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Prado-Guzmán, G. A.1,*
1
Instituto Tecnológico de Tepic. Av. Tecnológico #2595, Col. Lagos del Country. C.P. 63195. Tepic,
Nayarit, México.
Resumen:
en la hidrólisis de enlaces glicosidicos, siendo este uno de los mecanismos más empleados
la salud generándose metabolitos secundarios como los flavonoides que poseen propiedades
a cabo mediante un ensayo colorimétrico, el cual nos permitió determinar las condiciones
*
Autor para la correspondencia. E-mail: gladysprado94@gmail.com,
Tel. 695-109-9811,
los valores óptimos matemáticamente y comparara con los obtenidos experimentalmente y
de bibliografía.
flavonoides, hidrólisis.
Abstract:
the food and health industry, was determined, since it plays a key role in the hydrolysis of
glycosidic bonds, being one of the most used mechanisms in the food industry in the
processing of juices and other beverages, and in the area of health generating secondary
metabolites such as flavonoids that have antioxidant properties with positive effects in the
body, among others. The determination was carried out by means of a colorimetric assay,
which allowed us to determine the optimum conditions from the variations of pH and
temperature. The trial was carried out in the Biomodel virtual laboratory and subsequently
the absorbancies data obtained were submitted to the Statistica program with the response
surface tool to find the optimal values mathematically and compared with those obtained
hydrolysis.
1. Introducción
forman parte de los enlaces de azúcares reductores. Una vez que se lleva a cabo la hidrólisis
las plantas, protegiéndolas de diversos daños ocasionados por rayos ultravioleta, patógenos,
algunos agentes contaminantes como metales, y en general de daños causados por agentes
sabores amargos.
En alusión a lo anterior y sabiendo de las propiedades catalíticas que poseen las enzimas,
hoy en día se buscan métodos para determinar las condiciones óptimas que generen una
mayor actividad enzimática de éstas mismas, para poder así emplearlas en diversos
la actividad enzimática) a las cuáles una enzima trabaja con mayor eficiencia a partir de sus
iniciado la reacción.
2. Marco teórico
2.1 Glicosil-hidrolasas
quercetina tiene una mayor actividad antioxidante que su diglicósido rutina, exhibiendo
2).
Fig.2. Estructura química de los flavonoides (a) hesperidina (hesperetina 7-O-(6-O-α-Lramnopiranosil-β-D-
El ensayo emplea una reacción con el DNS (dinitrosalicilato). El DNS, de color amarillo en
(El aldehído del azúcar reductor se oxida a ácido) Se mide el color rojo del producto a 540
actúan de forma secuencial (Sarry & Günata, 2004), primero una monosacaridasa cliva el
enlace glicosídico, luego una β-D-glucosidasa libera la aglicona (Günata et al., 1998). Las
una cadena de azúcares (modo “endo”) y por lo tanto la desglicosilación en un solo paso de
mecanismo endo de acción (Ogawa et al., 1997). Las diglicosidasas hidrolizan el mismo
enlace que las beta-glucosidasas, y en la actualidad se han descripto solo cuatro actividades
Los glucósidos de flavona son metabolitos secundarios abundantes de plantas que están
uvas. Algunas características, como el sabor amargo o la turbidez del jugo, se atribuyen en
para el débito y la clarificación de los jugos de frutas (Hemingway et al., 1999; Wang et al.,
que esto afecta el grado de ionización de los aminoácidos de la proteína, incluidos los del
sitio activo, del sustrato (en caso de ser ionizable), o del complejo enzima-sustrato; de
Peterson, Daniel, Danson y Eisenthal, 2007 aseguran que el efecto de la temperatura sobre
la actividad enzimática ha sido descrito por dos parámetros térmicos bien establecidos: la
acoplamiento de sustrato y enzima. Puede durar de unos segundos a varios minutos. En los
productos comerciales nos indican el tiempo que dura este período de retardo.
Al finalizar esta fase, comienza la fase lineal, donde la velocidad de formación del producto
mL, U / L). Se define como la cantidad de enzima que transforma un micromol de sustrato
agilización de su obtención se ve muy necesaria. Como es bien sabido las enzimas poseen
4. HIPÓTESIS
H0: De acuerdo a los datos consultados en bibliografía se espera que el valor óptimo de
H1: Los valores óptimos de actividad enzimática no se encontrará dentro del rango de
5. OBJETIVOS
colorimetría
5.2 Objetivos específicos
6. Metodología
de Actinoplanes missouriensi.
posteriormente se le adicionó la muestra que contenía la enzima, se incubó por 1 hora para
formar el producto y transcurrido este tiempo se añadió el DNS. Se esperó por 10 min a
100°C. Se desplazaron los controles para elegir un pH (los seleccionados por conveniencia
fueron 4, 7 y 10) y una temperatura (se emplearon todas las temperaturas disponibles desde
30 a 80°C) para el ensayo, una vez que se desarrollado el color, se pulso el botón para
medir la absorbancia para cada una de las condiciones seleccionados y los valores
7. Resultados y discusión
0.9
A 0.8
b
0.7
s
o 0.6
r 0.5 pH 7
b 0.4 pH 4
a pH 10
0.3
n
c 0.2
i 0.1
a
0
0 20 40 60 80 100
Temperatura °C
En la tabla 1 se presentan los valores obtenidos del ensayo colorimétrico, valores que
realizaban no había diferencia entre replicas (siempre se obtenían valores idénticos al leer
una misma condición); la naturaleza del diseño no permitió analizar diferencias por efecto
combinado, ya que las repeticiones eran insuficientes para determinar ésta condición entre
tratamientos. Por ésta razón, se decidió analizar los efectos individuales de ambas variables
mediante el método Anova de Fisher, obteniendo así, que las diferentes temperaturas no
tienen efecto significativo sobre la actividad enzimática, mientras que la variación entre los
glucosa.
glucosa ofrecía una actividad catalítica superior al resto de las condiciones empleadas,
obtenidas en un principio y los valores optimizados, es notorio que hay una diferencia de
10°C entre ambos, el valor óptimo obtenido mediante el simple registro de absorbancias se
presentó a los 70°C mientras que para los valores una vez optimizados la temperatura
óptima fue de 80°C, ambos tratamientos a un pH de 7. Por otra parte Neher y col., 2016
reportan una actividad óptima a los 55°C al mismo pH. Por lo que se puede observar que no
coinciden con los reportados, sin embargo, en la base de datos BRENDA, se reporta una
temperatura óptima de actividad enzimática a los 70°C, la cual coincide con los resultado
previos a la optimización, mientras que así mismo, se menciona que la enzima a los 80°C
Se pueden atribuir esa diferencia de 10°C a que para el método estadístico empleado, no se
contaban con las suficientes replicas en los tratamientos y pudo ser un factor importante,
sin embargo, los valores que difieren con los obtenidos se presentan dentro de una zona de
8. Referencias
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9. Anexos