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Universidad Nacional Mayor de San Marcos

(Universidad del Perú, DECANA DE AMÉRICA)

Facultad de Farmacia y Bioquímica

MICROBIOLOGÍA GENERAL

GRUPO 1 MESA 1 – MIERCOLES 10:00 – 12:00 Y JUEVES 2:00 – 4:00

INTEGRANTES:

 Aliaga Hoyos María del Carmen


 Alvarado Barzola, Fernanda
 Clares Yauri, Estela
 Colán Torres, Herbert Martín
 Cuya Lopez, Karina
 Diaz, Ervin

DOCENTE:
 Maria Roque

LIMA 2018
OBJETIVOS

 Desarrollar y reconocer la utilidad de la siembra en un medio de cultivo líquido.


 Desarrollar y reconocer la utilidad de la siembra en un medio de cultivo semisólido.
 Desarrollar y reconocer la utilidad de la siembra en un medio de cultivo sólido.
 Desarrollar los pasos necesarios para realizar la tinción de Gram y reconocer los
microorganismos Gram positivos y negativos

INTRODUCCIÓN

El medio de cultivo constituye el aporte de nutrientes indispensables para el crecimiento


de los microorganismos. La composición precisa dependerá de la especie que se quiera
cultivar, porque las necesidades nutricionales varían considerablemente. Hay
microorganismos muy poco exigentes que crecen bien en medios de laboratorio
normales y microorganismos muy exigentes que necesitan determinadas sustancias
como vitaminas, suero o sangre para crecer.1
Es la colocación de un microorganismo en un ambiente artificial apropiado, para que
lleve a cabo su metabolismo, desarrollo y reproducción. Las técnicas de siembra varían
según el estado físico de medio o necesidades gaseosas del microorganismo.2
Una condición básica de la siembra es que se realice bajo rigurosa asepsia para evitar
el crecimiento de microorganismos contaminantes, la siembra tiene como finalidad el el
crecimiento poblacional de microorganismos, en un medio de cultivo bajo condiciones
de laboratorio.2 El material y los medios de cultivo donde va a crecer los
microorganismos deben de ser utilizados en condiciones asépticas para evitar su
contaminación con los microorganismos presentes en el medio ambiente. Por ejemplo
el asa de siembra debe de esterilizarse a la llama antes de usarla y después de haber
sido usada. Debe de esterilizarse antes para evitar la contaminación de los
microorganismos en estudio con otros microorganismos que estuvieran presentes en el
filamento metálico. Debe de esterilizarse después de su uso para evitar que los
microorganismos que hemos tomado contaminen el laboratorio o sean incluso un riesgo
biosanitario.1
Una de las condiciones para el cultivo es la temperatura de incubación, la cual debe
brindar condiciones óptimas para el crecimiento de microorganismos, la mayoría se
desarrollan de 35°C a 37°C de temperatura. Sin embargo las temperaturas disgenesicas
pueden ser altas como 60°C típico para el desarrollo de S. faecalis o de 44°C para E,
coli pero también pueden ser bajas como 4°C para el cultivo de Listeria.2
Luego de la inoculación e incubación los microorganismos se multiplican formando una
masa macroscópicamente visible denominada colonia, que es un clon procedente de un
mismo germen y a partir del cual será posible realizar el aislamiento y trasplante.

1.- https://sites.google.com/a/goumh.umh.es/practicas-de-
microbiologia/indice/esterilizacion/Asepsia-y-esterilizacin
METODOLOGIA

A) Siembra en medio líquido:


Para la suspensión bacteriana consiste en un medio de cultivo que contiene unos
gramos de extracto de carne comercializado disuelto en agua. Además suele añadirse
otros nutrientes, como peptonas y glucosa, así como cloruro sódico y u tampón de pH4.
La bacteria se orientara en la superficie o en el fondo del tubo dependiendo del consumo
de O2.

Esterilización del asa de siembra en aro


• Mechero encendido / Asa hasta el rojo vivo

Destapar el tubo e introducir el asa de siembra


en el inóculo de Pseudomonas aeruginosa
• Cerca al mechero

Introducir el asa de siembra en el medio líquido


• Cerca al mechero

Esterilizar el asa de siembra

Incubar el medio líquido sembrado a 37°C por


24 horas
B) Siembra en medio semisólido:
Para La técnica de agar para la motilidad de la bacteria consiste en un medio de cultivo
o de crecimiento semisólido que contiene una cantidad reducida de agar y forma un gel
suave. El estado semisólido permite a la bacteria moverse libremente a través del
medio5,6
La movilidad bacteriana evidencia una turbidez o la formación de una niebla en el medio
semisólido. Las especies no móviles, solo crecerán a lo largo de la línea de inoculación.7

Esterilización del asa de siembra en aguja


Mechero encendido Asa de platino hasta el rojo vivo

Introducir el asa de siembra en el inóculo de Pseudomonas


aeurignosa
Proximidad al mechero

Introducir el asa de siembra hasta las 2/3 partes del medio


semisólido
Proximidad al mechero

Esterilizar el asa de siembra

Incubar el medio semisólido sebrado a 37°C por 24 horas

C) Siembra en medio sólido:

Los medios solidos se utilizan para obtener bacterias aisladas por la formación de
colonias sobre la superficie del medio de cultivo y para el estudio de la morfología de las
colonias, lo que no permiten los medios líquidos. 8 En este caso se realizó una siembra
de tipo aislamiento de Pseudomonas aeruginosa.
sembrar en la placa petri
realizando una siembra por
Esterilización del asa de Introducir el asa de siembra aislamiento y finalmente
siembra en aro en el inóculo de proceder a incubar el
Pseudomonas aeurignosa sembrado a 37°C por 24
horas

RESULTADOS

A) Siembra en medio líquido:

TABLA 1. Resultado de siembra de Pseudomona aeruginosa en medio líquido

Bacteria Medio Resultado Interpretación


Pseudomonas Líquido En el tubo se
aeruginosa observa el
crecimiento de P.
aeruginosa en la
parte superior, lo
que indicaría que
es una bacteria
aeróbica.
En el medio líquido
en el cual se
sembró P.
aeruginosa, se
observa un
pigmento verde
brillante en la parte
Figura 1 superior que es
característico de
esta bacteria.

