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RESUMEN Se han descubierto dos nuevos tipos de compuestos de señalización en el humo del
incendio debido a su capacidad para estimular la germinación de las semillas. Los primeros
descubiertos fueron karrikins, que comparten cierta similitud estructural con la clase
strigolactone de hormonas vegetales, y ambos señalan a través de una proteína F-box común.
Sin embargo, los karrikins y las estrigolactonas operan a través de rutas de señalización
distintas, distinguidas cada una por una proteína α / β hidrolasa específica. El análisis genético
sugiere que las plantas contienen compuestos endógenos que señalan específicamente a
través de la vía karrikin. Los otros compuestos activos descubiertos en el humo son
cianhidrinas que liberan cianuro estimulante de la germinación por hidrólisis. Las cianhidrinas
se producen ampliamente en las plantas y tienen un papel en la defensa contra otros
organismos, pero también debería considerarse un papel adicional en la señalización
endógena del cianuro.
Nutrientes y humedad al suelo, y eliminar los aleloquímicos inhibidores (Dixon et al., 2009;
Nelson et al., 2012). Se descubrió que el humo y el material vegetal carbonizado contienen
sustancias que estimulan la germinación de las semillas (De Lange y Boucher, 1990). Las
sustancias activas se extrajeron fácilmente en agua, ya sea vertiendo el agua sobre el material
vegetal carbonizado para producir "charates" o humo burbujeante generado por la quema de
vegetación (o celulosa) a través del agua para producir "humo de agua" (Keeley et al. Y van
Staden, 1997). Se encontró que estos extractos de charates y extractos de humo aumentan
significativamente la respuesta de germinación de muchas especies de plantas
filogenéticamente y ecológicamente diversas en el mundo (Van Staden et al., 2000). Se estima
que 1200 especies de plantas diferentes responden al (los) estimulante (s) activo (s) que
también incluye especies de ambientes que no son de fuego, como la lechuga (Drewes et al.,
1995) y apio (Thomas y Van Staden, 1995) (Dixon et al., 2009). Esto inició una serie de equipos
de investigación para buscar el potente compuesto (s) en el humo, estimado para ser activo a
aproximadamente 1 pg por semilla (Baldwin et al., 1994). Esto presentó un compromiso
significativo al considerar que el humo derivado de plantas puede contener hasta 5000
compuestos diferentes (Smith et al., 2003). Sin embargo, el humo es ahora una herramienta
importante en la propagación de las plantas y la restauración ecológica (Roche et al., 1997a,
1997b, Nelson et al., 2012).
El descubrimiento de que los karrikins son activos en Arabidopsis, aunque no se sabe que es
una especie sensible al humo o adaptada al fuego, condujo a la especulación de que los
karrikins podrían imitar una molécula endógena de señalización (Nelson et al., 2009). Más
importante aún, abrió un enfoque para descubrir el modo de acción de karrikins, utilizando la
genética de Arabidopsis. Los mutantes insensibles a Karrikin se aislaron escogiendo semillas
gestantes primarias que fallaron en germinar en presencia de KAR1, pero que germinarían
cuando se estimularan con nitrato. Después de volver a examinar las generaciones
subsiguientes para eliminar "falsos positivos", se aislaron varios mutantes karrikin-insensibles
(kai). Dos de los primeros kai mutantes aislados tenían un fenotipo tiro que se asemeja a la de
la strigolactona insensible mutante más ramas axilares-2 (max2). Secuenciación de la MAX2
gen reveló mutaciones frameshift en kai1-1 y kai1-2 alelos, mientras que dos anteriormente
aislados max2 mutantes también se demostró ser karrikin insensible (Nelson et al., 2011).
MAX2 codifica una proteína de la caja F que también está implicada en el control de la
senescencia y la fotomorfogénesis (Woo et al., 2001; Shen et al., 2007). Este descubrimiento
estableció que los kriarrigos y las estrigolactonas operan de hecho a través de vías de
transducción de señales conectadas.
