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La Hemoglobina es una proteína globular, que se encuentra en grandes cantidades dentro de los
glóbulos rojos y es de vital importancia fisiológica, para el aporte normal de oxígeno a los tejidos.
Varios son los genes que determinan su biosíntesis. El estudio de su estructura molecular y
fisiología ha llamado la atención de innumerables investigadores; de su estudio derivado
descubrimientos de gran utilidad. La mayoría de variantes de la hemoglobina resulta de la
sustitución puntual de un aminoácido por otro. Hasta 1992, el Centro Internacional de
Información sobre Hemoglobinas había reunido las 640 variantes de esta molécula, pudiendo
agregarse hemoglobinopatías, particularmente las que se acompañan de trastornos clínicos y las
talasemias son habituales. Tan solo en EE. UU. se ha calculado que existen 8 millones de personas
con alguna variante de la hemoglobina.
9.2. OBJETIVOS
La hemoglobina (HB) es una proteína globular, que esta presente en altas concentraciones en lo
glóbulos rojos y se encarga del transporte de O2 del aparato respiratorio hacia los tejidos
periféricos; y del transporte de CO2 y protones (H+ ) de los tejidos periféricos hasta los pulmones
para ser excretados. Los valores normales en sangre son de 13 – 18 g/ dl en el hombre y 12 –
16 g/ dl en la mujer.
11.3.2. ESTRUCTURA
La hemoglobina es una proteína con estructura cuaternaria, es decir, está constituida por cuatro
cadenas polipeptídicas (fig. 1): dos α y dos β (hemoglobina adulta- HbA); dos α y dos δ (forma
minoritaria de hemoglobina adulta- HbA2- normal 2%); dos α y dos γ (hemoglobina fetal- HbF).
En el feto humano, en un principio, no se sintetizan cadenas alfa ni beta, sino zeta (ζ) y epsilon
(ξ) (Hb Gower I). Al final del primer trimestre la subunidad α han reemplazado a las subunidades
ζ (Hb Gower II) y las subunidades γ a los péptidos ξ. Por esto, la HbF tiene la composición α2γ2.
Las subunidades β comienzan su síntesis en el tercer trimestre y no reemplazan a γ en su totalidad
hasta algunas semanas después del nacimiento.
Las cadenas polipeptídicas alfa contienen 141 aminoácidos, las no alfa 146 (β, γ, δ) y difieren en
la secuencia de aminoácidos. Se conoce desde hace décadas la estructura primaria de las cuatro
cadenas de Hb normales. La estructura secundaria es muy similar: cada una exhibe 8 segmentos
helicoidales designados con las letras A a la H. Entre ellos se encuentran 7 segmentos no
helicoidales. Cada cadena α esta en contacto con las cadenas β, sin embargo, existen pocas
interacciones entre las dos cadenas α o entre las dos cadenas β entre si.
Las cuatro cadenas polipeptídicas de la Hb contienen cada una un grupo prostético, el Hem, un
tetrapirrol cíclico (fig. 2), que les proporciona el color rojo a los hematíes. Un grupo prostético es
una porción no polipeptídica que forma parte de una proteína en su estado funcional. El átomo
de hierro se encuentra en estado de oxidación ferroso (+2) y puede formar 5 o 6 enlaces de
coordinación dependiendo de la unión del oxígeno a la Hb (oxiHb, desoxiHb). Cuatro de estos
enlaces se producen con los nitrógenos pirrólicos de la porfirina en un plano horizontal. El quinto
enlace de coordinación se realiza con el nitrógeno del imidazol de una histidina denominada
histidina proximal. Finalmente, el sexto enlace del átomo ferroso es con el O2, que además está
unido a un segundo imidazol de una histidina denominada histidina distal. Tanto el quinto como
el sexto enlace se encuentran en un plano perpendicular al plano del anillo de porfirina. La parte
porfirínica del Hem se sitúa dentro de una bolsa hidrofóbica que se forma en cada una de las
cadenas polipeptídicas.
Bicarbonato de sodio---- 1g
Cianuro de potasio-------0,05g
Ferrocianuro de potasio---0,2g
H20 deshilada-------------1000 ml
Esta solución tiene un pH de 8,6. Debe ser de color amarillo y transparente y al medir su densidad
óptica contra agua como blanco, esta debe ser cero. La solución debe guardarse en frasco oscuro
y debe descartarse si esta turbia o decolorada. El reactivo es un poco toxico, pero debe manejarse
con cuidado.
9.5. PROCEDIMIENTO
4. Añadir a 3 tubos de ensayo la misma cantidad (2,5 ml.) del reactivo de Drabkin.
5. En el primer tubo de ensayo no añadir nada (será nuestro blanco), en el segundo tubo de
ensayo, añadir 10 ul. del estándar para hemoglobina; y en el tercer tubo de ensayo añadir 10 ul.
de la muestra sanguínea y homogeneizar cada una respectivamente.
9.6. OBSERVACIONES
1. Se debe utilizar una punta diferente por cada tubo de ensayo ya que, si se utiliza la misma
punta, podría darse una contaminación dando valores incorrectos en las lecturas de las
absorbancias.
9.7. VALORES REFERENCIALES
9.8. CÁLCULOS
9.8. RESULTADO
9.10. BIBLIOGRAFÍA
4. Robert K. Murray, Bioquímica de Harper. 15ta edición. Editorial Manual Moderno. México D.F.
2001
5. Thomas M. Devlin, Bioquímica. Libro de texto con aplicaciones clínicas. 3ra edición. Editorial
Reverté, S.A. España 1999.
8. Cooley’s Anemia Foundation, Inc. Thalassemia Fact Sheet. Flushing, NY, 2000.
9. Paul J. Haemoglobin synthesis and cell differentiation. Br Med Bull 1976; 32: 277-281
11. Peñuela O. A., Hemoglobina: una molécula modelo para investigar. Publicado Junio 2005.