celulas LE

Tecnica para búsqueda de celulas LE

materiales:
tubos de macro-hematocrito
portas
frasquito con 4-8 perlas de vidrio y 1 gota de hepaerina
jeringa con aguja gruesa, de 15 cm de largo
embudo
Introduccion:
El Lupus Eritematoso Sistemico es una enfermedad autoinmune,
que afecta a muchos tejidos y organos como articulaciones, piel,
sistema nervioso, riñon, corazon, pulmon, sangre, higado, bazo y ojos.
Las celulas LE son polimorfonucleares que fagocitaron restos
nucleares alterado, proveniente de la destruccion del nucleo de otros
leucocitos, por el llamado Factor LE (factor nuclear). Este es Ig G-
anti ADN que se fija a la superficie del nucleo y determina
alteraciones en la cromatina; y entonces al ser recubierto por
anticuerpos, es fagocitado por los neutrofilos.
El objetivo es hallar neutrofilos que tengan adherido an su
superficie restos nucleares, o bien que los restos esten en su interior.
Existen 2 metodos (entre otros)

A) Metodo sin coágulo:

1- Sacar sangre al paciente, y colocar en frasquito con las perlas
que posean 1 gota de heparina.
2- Dejarlo rotar en el agitador por 30 minutos, o bien agitar
vigorosamente por 5 a 10 minutos para generar la lisis de
leucocitos.
3- Llevar la muestra a estufa de 37 ºC entre 1 a 4 horas, para darle
tiempo a los leucocitos enteros a fagocitar los restos de los
lisados y que decanten los globulos del plasma.
4- Con la jeringa de aguja larga aspirar la capa de leucocitos, en la
interface plasma-globulos rojos y descargar dentro de 2 a 4
tubos de macrohematocrito.
5- Centrifugar a muy baja velocidad (500-1000 rpm), por 5
minutos.
6- Aspirar nuevamente con la jeringa la capa de leucocitosde los
tubos, y descargar en los portas, y realizar los extendido con
extensor.
7- Colorear por el metodo de May Grunwald - Giemsa y ver con objetivo de inmersion.

B) Método con coágulo:

1- Se sacan unos 5 a 10 ml de sangre y se la deja coagular durante
 2 horas a 37 ºC.
2- Centrifufar a 3500 rpm por 10 minutos.
3- Eliminar el suero y depositar el coagulo sobre varias capas de
gasa, y éstas sobre un embudo.
4- Aplastar el coagulo con una varilla y recojer el producto en un
tubo de ensayo.
5- Pasar el liquido obtenido a un tubo de macrohematocrito con la
jeringa con aguja larga, y centrifugar
15
minutos a 2000 rpm.
6- Usando la misma jeringa, eliminar primero el suero, y luego tomar la capa de
leucocitos y depositar en portas para hacer extendidos.
7- Colorear por el metodo de May Grunwald - Giemsa y ver con
objetivo de inmersion.

Observacion e interpretacion:
Buscar los campos bien coloreados y con las celulas bien
separadas, evitando lo observacion de celulas "pegoteadas" por efecto
de la lisis y la extension.
La prueba es positiva cuando se hallan leucocitos que fagocitaron
restos nucleares de los lisados, o bien los tenga adheridos en su
superficie, que se notara por la diferencia de color entre el resto
nuclear y el nucleo de leucocito entero, y se informara "Se observan
celulas LE"
El "Fenomeno de Roseta" se debe a la adhesion de 2 o mas
neutrofilos a un resto nuclear. Es raro de observar, y se debe
diferenciar de las celulas "pegoteadas" propias de extendido.
La presencia de leucocitos vacuolados no indica necesariamente
la presencia de celulas LE, ya que fagocitaron cualquier resto celular.
La prueba no es totalmente especifica, debido a que
enfermedades autoinmunes tambien generan celulas LE, y no tiene
gran sensibilidad, ya que es negativa en 30% de pacientes con lupus.
Esto se explica por el tratamiento con corticoides en estos enfermos,
que inhibe la formacion de este fenomeno, por lo actualmente no tiene
valor diagostico y es necesario realizar otras pruebas, tal como a
busqueda de anticuerpos, que son mas sensibles y especificas.
Algunos laboratorios sugieren que se confirme la presencia de
anticuerpos antinucleares (FAN/ANA) antes de buscar e informar las
celulas LE, ya que es una tecnica con alto error. Ademas no es
especifica para Lupus, y esta cayendo en desuso. Sin embargo, para
diagnosticar LES, es uno de los 10-15 parametros a considerar para
confirmar la enfermedad.
Imagenes de Celulas LE: