Cultivo Continuo

• Es un sistema de flujo de volumen constante al

que se le agrega continuamente medio y del cual
sale un dispositivo que permite la eliminación
constante del medio excedente.

• El dispositivo más frecuente para cultivo

continuo es el llamado quimiostato.

Ingeniería de Alimentos III

 Quimiostato
Sistema abierto de flujo que se compone de:
• una cámara de cultivo de volumen constante
• a la que llega un suministro de nutrientes, (C ó N)
• y de la que se eliminan o separan los productos tóxicos de
desecho (por un dispositivo de rebosadero).

Sistema en el Equilibrio

• el número de células y la
concentración de nutrientes en la
cámara permanecen constantes

• sistema en estado estacionario, con

las células creciendo exponencialmente

Ingeniería de Alimentos III

 Quimiostato
Características Limitaciones
• Inicia modo Batch • Dificulta la recuperación del
• Etapa de transición (dx/dt ≠ producto
0, ds/dt ≠ 0) • Susceptible a
• Opera en régimen estable o contaminación ( E y S)
estacionario • Poca estabilidad de cepas
• Es posible controlar a μ y la recombinantes
densidad celular
• Selección de m.o´s (se Batch X
mantienen los que crecen S
Quimiostato
más rápido)
• Ideal para tratamiento de X
aguas residuales S

t
Ingeniería de Alimentos III
 Aplicaciones del Quimiostato

• Aportan una fuente continua de células en

fase exponencial, lo que se aplica a procesos
industriales de fermentación
• Producción de bebidas alcohólicas
• Antibióticos
• Aminoácidos

Ingeniería de Alimentos III

 Parámetros del Quimiostato
Los parámetros a tener en cuenta son:

• flujo (f), medido en L/h

• volumen de la cámara de cultivo (v, en L)
• densidad celular en la cámara (x)
• factor de dilución D = f/v (en h-1)

• la velocidad especifica de crecimiento (μ) se controla por

la tasa de flujo o la tasa de dilución (velocidad a la que se
bombea el medio en el tiempo)
• la densidad de la población está controlada por la
concentración del nutriente limitante.

Ingeniería de Alimentos III

 Ecuaciones que rigen al Quimiostato

Balances para obtener las ecuaciones:

1. Modelo de crecimiento celular en la etapa de transición y
etapa de quimiostato dx/dt =(μ-D)x
• estado estacionario μ=D

2. Balance para sustrato ds/dt = D (Sr-S)- μ x / Yx/s

• estado estacionario S = Dks/ (μmax-D)
• biomasa en el estado estacionario
X = Yx/s (Sr-S)

3. Balance para producto dP/dt = x(αμ+β)-DP

• estado estacionario P = Yx/s/D [Sr-(Dks/ (μmax-D)] (αμ+β)

Ingeniería de Alimentos III

 Balances en el quimiostato
F Sr Xo

V
S
X

FSX

Entrada – Salida + Producción – Consumo = Acumulación

Ingeniería de Alimentos III

 Dilución crítica
Equilibrio se ve afectado:
• Si la tasa de dilución se eleva
muy alto, los microorganismos
pueden ser removidos en su
totalidad fuera del recipiente
antes de que se reproduzcan
dado que la velocidad de flujo
superaría a la velocidad de
crecimiento (D>>µ). Si la
dilución es inferior a µ una gran
porción de células puede morir
ya que no se agrega lo
suficientemente rápido el
sustrato para permitir el
mantenimiento del cultivo (D<<
µ).

• Dilución crítica (Dc) = dilución a

la cual la biomasa desaparece

Ingeniería de Alimentos III

 Productividad y Dilución óptima
PR
dPR/dD=0
X

S
Dc
D óptima

Productividad, la cantidad producida por unidad de tiempo

PR = DX

D óptima , dilución a la que se obtiene la mayor productividad

¿Cómo se encuentra la dilución óptima, que desventaja tiene y como
solucionar el problema?

Ingeniería de Alimentos III

 D óptima

dilución a la que se obtiene la mayor

productividad

D op.= μmax {1 – [ Ks/(So+Ks)]1/2 }

Ingeniería de Alimentos III

 Resumen Quimiostato
1. Etapa de transición 3. D óptima
• μ = μmax S/ (Ks+S) • D op.= μmax {1 – [ Ks/(Sr+Ks)]1/2}
• dx/dt =(μ-D) x
• ds/dt = D (Sr-S)- μ x / Yx/s 4. Productividad
• dP/dt = x(αμ+β)-DP • PR = DX

2. Estado Estacionario 5. D crítica

• μ=D • Cuando X = 0
• X = Yx/s (Sr-S)
• S = Dks/ (μmax-D)
• P = Yx/s/D [Sr-(Dks/ (μmax-D)]
(αμ+β)

Ingeniería de Alimentos III

 Ejercicio 1
• Calcule cual sería la concentración de biomasa y de sustrato al
estado estacionario en un quimiostato que trabaja a una
dilución de 0.01 h-1 a una concentración de sustrato de
100g/L, las constantes cinéticas del microorganismo son:
• μmax= 0.8 h-1
• Ks = 1 g/L
• Yx/s = 0.5 gbiomasa/g sustrato
• Generar el perfil de operación del reactor hasta que la D = 0.9
h-1 (incrementos de 0.1 a partir de 0.1) determinando
concentración de biomasa, sustrato, dilución crítica,
productividad, y dilución óptima.

Ingeniería de Alimentos III

 Ejercicio 2

• En un laboratorio de bioprocesos se dispone de un

sistema de cultivo continuo en una sola etapa y se
requiere realizar un ensayo con una bacteria de μmax=
0.57 h-1, con un medio definido limitado por carbono, con
Ks = 0.09 g/L y un Yx/s = 0.43g/g. El volumen de trabajo
es de 50 L y se alimenta con un flujo de 32L/h con una
concentración de sustrato de 35 g/L. El producto
generado en este cultivo es un metabolito secundario
cuya constante es 0.356 g/g.h Determine la
concentración de biomasa, sustrato, producto, dilución
óptima, dilución crítica y productividad del proceso.

Ingeniería de Alimentos III

 Quimiostatos en serie
• F01 = F12
F01 S01 F12 S1 X1 F02 S02 • F2 = F12 + F02
• D1 = F01 / V1
• D2 = (F12 + F02) / V2 = F2 / V2

• Balance de células (R1 y R2)

estado transitorio y estado
V2
V1 estacionario dX2/dt =0
S1
μ1 S2 μ2
X1 X2 • Balance de consumo de sustrato
estado transitorio (R1 y R2) y
estacionario dS2/dt =0
F2 S2 X2
• Balance de formación de
producto estado transitorio (R1 y
• Reactores de diferente tamaño, Reactor 2 > Reactor 1 R2) y estacionario dP2/dt =0
• No hay deslave en reactor 2 si no lo hay en reactor 1 (Tarea 10 puntos, escala 0-100)

Ingeniería de Alimentos III

 Ecuaciones Quimiostatos en serie
1. Etapa de transición
• dX1/dt =(μ1-D1) x1
• dX2/dt =(μ2-D2) x2 + D12x1
• dS1/dt = D1 (S01-S1)- (μ1x1/Yx/s)
• dS2/dt = D12 S1 + D02 S02- D2S2- (μ2x2/Yx/s)
• dP1/dt = X1 (αμ1+β)-D1P1
• dP2/dt = D12P1 –D2P2 + X2 (αμ2+β)

2. Estado Estacionario
• X2 = [-Yx/s (S01-S1) D12] / μ2- D2
• S2 = [D12 S1 + D02 S02- (μ2x2/Yx/s)] / D2
• P2 = [D12P1 + X2 (αμ2+β)]/ D2

Ingeniería de Alimentos III

 Quimiostato 3 etapas
F01 S01
F02 S02

V1 V2
μ1
μ2
S1 S2

X1 X2

F1 S1 X1 F2 S2 X2

F03= F01+ F02

F13 S13

V3
μ3
S3
X3

F3 S3 X3
Ingeniería de Alimentos III
 Quimiostatos de una etapa con recirculación
a) Interna o perfusión
•Aplicación: Cultivo de células
animales, cultivo de células
vegetales, producción de vacunas y
hormonas (perfusión).
•Procesos con costo elevado debido
a su operación compleja
Ingeniería de Alimentos III
Recirculación
• Sistemas que se bloquean o forman
acumulaciones celulares
(Células Inmovilizadas = Células físicamente
confinadas en un espacio físico)
• Se elimina una etapa de separación
(Biomasa de Producto)
• Consta de un filtro interno para retener las
células que se producen, los productos
tóxicos son removidos y el producto de
interés secretado recuperado
• Alta productividad, si se utiliza un soporte
poroso, la densidad celular será tal que
permitirá un buen rendimiento
• Tipos de inmovilización: Adsorción
superficial (células animales),
Autoagregación (Lodos Activados),
Confinamiento en barrera, Atrapamiento
en matriz porosa
 Quimiostatos de una etapa con
recirculación externa
b) Externa

Prurga

Efluente clarificado
tratamiento de aguas

Ingeniería de Alimentos III

 Resumen de aplicaciones del
quimiostato
• Estudio de la fisiología de microorganismos y células animales y vegetales
en condiciones constantes.
• Producción de vino.
• Producción de biomasa.
• Producción de enzimas
• Fermentaciones de la leche. Cultivos de quimostato pueden ser usados
para la producción de "iniciadores" para la fabricación de quesos y leches
fermentadas, tal como el yogurt.
• Aguas residuales

