una ARN-
polimerasa, proteína iniciadora o primasa, de una corta cadena de ARN cebador o primer que
proporcione oxidrilos libres 3’ a los que la ADN-polimerasa III añada desoxinucleótidos. La
síntesis se lleva a cabo en cortas secuencias de 1.000 a 2.000 nucleótidos de ADN (fragmentos de
38
Okazaki). La ADN-polimerasa I remueve los cebadores hidrolizándolos y por último la
polinucleótido (PN)-ligasa sella los fragmentos con enlaces fosfo-diéster.
No está aún dilucidada la acción de la ADN-polimerasa II.
A medida que el ADN se desenrolla la horquilla avanza por la molécula. La velocidad de
avance es constante. Por ejemplo el tiempo que necesita para la duplicación completa del ADN un
E. coli es de 40 minutos a 37ºC, si la división celular dura > de 40’ se debe a síntesis de proteínas y
ARN. En un medio rico, que permita que el ciclo dure < de 40’, no aumenta la velocidad de síntesis
sino el número de horquillas o replicones (hasta 3) que originan 4 copias del cromosoma antes que
finalice el ciclo anterior. Esto permite que el tiempo de generación (intervalo entre dos
duplicaciones) se acorte a la mitad (20’). Los cromosomas hijos se separan antes de la división
celular.
Horquilla replicativa. Fuente: Brock Biología de los microorganismos, 8ªed. Prentice Hall , 2000.
La maquinaria de división bacteriana, extraído de Margolin, W. (1999) The Bacterial Cell Division
Machine. ASM News, 65 (3): 137 – 143.
La división celular es compleja y variada. En eucariotes los microtúbulos del huso mitótico
sirven para la separación y dirección de los cromosomas, su posición es crucial para el plano de
división celular. Cómo funcionan estos mecanismos en las bacterias? Como las células eucariotas,
la mayoría de las bacterias en crecimiento se dividen rápido ni bien los cromosomas hijos se han
dividido y segregado exitosamente. Aunque los mecanismos moleculares que intervienen son
menos conocidos que en los eucariotes, las estrategias bacterianas parecen ser diversas, reflejando
quizás, los diferentes tipos físicos bacterianos. Es así que la gruesa pared celular de los enterococos
contiene bandas que se corresponden con los futuros sitios de división, otros Gram (+) como
Bacillus subtilis forman un septum grueso en un punto medio. Varias bacterias Gram (-) como
Escherichia coli que tienen pared celular fina parecen dividirse superponiendo las invaginaciones
de la membrana citoplasmática o mesosomas, pared celular y membrana externa.
39
División binaria (binary fission) y estadíos de esporulación (sporulation) de Bacillus subtilis. Cell envelope:
envoltura celular. FtsZ ring: anillo proteico que marca sitio de división. Nucleoid: nucleoide. Mother cell:
célula madre. Forespore: preesporo. Spore: esporo. Fuente: Microbe (ASM), 1(3): 129 2006
Existe una proteína específica (FtsZ), análoga a actina o tubulina de los eucariotes, que
marca el plano de división en forma de anillo, en el centro exacto de la célula vegetativa de E. coli.
Comparte secuencias homólogas con tubulina y también es una GTPasa, es decir hidroliza
moléculas de GTP luego de formar estructuras que semejan polímeros de tubulina. Homólogos de
FtsZ han sido encontrados en todas las especies de bacterias y Archaea investigados, con excepción
de la parásita intracelular obligada Chlamydia trachomatis que posee otro tipo de multiplicación. La
evidencia estructural, genómica y funcional sostiene la idea de que tubulina evolucionó a partir de
FtsZ. Existen evidencias de que el septum para la próxima división se inicia antes de la misma en la
célula madre .
Crecimiento bacteriano:
El crecimiento es el aumento ordenado de constituyentes químicos. Puede ser individual
(aumento de tamaño, aumento de la masa total por acumulación de reserva, glucógeno o ácido β
poli hidroxibutírico, PHB) o poblacional (aumento del número de individuos).
La medida del crecimiento en poblaciones unicelulares se realiza utilizando dos parámetros no
equivalentes: masa celular / volumen determinado (generalmente ml) y
número de células / “ “ “
40
Medida de la masa celular:
Por método directo, se determina el peso seco celular en un volumen determinado.
Generalmente 1 mg de peso seco se corresponde con 1.000 a 5.000 millones de bacterias.
Por método indirecto se mide, a) algún componente (C – N), b) la cantidad de una enzima en
un proceso metabólico de respiración o cantidad de ácido láctico en una ferm entación y c) la
cantidad de un precursos radiactivo (aa marcados).
Por métodos ópticos: colorimétrico o espectrofotómetro, determina la cantidad de luz
difractada por una suspensión bacteriana. El poder de difracción es proporcional a la concentración
(a > concentración > difracción) dentro de ciertos límites, siendo el inferior de 107 células/ml =
0,01 a 0,5 mg/ml, si la suspensión está muy concentrada diluir.
La relación masa de células suspendidas / densidad óptica se obtiene empíricamente midiendo
directamente el peso seco de la suspensión celular de determinada densidad óptica.
Recuento viable: Consiste en realizar diluciones del líquido problema, (leche, orina)( si es sólido se
debe homogeinizar respetando proporciones, sembrar 1 ml de por lo menos dos o tres diluciones,
colocar agar disuelto, incubar a 37ºC por 24 hs. , contar las unidades formadoras de colonias (UFC)
y multiplicar por la dilución correspondiente.
Expresión matemática del crecimiento: En condiciones favorables una población bacteriana duplica
su número (crecimiento geométrico) en períodos regulares de tiempo. Si consideramos que una
población o clon se origina a partir de una bacteria y ésta se divide cada 20 minutos lo podemos
expresar en la siguiente tabla.
41
180 9 512 9
200 10 1024 10
Bibliografía:
Angert, E. Beyond binary fission: some bacteria reproduce by alternative means. Microbe, ASM,
1 (3): 127-131 2006.
Genética bacteriana
Gen: es un segmento de ADN o ARN de algunos virus, cuya secuencia de bases determina,
por el proceso de transcripción, una secuencia de bases de ARN y, por el proceso de traducción, una
secuencia de aminoácidos (aa) de una cadena polipeptídica (pp). Consta de exones que se
transcriben y traducen (expresan) y de intrones que no se transcriben.
Genomio o genoforo: es el conjunto de genes de un organismo.
Genotipo: es la disposición particular de los genes.
Fenotipo: es la manifestación biológica o morfológica, la ‘expresión genética’ y es el
resultado de la interacción del genotipo con el medio interno y externo de la célula. Se puede ver o
medir.
La mayoría de los pp tienen un PM de 30.000 a 40.000 D, lo que constituye una cadena de
250 a 300 aa. Si cada aa es codificado por 3 pb, un gen promedio tiene 900 a 1.000 pb. El
cromosoma bacterianoi es capaz de codificar unas 3.000 proteínas.
42
Fuente: Stanier et al. Microbiología 2ª Ed. Ed. Reverté S.A. 1996
Todos los caracteres son susceptibles de cambiar. Estos cambios pueden ser:
43
Cuando la mutación puntual recae en el 3º pb del codón, generalmente son silenciosas dado
que cada aa está codificado por más de un codón (existen 64 combinaciones de tripletes para 20 aa)
y, por sinonimia genética, se codifica el mismo aa a pesar del cambio. Pero cuando afecta al 1º pb
cambia el sentido de la proteína porque se codifica otro aa, existe corrimiento en la lectura con
resultados drásticos que pueden llevar a pérdida de la función de una enzima (ez).
Existen mutaciones supresoras que revierten el efecto de mutaciones anteriores. Si ocurren
en el mismo gen se denominan intragénicas y si suceden en otro gen son intergénicas.
Las mutaciones espontáneas ocurren espontáneamente, por errores al azar de la ADN-
polimerasa que elige PN erróneos. Cada gen puede mutar con una frecuencia de 1 cada 500.000 pb
y una célula cada 105 o 109.
Las mutaciones inducidas aumentan su frecuencia 10 a 100 veces por la acción de agentes
mutágenos físicos (rayos X, γ y UV ) y químicos (análogos de bases: 2 aminopurina, 5
bromouracilo, hidroxilamina, ácido nitroso, colorantes de acridina, bromuro de etidio).
Las bacterias tienen una gran variedad de mecanismos para controlar la expresión de sus
miles de genes, con lo cual logran que el producto de un gen determinado, sólo se sintetice cuando
es necesario y en lo posible, en la cantidad óptima. Esto les permite una sorprendente capacidad de
adaptación a cualquier cambio en la concentración de nutrientes del medio en que habitan,
activando sólo cuando es necesario, determinadas vías metabólicas. Así evitan sintetizar enzimas
cuando falta el sustrato correspondiente, pero siempre están preparadas para fabricarlas cuando
aparece el sustrato en el entorno. Un importante mecanismo regulatorio se basa en la activación o
desactivación de la transcripción de un grupo de genes cuyos productos tienen funciones
relacionadas, que se encuentran organizados en una región del genoma de forma de regular su
expresión en conjunto. Esta forma de organización genética, se denomina operón y le permite a la
célula administrar en forma adecuada sus reservas energéticas.
44
se une a una secuencia específica del ADN y ayuda a la ARN polimerasa en los pasos iniciales de la
transcripción.
Los operones pueden ser inducibles o reprimibles. Un ejemplo clásico es el del operón
lactosa (lac), descrito en E. coli. Este operón, contiene un conjunto de genes cuyos productos son
las enzimas responsables de la degradación de la lactosa. En ausencia del disacárido en el medio, el
operón es reprimido por la unión de una proteína represora a la secuencia del operador, lo que
impide la función de la ARN polimerasa. La adición de lactosa anula esta represión, ya que el
propio azúcar actúa como inductor, uniéndose a la proteína represora, impidiendo que ésta continúe
asociada al operador. Este mecanismo de control negativo, asegura que el operón lac se transcriba
sólo cuando lactosa se encuentre en el medio.
45
Fijación de fago T4 (a) a LPS de ME (b) de Escherichia coli e inyección de ADN (c). Fuente: Brock Biología de los
microorganismos, 8ªed. Prentice Hall , 2000.
Destino del exogenote: El ADN nuevo o extraño que ingresó a la bacteria se denomina exogenote,
para diferenciarlo del propio o endogenote. Si sus bases no son homólogas con las de la bacteria
recipiente, puede persistir y replicarse en forma autónoma, persistir sin replicarse o bien ser
digerido por endonucleasas. Si sus bases son homólogas se recombina, se integra al ADN del
hospedador por dos mecanismos: ruptura-fusión o copia-elección. En el primero se produce una
apertura de la cadena y se incorpora el nuevo segmento, en el segundo, se alinea con el ADN
original y la ADN polimerasa copia al nuevo.
Diversidad bacteriana extraído de Saier, M.H. (2000) Bacterial Diversity and the Evolution of
Differentiation. ASM News, 66 (6): 337 – 343.
Las primeras formas de vida aparecieron alrededor de 3.500 millones de años atrás, eran
procariotes. Las bacterias termofílicas fueron los primeros lineajes. Se tiende a definirlas por su
relativa simplicidad morfológica y por la ausencia de varias características halladas en las células
modernas. Aunque sus descendientes tienen un solo cromosoma, éste no se encuentra dentro de un
núcleo y su citoplasma no contiene mitocondrias no organitos citoplasmáticos. Estos organismos
son la base de los Dominios Archaebacteria y Eubacteria.
46
Los procariotes tuvieron el mundo para ellos solos por 1.500 millones de años e inventaron
la fotosíntesis durante ese tiempo. No antes de 2 billones de años atrás, la vida sobre la Tierra
realizó otro paso gigante: la evolución de la célula eucariota. Varios biólogos creen ahora que esto
arribó como resultado de una unión simbiótica mutuamente beneficiosa de diferentes clases de
procariotes dentro de otro hospedador procariota. Las mitocondrias se especializaron en la
oxidación de ácidos tricarboxílicos (ciclo de Krebs) proveyendo energía inmediata a las células a
través de adenosín tri-fosfato o ATP. Los plástidos pueden contener pigmentos fotosintéticos y
enzimas (cloroplastos) o pueden almacenar nutrientes.
Los eucariotas tienen su ADN organizado en un número determinado de cromosomas que
se encuentran en el núcleo rodeados por una membrana. La división celular involucra un proceso
complejo denominado mitosis en el cual la membrana nuclear se rompe y un huso mitótico de
túbulos contráctiles se desarrolla por los que los cromosomas duplicados son guiados a los polos
opuestos de la célula. Cada juego completo de cromosomas son envueltos por una nueva membrana
nuclear y la célula finalmente se divide en dos. Sólo este tipo de células, con los mecanismos
genéticos precisamente regulados tienen el potencial de evolucionar a organismos multicelulares en
los cuales las células están organizadas en diferentes tejidos y órganos.
Los procariotas tienen un solo cromosoma, usualmente circular, y se dividen por un proceso
mucho más simple denominado fisión binaria, manteniendo su condición unicelular.
Si la vida arribó a la Tierra, la primera célula debió haber sido capaz de construir una forma
de vida procariota resistente; pero si la vida se llevó a cabo en la Tierra, la primer célula debió haber
sido una forma vegetativa capaz de crecer en el caldo primordial.
Asumiendo que el segundo postulado es correcto, se puede proponer una secuencia de
eventos que llevan a las cianobacterias actuales. Primero, condiciones ambientales moderadamente
adversas necesitarían un simple programa reversible para formar un estadío inducido por estrés,
similar al estado estrés-resistente de los tipos silvestres de E. coli que pueden permanecer sin
duplicarse por varios días. Segundo, condiciones más severas promoverían el desarrollo de
programas irreversibles pero cíclicos para construir un estado durmiente más resistente similar a los
endosporos de Bacillus o exosporos de Streptomyces. Tercero, deficiencias nutricionales pueden
llevar a organismos esporulantes simples a que sean capaces de realizar fotosíntesis y fijar N2,
asemejándose a las actuales cianobacterias.
Filogenia bacteriana, extraído de: Shapiro, J.A. (1999) Views about Evolution are Evolving. ASM
News, 65 (4): 201 – 207 y Ludwig, W. and Schleifer, K.H. (1999) Phylogeny of Bacteria beyond
the 16S rRNA Standard. ASM News, 65 (11): 752 - 757
47
están organizadas en número finito de dominios reconocibles que están repetidos y reacomodados
en diferentes moléculas. Se ha comprobado que las secuencias de ADN que codifican estos
dominios de proteínas homólogas son procedimientos más eficaces para sintetizar enzimas de gran
actividad que tratando de mejorar la eficiencia por la modificación de las secuencias codificantes
intactas.
Los segmentos repetitivos de ADN representan otro aspecto de la plasticidad y adaptabilidad
genómica. Existe amplia evidencia de la importancia funcional de estos elementos que incluyen
secuencias simples repetitivas (que producen cambios en el nivel de la expresión génica y
variaciones de fase en los determinantes patogénicos), arreglos en tandem y motivos ligados de
ADN para factores de transcripción. Cambios en estos elementos repetitivos pueden llevar a nuevas
configuraciones regulatorias de la arquitectura genómica y pueden ser la llave de eventos genéticos
que lleven hacia la especiación.
Las recientes comparaciones de las secuencias genómicas de los procariotes están
cambiando nuestra imagen de evolución bacteriana. Los datos de los proyectos genómicos
microbianos indican que sólo un limitado número de genes, menos de 40, están presentes en todas
las secuencias de los genomas dilucidados y comparten suficiente similitud para ser reconocidos y
utilizados como marcadores potenciales.
La no homología entre genomas provee evidencia de que la transferencia lateral u
horizontal de ADN entre especies es más extendida de lo que generalmente se asume, lo que hace
dudar acerca de la validez de las rígidas ramas de los árboles filogenéticos. No se puede excluir
completamente la posibilidad de que aún marcadores estables como los genes de ARN ribosomal
están sujetos a esta transferencia lateral aunque sea menos intercambiable que la mayoría de los
otros genes. Sin embargo, los árboles construidos en base a ARNr 16S reflejan la filogenia de los
organismos, tal vez no en todos sus detalles, pero al menos globalmente y, por el momento, es el
mejor método de inferir las relaciones filogenéticas entre bacterias.
Varios caracteres importantes del genoma diferentes de las secuencias codificantes de
proteínas son blancos de los cambios evolutivos. Las células frecuentemente leen múltiples
mensajes en una simple secuencia de ADN. Por consiguiente, patrones de conservación y
variabilidad pueden ser debidos a mensajes más que a estructuras proteicas. Los estudios
moleculares de las mutaciones y arreglos en el ADN han demostrado que no ocurren al azar y no
están limitados sólo a sustituciones de nucleótidos. Grandes segmentos de ADN pueden ser
removidos y afectar por ejemplo, los blancos del sistema inmunológico al generar hipermutaciones
en grupos de nucleótidos. Regulaciones temporales de períodos cortos de alta mutabilidad pueden
coincidir con episodios ecológicos importantes cuando cambios mayores en el medio selectivo
favorecen la emergencia de nuevas especies con nuevas adaptaciones.
Clasificación bacteriana
En 1923 D.H. Bergey en Estados Unidos, publica la primera edición del Manual de
Bacteriología Determinativa, donde combina la morfología y fisiología y compila la mayoría de las
especies bacterianas descriptas dentro del Reino Vegetal. Este manual tiene un fuerte apoyo del
Comité Internacional de Sistemática Bacteriana (International Committee for Systematic
Bacteriology o ICSB), fundado en 1930. En esa época se dieron cuenta que el código Botánico no
era más adecuado para la taxonomía microbiana, es así como el ICSB deriva en el Comité
Internacional de Sistemática Procariótica (International Committee for Systematics of Prokaryotes o
ICSP) para desarrollar un código internacional de nomenclatura bacteriana.
48
taxonómica, aunque esto no significa que los organismos esteésn también relacionados
filogenéticamente.
Para regular los nombres de las especies biológicas, el botánico sueco Carl von Linné que
vivió en el siglo XVIII (1707-1778) propuso un sistema binomial en su Systema Naturae (1735)
para uniformar la nomenclatura.
La descripción del término especie se debe referir no a un solo tipo de organismo sino a un
grupo relacionado filogenéticamente o filotipo. Lo mismo sucede con un género que abarca un
grupo de especies relacionadas; una familia (sufijo aceae) un grupo de géneros relacionados; un
orden (sufijo ales) un grupo de familias relacionadas; una clase un grupo de órdenes relacionados;
una división un grupo de clases relacionadas y un Dominio o superrreino, un grupo de divisiones
relacionadas. Anteriormente a esta clasificación que simplificó la taxonomía, las bacterias
pertenecían al Reino Procariote.
Bibliografía:
Trüper, H.G. (1995) International Perspectives on Taxonomy: from the Past to the Future ASM
News 71 (6): 273 - 277.
Cicuta, M.E. Árboles de evolución molecular. Cátedra de Microbiología, FCV/UNNE, 4 pp. 1999.
Reconstruyendo el Árbol Universal de la Vida, extraído de Brown, J.R. (2004) Reconstructing The
Universal Tree of LIFE , CHAPTER 2, PP. 15-33.
49
El árbol molecular de la vida, extraído de Pace, N.R. (1999) Microbial Ecology & Diversity. ASM
News 65 (5): 328-333.
Schleifer, K.H. Classification of Bacteria and Archaea: Past, present and future. Sistematic and
Applied Microbiology (In press) 2009
50
bioquímicamente, son extremófilas, viven en fuentes de SH2, lechos oceánicos, soportan altas
presiones y alta osmolaridad (como la del Mar Muerto). La separación está basada en secuencias de
ARNr, ARN polimerasa, lípidos, su maquinaria transcripcional e histonas que las acercan a las
eucariotas.
Lista de nombres bacterianos con la nomenclatura actual (List of Bacterial Names with
Standing Nomenclature, LBNSN) 2009 http://www.bacterio.cict.fr/classifphyla.html
Dominio Bacteria
División Spirochaetae –
Familia Brachyspiraceae - Género Serpulina.
Familia Leptospiraceae - Género Leptospira
Familia Spirochaetaceae - Géneros Borrelia - Treponema.
División Cyanobacteria.
Bibliografía:
Trüper, H.G. Internacional perspectives on taxonomy: from the past to the future. ASM News, 71
(6): 273-277 2005.
53
decir que se separen ambas hebras; segundo, a temperaturas adecuadas para que los cebadores
hibriden con el ADN molde (entre 40 y 55 ºC, según los cebadores); y en tercer lugar, a la
temperatura adecuada para que la polimerasa de ADN lleve a cabo el proceso de replicación. Las
polimerasas que se utilizan para esto, deben ser capaces de tolerar estas altas temperaturas de
desnaturalización del ADN, por lo que la enzima utilizada, corresponde a una bacteria termófila,
Thermus aquaticus, por lo cual se la llama Taq polimerasa, cuya temperatura óptima es de 72
grados. Hoy día se utiliza ésta y también otras enzimas, producidas en forma recombinante en E.
coli . Estos cambios de temperatura, se realizan en un equipo conocido como termociclador, que es
capaz de variar entre rangos muy amplios de temperatura en tiempos muy cortos. Este ciclado de
temperaturas, por ejemplo 94º por 1 minuto, 45º por 1,5 minutos y 72 º por 1 a 5 minutos. se repite
unas 30 veces, con lo que se logra que en cada ciclo se duplique el número de copias de cada una de
las hebras del ADN molde, con lo que se logra un crecimiento exponencial. Este procedimento,
puede aplicarse directamente sobre una muestra clínica, buscando determinar la presencia o
ausencia de un microorganismo en particular, a través de la detección de una secuencia específica
en su ácido nucleico.
Para revelar el resultado del ensayo, la mezcla de reacción debe ser utilizada como muestra
en una corrida electroforética en gel de agarosa o de poliacril amida, en donde el ADN migra
desde el polo negativo (ánodo) al positivo (cátodo), en mayor o menor medida según su peso
molecular, es decir su tamaño en pares de bases. El fragmento a amplificar, es por supuesto de un
tamaño conocido, por lo que podrá determinarse la presencia del gen buscado en la muestra, porque
habrá amplificado en la reacción y presentará una banda del tamaño correspondiente en el gel. Los
geles deberán ser revelados para que desarrollen una reacción de color visible, que nos ayude a
determinar la presencia o ausencia de la banda de interés. En el caso de los geles de agarosa, el
revelado se hace generalmente con bromuro de etidio, que es un agente intercalante del ADN, es
decir que su molécula se intercala entre las bases del ácido nucleico. Este procedimiento, resulta en
un “teñido” del gel, ya que el bromuro de etidio tiene la propiedad de fluorescer bajo luz
ultravioleta, por lo que al ser expuesto el gel a UV, se evidenciará la presencia o ausencia de la
banda correspondiente. En el caso de los geles de poliacrilamida, el revelado puede realizarse por
tinción con nitrato de plata.
El resultado de la PCR, también puede hacerse evidente, combinándola con una técnica de
hibridación por sondas. Esto se logra transfiriendo el ADN del gel a una membrana (por ejemplo
de nitrocelulosa), y poner a ésta en contacto con una sonda específica. En este caso, el revelado lo
brinda la marca de la sonda. Este procedimiento de transferencia de ADN a una membrana
combinado con hibridación por sondas, se denomina Southern Blott.
La aplicación de la biotecnología molecular a la medicina, representa un campo de intensa
investigación y vertiginoso desarrollo. La prevención, el tratamiento y el diagnóstico de muchas
enfermedades que hasta hace pocos años resultaba imposible, hoy son una realidad, y cada vez más
la biología molecular aporta conocimientos y tecnología aplicables a la mejora de la calidad de vida
y la salud humana.
Las enzimas de restricción permiten construir el mapa físico del ADN que muestra la
distancia de pares de bases (pb) y posiciones diferentes en moléculas. La distancia entre los sitios de
corte determinan el tamaño de los fragmentos de restricción. Los más pequeños migran más rápido
en un campo eléctrico, se comparan con marcadores de peso molecular conocido. El tamaño del
freagmento de restricción no revelará su posición, para determinarla se usan 2 enzimas de
restricción diferentes.
Secuenciación del ADN: La secuencia de ADN nos dará la secuencia de aminoácidos (aa).
Es más fácil secuenciar ADN que ARN y proteínas. El método más utilizado es el de Sanger:
Se emplean dideoxinucleótidos (ddN) que tienen H en lugar de OH en 3’(posición ribosa),
pueden fosforilarse y unirse a la cadena pero no incorporan más nucleótidos por falta de OH y la c
adena termina. Se producen 4 reacciones de polimerización separadas, cada una tiene pequeñas
cantidades de un dd-TTP, ddGTP, ddATP y ddCTP mezclados con desoxinuleótidos normales
54
(dTTP, dGTP, dATP y dCTP). Se agrega un cebador de ADN o primer pequeño de secuencia corta
conocida, adyacente a secuencia desconocida + ADN polimerasa. Cuando el ddN es incorporado se
termina la cadena en él. Para analizar se comienza con la secuencia más corta, como termina en el
ddN, el templado contendrá en ese lugar la base complementaria. En la práctica es posible
secuenciar de 200 a 300 bases de ADN clonado en juegos simples de ddN. Haemophilus influenza,
la primer bacteria secuenciada en 1995 posee 1.800.000 pb, Mycobacterium tuberculosis 5.500.000
pb.