Más recientemente, se han aislado mutantes kai2 que retienen la sensibilidad a las
estrigolactonas, confirmando genéticamente que Arabidopsis puede distinguir entre karrikins y
Strigolactones (Waters et al., 2012a), tal como se observó originalmente (Nelson et al., 2009,
2011). KAI2 codifica un miembro de una pequeña familia de proteínas de tipo \ alpha / \ beta -
hidrolasa. Las mutaciones en un ortólogo estrechamente relacionado, AtD14, dan como
resultado crecimiento de la yema axilar insensible a la strigolactona, pero la sensibilidad
karrikin de las semillas y plántulas se mantiene. Así, los miembros de esta familia de \ alpha / \
beta-hidrolasa pueden distinguir los karrikins y las estrigolactonas, que posteriormente actúan
a través de la proteína de la caja F2 MAX2 para provocar cambios en la germinación de las
semillas, el crecimiento de las plántulas y el desarrollo de los brotes. Recientemente se ha
descubierto que la strigolactona GR24 sintética es hidrolizada lentamente por DAD2, el
ortólogo de Petunia de AtD14, y esto está acompañado por una asociación de proteína DAD2
con una proteína MAX2 de petunia en experimentos de dos híbridos de levadura (Hamiaux et
al., 2012 ). Estos experimentos sugieren que DAD2 (y, por inferencia, D14) es tanto una
hidrolasa como un receptor para las estrigolactonas, y que la estrigolactona es destruida por
su receptor. Este es un nuevo modo de acción para una hormona vegetal, por lo que se
necesitará más investigación para establecer el mecanismo molecular (Smith y Waters, 2012).
Un mecanismo similar podría funcionar para KAI2 y karrikins pero, en este caso, no se espera
que los karrikins sean destruidos por hidrólisis (Scaffidi et al., 2012; Waters et al., 2012b). El
papel de KAI2 en la fotomorfogénesis de plántulas se discute en otra parte de este volumen
(Waters y Smith, 2013).
KAI2 define el brazo karrikin de la ruta de señalización MAX2. Las plántulas mutantes kai2 se
asemejan a las plántulas max2 en tener un hipocótilo alargado, peciolos cotiledónicos
alargados y elevados, y cotiledones (epinastic) apuntados hacia abajo (Figura 2). Mutantes de
Arabidopsis defectuosos tanto en SL Biosíntesis (max1, max3, max4, Atd27) y SL respuesta
(Atd14) no comparten este fenotipo de plántulas. La implicación es que KAI2 se requiere para
el SL-independiente de las funciones de MAX2, y que la kai2 y max2 mutante plántula
fenotipos surgen de una falta de respuesta a una señal endógena. Además, esta señal no
parece ser una strigolactona convencional derivada de D27-, MAX3- y MAX4-
Dependiente del metabolismo de los carotenoides. El mutante kai2 también muestra una
forma de hoja modificada que no se observa en los mutantes max1, max3, max4 o d27, lo que
sugiere que la señal dependiente de KAI2 putativa también opera en el desarrollo después de
la plántula.
La hipótesis de que tal señal podría ser más similar a karrikins que a strigolactones canónicos, y
que podría tener origen evolutivamente antiguo, ya que KAI2 homólogos están representados
en todos los principales grupos de plantas terrestres, así como en las algas Charophyte (Delaux
et al. 2012; Waters et al., 2012a). En contraste, los genes de tipo D14 podrían haber surgido
más tarde y estar asociados con la ramificación en plantas vasculares (Delaux et al., 2012;
Waters et al., 2012a). Muchas novelas de butenolidos de origen biosintético desconocido han
sido previamente descritas (Knight, 1994, Negishi y Kotora, 1997). En particular, los
butenolidos como el peagol (Figura 1) y la dehidrocostus lactona (producidos por las raíces de
guisantes y de girasol, respectivamente) son capaces de estimular la germinación de algunas
semillas parasitarias (Evelo et al., 2009). Otros butenolidos, como el factor de cierre foliar de
Phyllanthus urinaria, conocido como phyllanthurinolactone (Figura 1) (Ueda y Nakamura,
2006) y la micotoxina patulina (Brase et al., 2009) tienen una notable similitud con los karrikins
(Figura 1). Además, los butenolidos saturados (o butanolidos) como la momilactona B (Kato et
al., 1973), aislados del arroz como inhibidores de la germinación y crecimiento de las raíces
(Mennan et al., 2012), pueden proporcionar pistas sobre la identidad de los endógenos
Butenolidos bioactivos.
DESCUBRIMIENTO DE GLYCERONITRILE COMO ESTIMULANTE DE GERMINACIÓN EN HUMO
CIANOHIRRINAS EN PLANTAS
El descubrimiento de que el cianuro exógeno derivado de cianhidrina puede tener una función
de señalización en la germinación de la semilla sugiere que las cianhidrinas endógenas deben
ser consideradas como una fuente de cianuro para potenciales funciones de señalización,
además de su papel en el envenenamiento de plagas. Nielsen et al. (2002) mostraron que las
células epidérmicas de la hoja de cebada contienen un glucósido cianogénico pero la única
glucosidasa capaz de su hidrólisis se produce en el tejido endospermo. Se especula que esta
cianhidrina no está involucrada en la defensa cianogénica contra las plagas. Arabidopsis
thaliana tiene un gen (At2g23600) que codifica una acetona-cianohidrina liasa (Okrob et al.,
2011) pero no se han descrito glucanosidos de cianhidrina y no se ha atribuido ninguna función
a este gen. Tales observaciones sirven para abrir nuestras mentes a funciones alternativas para
las cianhidrinas en las plantas.
SEÑALIZACIÓN DE CYANIDE
Varios autores han sugerido que el cianuro puede actuar como una molécula de señalización
en el control de algunos procesos fisiológicos (Bogatek et al., 1991, Grossmann, 1996, Siegien y
Bogatek, 2006). Por ejemplo, el cianuro aumenta la resistencia de las hojas de tabaco
(Nicotiana tabacum) y Arabidopsis al virus del mosaico del tabaco y al virus de eliminación de
nabos, respectivamente (Chivasa y Carr, 1998). También se ha sugerido que el cianuro, pero no
el etileno, es responsable de la resistencia a la infección por hongos explosivos en plantas de
arroz jóvenes (Iwai et al., 2006). Existen varios informes que han sugerido que el cianuro es un
regulador de la germinación de las semillas y de la liberación de latencia en el arroz (Oryza
sativa), manzana (Malus domestica), Helianthus tuberosus y Arabidopsis (Fol y col. 1989,
Bogatek et al., 1991, Bethke et al., 2006). Tratamiento Con cianuro o nitroprusiato de sodio
rompe la latencia de las semillas de Arabidopsis, y la emisión de cianuro de hidrógeno de
muchas semillas ha sido detectada durante el período previo a la germinación (Esashi et al.,
1991). Se planteó la hipótesis de que el cianuro actúa mediante la creación de óxido nítrico in
vivo (Bethke et al., 2006). Sin embargo, Oracz et al. (2007) sugirieron que la señalización del
cianuro interactúa con las especies de oxígeno reactivo (ROS) y, en un artículo posterior, Oracz
et al. (2009) demostraron que el efecto del cianuro en la germinación de embriones latentes
de girasol se asocia con un marcado incremento en la generación de peróxido de hidrógeno y
anión superóxido en los ejes embrionarios. Fue imitado por los compuestos ROS generadores
metilviologen y menadiona pero suprimido por ROS scavengers. Este aumento resulta de una
inhibición de las actividades de catalasa y superóxido dismutasa y también implica la activación
de NADPH oxidasa. La expresión de los genes relacionados con la producción de ROS
(NADPHox, POX, AO1 y AO2) y la señalización (MAPK6, Ser / ThrPK, CaM y PTP) fueron
afectadas diferencialmente por el alivio de la latencia durante el período de maduración o por
el tratamiento con cianuro El efecto del cianuro en la expresión génica se consideró probable
que mediada por ROS. También se demostró que el cianuro y el ROS activan el factor de
transcripción ERF1, un componente de la vía de señalización del etileno. Propusieron que ROS
desempeña un papel clave en germinación de semilla de girasol actuando como un mensajero
secundario de cianuro (Oracz et al., 2009). En otro estudio (Oracz et al., 2008), se demostró
que la expresión de ERF1 se estimuló marcadamente por el tratamiento con cianuro de
semillas de girasol latentes y que la germinación estimulada con cianuro requiere receptores
funcionales de etileno pero no biosíntesis de etileno. Se propuso que ERF1 es un componente
común de las vías de señalización de etileno y cianuro. En otro enlace con el etileno, ACS6
activado con cianuro, un gen de la sintasa de Arabidopsis ACC, dentro de los 10 minutos y de
una manera dosedependiente. Experimentos anteriores habían demostrado que el etileno y el
cianuro pueden provocar respuestas fisiológicas similares. En conjunto, estos resultados
sugieren que el cianuro puede desempeñar un papel activo en la síntesis de etileno,
potencialmente la regulación de retroalimentación positiva de la producción de etileno que se
produce en algunos tejidos vegetales (McMahon Smith y Arteca, 2000). En un intrigante
estudio reciente, Bisson y Groth (2012) muestran que el cianuro puede actuar como un
agonista del etileno al interactuar directamente con el receptor ETR1 de etileno de
Arabidopsis. Ahora existe la oportunidad de determinar el modo de acción del cianuro en las
plantas utilizando enfoques genéticos en Arabidopsis, análogos a los utilizados para aislar los
mutantes kai. Además, se puede estudiar la actividad potencial de las cianhidrinas para
promover la germinación y estudiar la función de la hidroxinitrilo-liasa usando mutantes
knockout.
El humo contiene miles de compuestos diferentes (Flematti et al., 2004; Nelson et al., 2012),
cualquiera de los cuales podría potencialmente Han sido adoptadas por las plantas como
señales para el establecimiento posterior al incendio. Estos "compuestos de humo" incluyen
nitrato, etileno y óxido nítrico, todos los cuales son conocidos por estimular la germinación de
semillas en ciertas especies de plantas (Nelson et al., 2012). Sin embargo, no son específicos
para el fuego y el humo, por lo que no proporcionan una señal específica. Además, para ser
una señal eficaz después del incendio, la sustancia debe depositarse en o sobre el suelo y
persistir allí durante un período de tiempo prolongado hasta que las condiciones para la
germinación de la semilla sean favorables. Los volátiles tales como el etileno y el óxido nítrico
no tienen esta propiedad (Preston et al., 2004). Los compuestos de humo conocidos que se
han adoptado como señales para la germinación de semillas (karrikins y cianhidrinas) son los
que son característicos del fuego y el humo, que tienen un grado adecuado de persistencia en
las capas superiores del suelo donde residen las semillas dormidas. Nosotros planteamos la
hipótesis de que los karrikins eran "familiares" a las plantas de tierra temprana, porque estas
plantas contenían una molécula endógena similar actuando a través de un antepasado del gen
que ahora llamamos KAI2. Dado que las plantas basales y sus parientes de algas verdes
producen estrigolactonas pero carecen de las proteínas D14 específicas de la strigolactona que
existen en las plantas de semillas (Delaux et al., 2012), este compuesto endógeno original
podría haber sido una strigolactona o un butenolido relacionado que se señalizó a través de
KAI2 . Durante la evolución de las plantas vasculares, un homólogo KAI2 (D14) surgió y se
especializó para los aspectos de la señalización de strigolactona que pertenecen a la
ramificación de brotes y otros procesos de desarrollo dependientes de D14. Tal
subfunctionalization pudo a su vez haber permitido que el gen KAI2 ancestral se especializara,
y así proponemos que los seguidores tempranos del fuego adoptaron karrikins como señal
desplegando el gen ancestral KAI2 para esta nueva función. De manera similar, las
cianhidrinas, o más específicamente el cianuro, eran 'familiares' a las primeras plantas
terrestres, y por lo tanto podrían adoptarse como una señal posterior al fuego. Aunque las
cianhidrinas o el cianuro no proporcionan señales únicas para el humo, pueden ser lo
suficientemente poco frecuentes en los suelos para proporcionar un indicador fiable de un
entorno posterior al incendio. Esperamos que el humo y el carbón puedan contener otros
compuestos que ciertas especies vegetales, microbianas o incluso animales han adoptado
como señales posteriores al fuego, pero también esperamos que estos compuestos hubieran
sido "familiares" al organismo ancestral. Cualquiera que sea el caso, está claro que estos
estimulantes de germinación recién descubiertos procedentes del humo tienen semejanza con
los compuestos de señalización endógenos conocidos presentes en las plantas y ofrecen
interesantes oportunidades para un descubrimiento adicional.
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