Ingeniería de Alimentos III

 C. continuo vs C. Discontinuo
Cultivo dicontinuo (lote o intermitente)
• Sistema cerrado
• La población microbiana crece en un
volumen fijo de medio que no se renueva
y que se modifica
• Fase temprana de crecimiento constante
• Fase exponencial, concentración de
sustrato y resto de nutrientes disminuye, •
inhibición por exceso de producto,
acumulación de productos excretados, pH
extremoso, fisiología del microorganismo •
cambia a lo largo del tiempo de incubación •
• Fase estacionaria medio de cultivo
inhabitable
• Fácil de controlar, permite realizar muchas
réplicas a pequeña escala
• Ideal para producir metabolitos
secundarios( los que se generar después
de que crece el m.o.)
Ingeniería de Alimentos III
Cultivo continuo
• Sistema abierto
• El medio se agrega continuamente y opera
en estado estacionario (equilibrio entre la
velocidad de duplicación de un m.o.,
velocidad de salida de células y medio de
cultivo con desechos)
Los residuos mas el exceso de población se
eliminan a través de una línea de salida a
una definida velocidad de Dilución
Flujo constante a volumen fijo
Ideal para producir metabolitos primarios
(metabolitos asociados al crecimiento)
• Permite obtener altos rendimientos de
producto
• Ambiente constante
• Permite estudiar el efecto de los nutrientes
sobre un m.o. específico
 Transferencia de oxígeno en los
biorreactores
• La transferencia de masa es el proceso en el cual
ocurre un cambio de concentración de un
compuesto al transferirse de una fase a otra.

Difusión o
4
convección
3
1 2
Transporte de O2
en el seno del
oxígeno líquido E. coli
1- TRANSFERENCIA DE MASA EN GASES O LIQUIDOS QUIETOS: POR
DIFUSION MOLECULAR.

La velocidad de transferencia de masa debida a un gradiente de

concentración se define por la ley de Difusion ( LEY DE FICK), donde la
transferencia se efectua por un mecanismo lento.
J = - DAB dCA
dZ
- DAB: coeficiente de difusión del soluto A en la mezcla AB (cm2 seg-1 )
- La fuerza impulsora (dCA) gradiente de concentración
- El flujo de masa (J) que se transfiere es directamente proporcional al
gradiente de concentracion o fuerza impulsora.

El coeficiente DAB puede OBTENERSE :

* gases : teoría cinética de los gases
* líquidos: no hay teoría de estructura. En caso de soluciones diluidas
de no electrolitos hay expresiones similares a las de gases, relacionando
con el PM de los solventes, viscosidad, etc, pero no son exactas.
 2- TRANSFERENCIA DE MASA EN LIQUIDOS AGITADOS : Por
Convección

No se pueden describir en forma exacta las condiciones de flujo (turbulencia) y se

recurre a parámetros globales como son los coeficientes de transferencia de
masa que dependen de los compuestos a transferir y de las condiciones del
sistema.
Líquido
Gas
C*g
Fuerza motriz = ∆F =(C*g-CL)
O2
C*g: se estima mediante la ley de Henry o Ec. de Pirt
CL CL: se mide con un electrodo

Así la velocidad de trasnferencia de masa por unidad de volumen y por

convección (Na) es:
Na= A∆F/VR
Na= KLa (C*g-CL)
a: Area diponible/Volumen del reactor
1/Resistencia a fluir: conductancia= KL
KLa: coeficiente volumétrico de tranfserencia de O2.
C*g= Ci CH2O
Ci = (P/H) YO2 donde P-presión; H-cte de Henry; YO2 mol O2 /moles totales
 Métodos para calcular el KLa

a) Indirectos: método del sulfito, estático y del tiempo de respuesta.

b) Directos: método dinámico y balance de oxígeno

• Investigar y describir al menos dos métodos para calcular el KLa

• Lectura y discusión de articulo:
1. ¿Cuántos gases participan en la fase acuosa?
2. ¿Cuál fue el desafío de los autores en el diseño del biorreactor?
3. ¿Cuál fue el reactor que utilizaron?
4. ¿Qué ecuación proponen para la transferencia de masa?
5. ¿Cómo se agitó el reactor y como se suministraron los gases?
6. ¿Cómo se midió el oxígeno disuelto?
7. ¿Qué método utilizan para medir el KLa?
8. ¿Cuál fue el sustrato utilizado?
9. ¿Cuál fue la limitante del diseño?
10. ¿Cómo aumentaron la tasa de transferencia?
 Escalamiento de Biorreactores
Objetivos del escalamiento:
1.Predecir como se realizará el proceso de fermentación
2.Controlar las condiciones de operación independientemente de
la escala utilizada

Parámetros a considerar durante el escalamiento:

•Transferencia de oxígeno (gas)
•Transferencia de calor
•Tipo de fluidos (Newtoniano o No-Newtoniano)
•Agitación (homogenización del medio)
Criterios para el escalamiento
Dependiendo del tipo de fermentación deberá escogerse uno de
los siguientes criterios para el escalamiento:

•Número de Reynolds modificado nD2iρ/μ

•Potencia consumida durante el mezclado por unidad de volumen
de líquido P/V
•Energía disipada por unidad de masa del líquido
•velocidad de transferencia de oxígeno en un punto determinado
del reactor (coeficiente volumétrico de transferencia de oxígeno,
KLa)
•Velocidad de circulación del líquido

P/V y KLa son los dos criterios más utilizados para el

escalamiento. El número de litros, el número de Reynolds y el
tiempo de mezclado no son buenos criterios de escalamiento.