Bibliografía:
Fox, J.L. Microbial genomics poised for progress. ASM News, 66(12):727-731 2000.
Trüper, H.G. International perspectives on taxonomy: from the past to the future. ASM News, 71
(6): 273-277 2005.
Cómo los genomas emergen de los genes?: Extraído de: Heinemann, J.A. & Billington, C. (2004)
How do genomes emerge from genes? ASM News 70 (10): 464 – 471.
55
Hasta 1970 la creencia de la diversidad evolutiva fue enmarcada en el contexto de que un
organismo era procariota o eucariota. Carl Woese, a través de estudios filogenéticos moleculares de
microorganismos revolucionó el entendimiento de la diversidad biológica y la evolución. Cuando
Woese comenzó a analizar las secuencias de ARN ribosomal (ARNr) esperaba que las de diversos
organismos cayeran dentro de dos o tres grupos fundamentalmente diferentes, provenientes o
descendientes de los dominios actualmente designados Archaea (antes Archaeabacteria), Bacteria
y Eucarya. El árbol de la evolución está lejos de ser completo, sin embargo, brinda un sentido más
amplio del orden natural para la clasificación e identificación de los microorganismos. Este árbol
filogenético basado en la secuencia provee una medida de la diversidad y un mapa del curso de la
evolución que lleva a una descripción más exacta de los organismos modernos.
Sólo una pequeña proporción de microorganismos, usualmente < del 1%, puede ser
cultivado con las técnicas habituales. El comportamiento de estos microorganismos puede no ser
representativo de lo que ocurre en las comunidades y ambientes naturales. De hecho, los
microorganismos que son abundantes en su habitat han evadido los esfuerzos de ser cultivados. Las
razones de estos fracasos están reflejando la inhabilidad para recrear condiciones apropiadas y lo
que es aún más difícil: la interdependencia o sintropía entre dos o más microorganismos. La
sintropía probablemente sea común en los ecosistemas microbianos.
La biología molecular está abriendo nuevos caminos en el estudio de los microorganismos y
sus diversos ambientes, sin necesidad de cultivarlos. Por ejemplo, analizando los genes relevantes
obtenidos directamente de muestras ambientales, microorganismos de hábitats particulares pueden
ser no sólo identificados sino contados y evaluados. Las secuencias de ADN microbiano son
recursos para diseñar herramientas adicionales como sondas de hibridación que pueden ser usadas
para identificar, monitorear y analizar los integrantes de un ecosistema particular. A pesar de todas
las secuencias analizadas aún se está lejos de entender a las células y su ubicación en el medio, ya
que estas secuencias nos dan a conocer las moléculas pero no las interacciones fisiológicas de las
mismas.
Muchos de los problemas que aquejan a la sociedad como manejo de efluentes, salud
pública y control de epidemias, por citar algunos, involucran problemas fundamentales de ecología
microbiana. Si se comprendiera la interacción que los microorganismos llevan a cabo en las
comunidades responsables de esos procesos, se podrían canalizar algunas de sus actividades. El
mundo microbiano promete recursos inagotables. La humanidad tiene una larga historia de
dependencia de las comunidades microbianas para fabricar alimentos tales como el pan, embutidos,
quesos y vinos. Recién en el siglo XX se han utilizado los microorganismos para obtener
antibióticos y otros metabolitos. Tradicionalmente el desarrollo tecnológico microbiano se ha
basado más en organismos separados que en comunidades microbianas. La combinación natural de
las actividades microbianas prometen abundantes recursos para el futuro cuya llave emergerá con
un conocimiento más profundo de la naturaleza del mundo microbiano.
Ludwig, W. and Schleifer, K.H. (1999) Phylogeny of Bacteria beyond the 16S rRNA Standard.
ASM News, 65 (11): 752 – 757.
Saier, M.H. (2000) Bacterial Diversity and the Evolution of Differentiation. ASM News, 66 (6):
337 – 343.
Shapiro, J.A. (1999) Views about Evolution are Evolving. ASM News, 65 (4): 201 – 207.
Cicuta, M.E. Versatilidad microbiana. Cátedra de Microbiología, FCV/UNNE, 4 pp., 2003.
Cicuta, M.E. Diversidad bacteriana. Cátedra de Microbiología, FCV/UNNE, 5 pp. 2002.
56
de vida y principales innovadores moleculares sobre la tierra, exhiben una tremenda diversidad. Los
rangos de sus capacidades metabólicas y nichos ecológicos exceden ampliamente aquéllos
encontrados en el mundo eucariota. El biólogo molecular francés Jacques Monod dijo una vez: “Lo
que es verdad para E. coli también lo es para los elefantes”. Este precepto ha guiado en sus
investigaciones a los biólogos en las pasadas décadas. Los mecanismos de división bacteriana,
transcripción, traducción, segregación de proteínas y transporte molecular transmembrana son
reconocidos como fenómenos universales
La tierra fue inhóspita para la vida los primeros 0,2 – 0,4 billones de sus 4,5 billones de
años. De acuerdo con los hallazgos en fósiles, las tempranas formas de vida procariotas se parecían
a las cadenas de cianobacterias productoras de oxígeno existentes hace 3,8 billones de años atrás.
Las células eucariotas arribaron de líneas procariotas divergentes a través de procesos
endosimbióticos que ocurrieron por un período de alrededor de dos billones de años, hace tres o un
billón de años. Los libros de texto describen tres formas dominantes de bacterias: esféricas,
bacilares y espiralares. Sin embargo, estos tres tipos morfológicos no son completamente
representativos del mundo procariota. Algunas bacterias como Nocardia y Streptomyces forman
micelios como los hongos, mientras que otras como Rhodomicrobium e Hyphomicrobium se
reproducen por gemación como las levaduras. Las especies de Streptomyces producen estructuras
aéreas asemejándose a aquéllas de las plantas, mientras que las espiroquertas pueden asumir
apariencias de serpientes. Por consiguiente, varios programas morfogenéticos están codificados
dentro de los pooles de genes procariotas y ellos han arribado mucho antes de la aparición de las
células eucariotas.
Bacteria fósil: Dos tipos de cianobacterias de Australia central, un sitio que data de
la era Proterozoica, alrededor de 850 millones de años. Izquierda, colonia de forma
chroococcalean, a la derecha Palaeolyngbya filamentosa. Fuente: PaleoBios,17(1):
20-26
57
Fuente: gopher://gopher.adp.wisc.edu:2070/11/image/.bot/.130/Cyanobacteria
Vida sin luz en las Galápagos: En la profundidad de los océanos, donde no llega la luz del sol, los
seres vivos se han adaptado en forma sorprendente. Riftia pachyptila son gusanos que viven en las
corrientes hidrotermales, alcanzan varios metros y poseen una estructura única, los trofosomas,
densamente poblado por bacterias que lo proveen de todos los componentes orgánicos. Estas
bacterias utilizan el sulfuro de H como fuente de energía para convertir del CO2 en azúcares.
Fuente: Kirsti Ritalahti http://microbezoo.commtechlab.msu.edu/curious/caOc96KR.html
Polaridad celular
Eventos propuestos
Si la vida arribó a la Tierra, la primera célula debió haber sido capaz de construir una forma
de vida procariota resistente; pero si la vida se llevó a cabo en la Tierra, la primer célula debió haber
sido una forma vegetativa capaz de crecer en el caldo primordial.
Asumiendo que el segundo postulado es correcto, se puede proponer una secuencia de
eventos que llevan a las cianobacterias actuales. Primero, condiciones ambientales moderadamente
adversas necesitarían un simple programa reversible para formar un estadío inducido por estrés,
similar al estado estrés-resistente de los tipos silvestres de E. coli que pueden permanecer sin
duplicarse por varios días. Segundo, condiciones más severas promoverían el desarrollo de
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programas irreversibles pero cíclicos para construir un estado durmiente más resistente similar a los
endosporos de Bacillus o exosporos de Streptomyces. Tercero, deficiencias nutricionales pueden
llevar a organismos esporulantes simples a que sean capaces de realizar fotosíntesis y fijar N2,
asemejándose a las actuales cianobacterias.
Perspectivas
Las cianobacterias pueden haber sido los primeros organismos multicelulares con programas
lineales y cíclicos de diferenciación temporal como así también patrones de formación espacial. La
comprensión del proceso de desarrollo en bacterias puede proveer las bases de los correspondientes
en plantas y animales. A medida que los eucariotes incrementaban el número de programas
complejos, nuevos mecanismos regulatorios aparecieron, algunos de los cuales resultaron en la
modificación de los preexistentes en los procariotes. Otros probablemente fueron nuevos. Al
identificar las raíces moleculares de los complejos circuitos regulatorios se comprende mejor los
pasos evolutivos de los programas de diferenciación en eucariotes.
La genética molecular tuvo un profundo impacto sobre la evolución; los procesos
moleculares como replicación genómica y expresión génica, proveyeron información nueva sobre la
estructura y organización del ADN. Estos análisis han llevado a comparar secuencias individuales,
regiones cromosómicas y aún genomas enteros, atravesando los límites taxonómicos, haciéndonos
comprender la ‘fluidez’ genómica, a través de sistemas bioquímicos celulares capaces de
reestructurar las moléculas de ADN y reorganizar la informaciíon genética que codifican.
Se ha descubierto que la emergencia de resistencia antibiótica bacteriana depende de un set
de eventos genéticos que involucra plásmidos, transposones, integrones y todas las actividades
bioquímicas que inactivan los antibióticos bombeándolos fuera de la célula, alterando los sitios
blanco o proveyendo funciones celulares alternativas. Los microbiólogos aprendieron, antes que los
biólogos, que las habilidades celulares de transferir y manipular moléculas de ADN constituyen una
poderosa fuerza evolutiva.
La naturaleza de la codificación genómica es un proceso más intrincado de lo que la biología
molecular descubrió en épocas tempranas, cuando se concentraba en el código del triplete para
aminoácidos y su correspondencia lineal entre ADN y secuencia proteica. Algunas informaciones
genéticas tienen una extraordinaria plasticidad produciendo un sorprendente rango de mensajes
específicos. Varios genomas tienen estructura modular; por ejemplo la mayoría de las proteínas
están organizadas en número finito de dominios reconocibles que están repetidos y reacomodados
en diferentes moléculas. Se ha comprobado que las secuencias de ADN que codifican estos
dominios de proteínas homólogas son procedimientos más eficaces para sintetizar enzimas de gran
actividad que tratando de mejorar la eficiencia por la modificación de las secuencias codificantes
intactas.
Los segmentos repetitivos de ADN representan otro aspecto de la plasticidad y adaptabilidad
genómica. Existe amplia evidencia de la importancia funcional de estos elementos que incluyen
secuencias simples repetitivas (que producen cambios en el nivel de la expresión génica y
variaciones de fase en los determinantes patogénicos), arreglos en tandem y motivos ligados de
ADN para factores de transcripción. Cambios en estos elementos repetitivos pueden llevar a nuevas
configuraciones regulatorias de la arquitectura genómica y pueden ser la llave de eventos genéticos
que lleven hacia la especiación.
Las recientes comparaciones de las secuencias genómicas de los procariotes están
cambiando nuestra imagen de evolución bacteriana. Los datos de los proyectos genómicos
microbianos indican que sólo un limitado número de genes, menos de 40, están presentes en todas
las secuencias de los genomas dilucidados y comparten suficiente similitud para ser reconocidos y
utilizados como marcadores potenciales.
La no homología entre genomas provee evidencia de que la transferencia lateral u horizontal
de ADN entre especies es más extendida de lo que generalmente se asume, lo que hace dudar acerca
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de la validez de las rígidas ramas de los árboles filogenéticos. No se puede excluir completamente
la posibilidad de que aún marcadores estables como los genes de ARN ribosomal están sujetos a
esta transferencia lateral aunque sea menos intercambiable que la mayoría de los otros genes. Sin
embargo, los árboles construidos en base a ARNr 16S reflejan la filogenia de los organismos, tal
vez no en todos sus detalles, pero al menos globalmente y, por el momento, es el mejor método de
inferir las relaciones filogenéticas entre bacterias.
Varios caracteres importantes del genoma diferentes de las secuencias codificantes de
proteínas son blancos de los cambios evolutivos. Las células frecuentemente leen múltiples
mensajes en una simple secuencia de ADN. Por consiguiente, patrones de conservación y
variabilidad pueden ser debidos a mensajes más que a estructuras proteicas. Los estudios
moleculares de las mutaciones y arreglos en el ADN han demostrado que no ocurren al azar y no
están limitados sólo a sustituciones de nucleótidos. Grandes segmentos de ADN pueden ser
removidos y afectar por ejemplo, los blancos del sistema inmunológico al generar hipermutaciones
en grupos de nucleótidos. Regulaciones temporales de períodos cortos de alta mutabilidad pueden
coincidir con episodios ecológicos importantes cuando cambios mayores en el medio selectivo
favorecen la emergencia de nuevas especies con nuevas adaptaciones.
