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Escuela Profesional De Ingeniería Ambiental

Docente: MSc. Ing. Luis Quipuscoa Castro

Cursos: Bioquimica

1. DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA

ALUMNO: OBLITAS ABANTO WILDER D.

RESUMEN

La finalidad de este trabajo experimental es determinar que hay una serie de factores que influyen en la
velocidad de una reacción catalizada por una enzima: pH, temperatura, cantidad de enzima. Teniendo como
objetivo principal: Demostrar las modificaciones de las reacciones enzimáticas por acción de diversos
agentes físico- químicos a través de la determinación del sustrato residual (solución yodada) y de los
productos (solución cúprico- alcalina y solución fosfomolibdica); cuyos cambios de color serán valorados
en relación a un tubo patrón; y como objetivos secundarios: Verificar que la reacción enzimática es lenta
en un medio acido o en un medio básico, Comprobar que a una temperatura muy alta la enzima se
desnaturaliza o muy baja la enzima se inhibe. Para realizar la práctica de laboratorio nos regimos a los pasos
de la guía: PASO 1: Colocar 1 mL de solución de almidón al 1% a los tubos I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII.
PASO 2: Colocar 5 ml de Buffer acetato 0.1 M pH 3.6 al tubo IV. PASO 3: Colocar 5 mL de Buffer
fosfato 0.1 M pH 6.6 a los tubos I, II, III, V, VII, VIII. PASO 4: Colocar 5 ml de Buffer fosfato 0.1 M pH
10.0 al tubo VI. PASO 5: Colocar 1.4 mL de NaCl al 2% a los tubos I, III, IV, V, VI, VII, VIII. PASO 6:
Agregar agua destilada a los tubos: 2.6ml al tubo I, 3ml al tubo II, 1.6ml a los tubos III, IV, V, VI, VIII,
0.6m al tubo VII. PASO 7: Colocar 1 mL de preparado enzimático a los tubos II, III, IV, V, VI, VIII. PASO
8: Colocar 1 mL de preparado enzimático hervido al tubo VII. Obteniendo los siguientes resultados: No se
observa ningún cambio en ninguno de los tubos de ensayo, la única diferencia es que en el tubo VI se
observa el color celeste opaco y el tubo IV se ha tornado incoloro.

INTRODUCCIÓN

Hay una serie de factores que influyen en la velocidad de una reacción catalizada por una enzima. Algunos
de estos factores son: La concentración de moléculas de sustrato (se puede comprobar su influencia
atendiendo a la ecuación de Michaelis y Menten). La temperatura. Existe una temperatura ideal a la cual
las enzimas presentan mayor actividad catalítica. El pH del medio, que influye notablemente en la
conformación espacial de la enzima. Hay un pH ideal al cual la actividad catalítica es la máxima posible,
si el pH se hace más ácido o más básico, la actividad enzimática disminuye. La cantidad de enzima, que
influye considerablemente en la velocidad inicial (proporción directa), siempre y cuando hablemos de una
temperatura y pH óptimos. La actividad realizada por los inhibidores.

OBJETIVOS

Objetivos principales:
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 Demostrar las modificaciones de las reacciones enzimáticas por acción de diversos agentes
físico- químicos a través de la determinación del sustrato residual (solución yodada) y de los
productos (solución cúprico- alcalina y solución fosfomolibdica); cuyos cambios de color serán
valorados en relación a un tubo patrón.

Objetivos específicos:

 Verificar que la reacción enzimática es lenta en un medio acido o en un medio básico.

 Comprobar que a una temperatura muy alta la enzima se desnaturaliza o muy baja la enzima se
inhibe.

MATERIALES Y REACTIVOS

Materiales: Reactivos

 Gradilla  Solución de almidón al 1%

 8 tubos de ensayo  Buffer fosfato 0.1 M pH 6.6
 Pipetas graduadas  Buffer fosfato 0.1 M pH 10.0
 Incubadora “Baño María”  Buffer acetato 0.1 M pH 3.6
 Solución de Cloruro de sodio al 2%
 Amilasa salival dializada al 0.25%
 Ácido Clorhídrico 0.05 N
 Solución yodada (yoduro de potasio)
 Solución cúprico alcalina
 Solución fosfomolibdica
 Agua destilada
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PROCEDIMIENTO

ETAPA A:

Armar el siguiente sistema:

Realizar el siguiente procedimiento para los tubos del I al VIII:

PASO 1: Colocar 1 mL de solución

de almidón al 1% a los tubos I, II, III,
IV, V, VI, VII, VIII.

PASO 2: Colocar 5 ml de Buffer

acetato 0.1 M pH 3.6 al tubo IV.
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PASO 3: Colocar 5 mL de Buffer fosfato 0.1

M pH 6.6 a los tubos I, II, III, V, VII, VIII.

PASO 4: Colocar 5 ml de Buffer fosfato

0.1 M pH 10.0 al tubo VI.
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PASO 5: Colocar 1.4 mL de NaCl al 2% a

los tubos I, III, IV, V, VI, VII, VIII.

PASO 6: Agregar agua destilada a los tubos: 2.6ml

al tubo I, 3ml al tubo II, 1.6ml a los tubos III, IV,
V, VI, VIII, 0.6m al tubo VII.
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PASO 7: Colocar 1 mL de preparado enzimático a

los tubos II, III, IV, V, VI, VIII.

PASO 8: Colocar 1 mL de preparado enzimático

hervido al tubo VII.
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- Mezclar y colocar lo tubos de I al VII a baño maría 37º, por 30 minutos para el equilibrio de la
temperatura.

- El tubo VIII en agua helada entre 0º y 4º durante 30 minutos.

RESULTADOS

Resultados de la ETAPA A:

Una vez finalizado el procedimiento de la ETAPA A se obtuvieron dos resultados, que son los
siguientes:
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- No se observa ningún cambio en ninguno de los tubos de ensayo, la única diferencia es que en el
tubo VI se observa el color celeste opaco y el tubo IV se ha tornado incoloro.

DISCUSIÓN

1. ¿identifique en cada uno de los tubos el factor físico químico que interviene?
- En los tubos del I al VII la enzima no se desnaturaliza ni se inhibe porque está a una temperatura
adecuada, en el caso del tubo VII la enzima se inhibe porque está a una temperatura de 0º.

2. Explique usted que finalidad tiene la utilización de la solución yodada.

- La prueba del yodo permite identificar la presencia de almidón, con este reactivo se obtiene un
color azul-violeta característico.

3. Explique usted que finalidad tiene la utilización de la solución cúprica alcalina.

- La reacción de la enzima con el sustrato residual va a ser más lenta.

4. Explique usted que finalidad tiene la utilización de la solución fosfomolibdica.

- La reacción de la amilasa salival con el sustrato residual va a ser más rápida.

5. Explique usted los resultados obtenidos.

- No se observa ningún cambio en ninguno de los tubos de ensayo, la única diferencia es que en el
tubo VI se observa el color celeste opaco y el tubo IV se ha tornado incoloro.

6. Diga usted cuales son los componentes estructurales del almidón.

7. Diga usted a que se le llama amilasa salival dializada y cuál es su acción sobre el almidón.
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CONCLUSIONES

 Demostramos las modificaciones de las reacciones enzimáticas por acción de diversos agentes
físico- químicos a través de la determinación del sustrato residual (solución yodada) y de los
productos (solución cúprico- alcalina y solución fosfomolibdica); cuyos cambios de color se
observan en los resultados.
 Verificamos que la reacción enzimática es lenta en un medio acido o en un medio básico.
 Comprobamos que a una temperatura muy alta la enzima se desnaturaliza o muy baja la enzima
se inhibe.

REFERENCIAS
 Laura S. Zamorano. 1994. Factores físico químicos que modifican la velocidad de las
reacciones enzimáticas. 300p.