Ingienería genética:
Es la aplicación de los principios básicos de la genética microbiana en el aislamiento,
manipulación y expresión del material genético. Una de las contribuciones más grandes de la
ingeniería genética de bacterias, es su uso para el desarrollo de vectores o vehículos que permiten el
clonado de cualquier secuencia de ADN. Los vectores más ampliamente utilizados con este fin, son
los plásmidos bacterianos (plásmidos recombinantes). Clonar implica introducir un fragmento de
ADN en un vector. Los vectores de clonación, deben permitir la inserción de un fragmento de
ADN extraño y ser capaces de replicarse normalmente dentro de la bacteria. Los plásmidos tienen la
capacidad de autoreplicarse y son elementos génicos factibles de ser transferidos entre bacterias e
introducidos en una cepa deseada.
Utilizando estos procedimientos de clonado y expresión de genes, actualmente se producen
muchas proteínas que son utilizadas para el tratamiento de diversas enfermedades humanas, como
por ejemplo la diabetes, al producir la hormona insulina u otras como la hormona de crecimiento
o el interferón, en bacterias recombinantes obteniendo cantidades suficientes como para su
aislamiento y uso terapéutico. Por otra parte, la disponibilidad de antibióticos naturales para el
tratamiento de las infecciones bacterianas, no es infinita, por lo que otra importante área de
investigación, se centra en la aplicación de la ingeniería genética a la creación de nuevos fármacos
antimicrobianos.
Otra importante aplicación de la biología molecular, es la producción de vacunas
recombinantes contra infecciones víricas o parasitarias, en bacterias. Este procedimiento, se basa
en la expresión en bacterias de genes de patógenos que codifican, por ejemplo, antígenos de
superficie del virus o del parásito contra el que se desea vacunar, que sean capaces de actuar como
inmunógenos adecuados. Así, clonando los genes apropiados en los microorganismos, podrán
producirse grandes cantidades de antígeno puro. Este método, proporciona la ventaja de que se evita
trabajar con microorganismos patógenos. El desarrollo de la vacuna contra la hepatitis B representa
el primer éxito de las vacunas recombinantes. Es producida en una levadura, que ha sido
transformada previamente con un vector recombinante que contiene el gen del virus clonado,
encargado de codificar para una proteína de superficie inmunogénica. Estos métodos, pueden
emplearse también para la producción de vacunas vivas, es decir vacunas a ser administradas con
virus o bacterias vivas, que han sido manipuladas genéticamente para perder su virulencia pero que
mantienen intactas sus propiedades inmunogénicas. A su vez, estos microorganismos, denominados
atenuados, pueden utilizarse como vectores de genes de otros gérmenes patógenos, y lograr
producir una vacuna que inmunice contra más de una enfermedad infecciosa a la vez. Estos
procedimientos, son motivo de investigación en los laboratorios de desarrollo de vacunas en todo el
mundo.
60
Procesos fundamentales de ingienería genética. Fuente: Brock Biología de los microorganismos, 8ªed.
Prentice Hall 2000.
Antibióticos
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Sitios blanco de acción de los antibióticos
ANTIBIÓTICOS β-LACTÁMICOS
Producida por hongos del género Penicillium (P. notatum y P. chrisogenum), descubierta
accidentalmente en 1929 por el Dr. Alexander Fleming cuando sus cultivos desaparecieron por
contaminarse con estos hongos. Es una molécula constituida por un anillo β-lactámico y uno
tiazolidínico. El primero es afectado por las β-lactamasas o penicilinasas que transforman a la
molécula en ácido penicilinoico inactivo. Estas enzimas son constitutivas (se encuentran en el
espacio periplásmico), en pequeña cantidad y tienen menor afinidad de sustrato en las Gram (-),
en cambio en las Gram (+) son inducibles, producidas en gran cantidad y tienen gran afinidad
por el sustrato.
1- Penicilinas efectivas contra Gram (+) (no atraviesan membrana externa de las Gram -)
a- Naturales (β-lactamasas sensibles): Penicilina G (bencilpenicilina, ácido sensible, administración
parenteral exclusiva) y penicilina V (fenoximetilpenicilina, ácido resistente, administración oral).
b- Semisintéticas (β-lactamasas resistentes) Meticilina, nafcilina, isoxazolilpenicilinas (oxacilina,
cloxacilina, dicloxacilina, flucloxacilina).
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Familia de Cefalosporinas
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Fuente: http://gsbs.utmb.edu/microbook/ch011.htm.
Cicloserina: Producida por Streptomyces orchidaceus , de molécula similar a la D-alanina actúa por
inhibición competitiva de la enzima alanina-racemasa.
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2- Antibióticos que alteran permeabilidad de la membrana celular bacteriana
Polipéptidos
Polimixina: polipéptido básico de baja difusibilidad y alta toxicidad sobre todo para gérmenes
Gram (-) como Pseudomonas sp. Producido por Bacillus polimyxa es un decapéptido de cinco
variedades (A,B,C,D,E). Las dos más utilizadas son B y E, esta última recibe el nombre de colistín.
Se unen a la superficie externa de la membrana celular modificando la estructura y presión
osmótica, con pérdida de metabolitos por la unión y disrupción de fosfolípidos y lipoproteínas y
desplazamiento de los iones de calcio y magnesio.
Primera generación: Ácido nalidíxico y ácido oxolínico. Son muy efectivas en infecciones
urinarias por Gram (-).
Segunda generación : Ácido pipemídico
Tercera generación: Ciprofloxacina, enrofloxacina, danofloxacina, norfloxacina . De
amplio espectro, efectivas en infecciones de diversos órganos.
Novobiocina: Producida por Streptomyces niveus, inhibe enrollamiento del ADN por la ADN
girasa, formando también complejos de relajación..
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5- Inhibidores de la síntesis proteica, inhibidores de la traducción:
Tetraciclinas: Cuatro anillos fusionados que se unen a la subunidad de 30S antes que el
ARNt y de esta forma se paraliza la incorporación de aminoácidos durante la síntesis
proteica. Atraviesan la membrana externa de las bacterias a través de porinas mediante
difusión pasiva y llegan al citoplasma gracias a un mecanismo dependiente de energía.
Existen naturales: clortetraciclina (aureomicina, Streptomyces aureofaciens),
oxitetraciclina (terramicina, Streptomyces rimosus) y semisintéticas: tetraciclina,
doxiciclina, minociclina. Son agentes básicamente bacteriostáticos, con actividad frente
a una gran variedad de microorganismos, por lo que se convirtieron en antibióticos de
uso habitual tanto en seres humanos como en animales.
Demeclociclina
Rolitetraciclina
Limeciclina
Metaciclina
Segunda
Doxiciclina Derivados semisintéticos de las primeras
(1965–1972)
Minociclina
Tercera
Glicilciclinas (tigeciclina) Derivado semisintético de minociclina
(1993–)
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Generación Nombre genérico
Aminometilciclinas (PTK
En desarrollo experimental
7906)
Fuente: Enf.Inf. y Microb.Clín. 28(2):122-130 2010
Nitrofurantoína: es una familia muy amplia que abarca desde desinfectantes urinarios
hasta gasas furacinadas para la dermis.
Metronidazol
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Metronidazol.Fuente: Enf.Inf. y Microb.Clín. 28(2):122-130 2010
7- Antagonistas metabólicos:
Sulfonamidas
Descubierta por Domagk en 1935 la administra por primera vez en el tratamiento de las
infecciones en el hombre. Es un pigmento rojo inactivo in vitro (sulfacrisoidina) que se activa in
vivo (sulfanilamida). Están estructuralmente relacionadas con ácido paraaminobenzoico
(PABA) y compiten con él por la enzima dihidropteroato sintetasa que interviene en el
metabolismo del ácido fólico. Este ácido es imprescindible para la síntesis de precursores de los
ácidos nucleicos bacterianos. Las células de los mamíferos requieren ácido fólico preformado,
ya que no pueden sintetizarlo y, por tanto, no se ven afectadas por la acción de las sulfamidas.
Las células eucariotas absorben ácido fólico de la dieta.
Son antimicrobianos sintéticos, bacteriostáticos, de amplio espectro, inicialmente con
actividad frente a una gran variedad de microorganismos grampositivos y gramnegativos pero
con posterior desarrollo de amplia resistencia.
Su mecanismo de acción se basa en la inhibición de la síntesis de los ácidos nucleicos
bacterianos. Dentro de las sulfamidas existen numerosos compuestos con diferentes propiedades
farmacocinéticas y efectos secundarios. Sin embargo, todos comparten el mismo modo de
acción y es frecuente la resistencia cruzada entre ellos. Actúan sinérgicamente con algunos
componentes de la familia de las diaminopirimidinas, como la pirimetamina y trimetoprima,
contra bacterias y algunos protozoos. En la actualidad, el uso de sulfamidas solas es
excepcional, debido a su relativa baja actividad comparada con otros antimicrobianos, al
problema de la resistencia adquirida y su perfil de toxicidad.
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Metabolismo del ácido fólico
Fuente: http://gsbs.utmb.edu/microbook/ch011.htm.
Las bacterias pueden resistir los antibióticos alterando las membranas y sistemas de
transporte para prevenir la entrada del antibiótico dentro de la bacteria y/o activar el transporte del
antibiótico fuera de la bacteria.
La resistencia cromosómica, por mutación y selección, ocurre en el 20% de los casos. Son
ejemplos la pérdida de la proteína ligadora de la penicilina (PLP), metilación del ribosoma de 30S
para el caso de eritromicina o menor afinidad por la ADN girasa de las quinolonas.
En cambio, la resistencia originada por infección por plásmidos o elementos
extracromosómicos (EEC), ocurre en el 80% de los casos. Son ejemplos la modificación de la ARN
69
polimerasa para las rifamicinas, de la dihidrofolatoreductasa para trimetoprima y dihidropteroato
sintetasa para sulfonamidas. Ver Tabla .
http://www.racve.es/actividades/antibioticos%20arturo%20anadon.htm
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Marshall, B.M.; Ochieng, D.J. and Levy, S.B. Reservorios de resistencia antibiótica no apreciados: Probado
el rol de los comensales en la propagación de la resistencia antibiótica debe ayudar a preservar la eficacia de
estas drogas críticas. Microbe (ASM), Features, May 2009.
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especies animales, comportándose como patógenos cuando el hombre consume alimentos crudos,
ahumados, fermentados o poco cocidos. En esos casos, la bacteria completa, con todos sus genes de
resistencia genes es transportada de una especie a otra. Por ejemplo, cuando las fluoroquinolonas
son usadas en pollos, los humanos expuestos a esos productos adquieren C. jejuni resistentes a
fluoroquinolona. Sin embargo, existe poca evidencia de transferencia de genes de resistencia de E.
coli, Bacteroides o Enterococcus asociados con animales, dentro de la flora humana que
subsecuentemente cause infecciones resistentes a antibióticos. La evidencia más destacada resultó
de un estudio con 20 años de seguimiento en el cual el antibiótico nurseotricina (una estreptotricina
no utilizada en humanos) se usó durante dos años como promotor de crecimiento en varios
establecimientos de porcinos. Resistencia mediada por plásmidos fue hallada en 33% de los
coliformes de cerdos con diarrea, en 18% de los empleados y sus familias, en 16% de vecinos sanos
y en 1% de los aislamientos del tracto urinario de los habitantes de comunidades vecinas.
Otros estudios mantienen la idea que microorganismos asociados con humanos acumulan
genes de resistencia antibiótica de microbios asociados con animales. Por ejemplo, ganaderos y
criadores comenzaron usando avoparcina, relacionada con vancomicina, como suplemento
alimentario para el ganado y aves hace más de 20 años. Mientrastanto, se acumularon más y más
enterococos, comensales del tracto digestivo humano, vancomicina resistentes, vía elementos de
transferencia tipo Tn1546. Pequeñas diferencias en nucleótidos de estos elementos móviles
permitieron determinar si los genes de resistencia antibiótica en enterococos derivaron de
comensales asociados con porcinos y aves. Los hallazgos nuevamente involucraron al consumo de
estas especies como fuente de resistencia a esos antibióticos, muy común ahora en los comensales
humanos.
Bibliografía:
Baquero, F.; Coque, T.M. & Cantón, R. Antibiotics, complexity and evolution. ASM News, 69 (11):
547-552 2003.
Melana, M.R.C.de; Cicuta, M.E.; Boehringer, S.I.; Benítez, M.C.; Mazzanti, C.M.V.F.de; Roibón,
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Veterinaria Argentina (ISSN 0326-4629), VIII (79): 599-601 1991.
Schlaes, D.M.; Projan, S.J. & Edward Jr., J.E. Antibiotic discovery: State of state. ASM News, 70
(6): 275-281 2004.
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