B) Siembra en medio semisólido


TABLA 2. Resultado de siembra de Pseudomona aeruginosa en medio semisólido

Bacteria Medio Resultado Interpretación


Pseudomonas Semisólido En el tubo de lado
aeruginosa izquierdo,
movimiento de P.
aeruginosa. Al
lado derecho,
movimiento de
E.coli.
En el medio
semisólido en el
cual se sembró
Pseudomonas
aeruginosa, se
observó una
ligera turbulencia,
indica poca
movilidad de la
bacteria en el
medio semisólido.

C) Siembra en medio sólido

Fig 1. Siembra en medio solido por aislamiento de Pseudomonas aeruginosa


DISCUSIÓN
Pseudomonas sp. es un género cosmopolita, este grupo es capaz de utilizar y
metabolizar un amplio rango de sustratos, ya sean orgánicos o inorgánicos, por ello
puede vivir bajo diversas condiciones, poseen también gran plasticidad génica9.
Pseudomonas aeruginosa es el patógeno más importante de este género, es un
patógeno oportunista, aerobio estricto aunque puede crecer de forma anaerobia
utilizando nitratos o arginina como aceptor alternativo de electrones y posee muchos
factores de virulencia10.
En el medio líquido se observó en la parte superior del tubo el crecimiento de P.
aeruginosa indicando que es una bacteria aerobia10.
Pseudomonas aeruginosa posee la capacidad de sintetizar diferentes pigmentos
hidrosolubles, entre los cuales se incluye el compuesto fluorescente pioverdina que
actúa como sideróforo en condiciones mínimas de Fe (III) y actúa como inhibidor del
crecimiento de microorganismos patógenos en plantas. Al combinarse con el pigmento
fenazínico azul piocianina perteneciente a las fenazinas, se crea el color verde brillante
característico de P. aeruginosa que se observa en la figura 1. Estos pigmentos ayudan
a catalizar peróxido de hidrógeno o superóxido9,11.
Muchas bacterias son capaces de moverse y en su mayoría se impulsan por organelas
especiales llamados flagelos. Estos son estructuras compuestas de proteína y anclajes,
son no contráctiles, semirrígidos. 12.
La movilidad bacteriana constituye un comportamiento unicelular denominado taxis, en
respuesta a estímulos ambientales y funciones para mantener la bacteria en un
ambiente óptimo.12
En el medio semisólido se observó una ligera turbidez indicando poco movimiento de P.
aeruginosa. Esta es una bacteria gramnegativa monotrica, en comparación a E. coli que
es peritrica. Por ello, se observa una gran diferencia en la motilidad de las bacterias
mencionadas en la figura 3. Escherichia coli tiene la capacidad de realizar “tumbling”
(dar vueltas), sin embargo las bacterias monotricas como P. aeruginosa no poseen dicha
característica dada la posesión de un solo flagelo en uno de los polos de la célula pero
sí pueden nadar en corrida y revertir patrones. 13
Pseudomonas aeruginosa puede exhibir motilidad “swarming” en superficies
semisólidas (0.5%-0.7% de agar). Esta característica es más que una forma de
locomoción y representa una adaptación compleja que da como resultado cambios en
la expresión del gen de virulencia y resistencia a antibióticos.14
Los medios de cultivo solido incluyen un agente solidificante; el primero que se utilizo
fue la gelatina; sin embargo, muchos microorganismos la hidrolizan entre ellos la
Pseudomonas aeurignosa15 y a la temperatura de incubación optima de un buen
número de bacterias (35°)16 se licua. Por ello en esta prueba el agente gelificante que
se ha empleado es el agar, Tiene características deseables como solubilidad en agua,
resistencia a la actividad de la mayoría de los microorganismos, fusión a 98°C y
solidifican entre 42 y 45°C. La finalidad de realizar la siembra en medio solido es para
obtener colonias aisladas por ello es conocido como siembra por aislamiento. Las
bacterias deben distribuirse de un modo lo bastante amplio como para que las colonias
estén visiblemente separadas entre sí. Se pudo evidenciar mediante el sembrado de
Pseudomonas aeurignosa germen estrictamente aerobio obteniéndose colonias de
color blanco.17 Esto se debe a que cuando se introduce el asa en el inoculo y se le
distribuye en forma estriada sobre la superficie del medio nutritivo; las bacterias se
desprenden del asa y pasan al medio. Las últimas células que se desprenden del asa
están bastante separadas, permitiéndole así crecer en colonias aisladas.18

CONCLUSIONES

 Se desarrolló la siembra en un medio de cultivo líquido, este esta constituido por


nutrientes en solución acuosa y son semejantes a un caldo casero filtrado y
esterilizado. Se utilizó para mantener el crecimiento de P. aeruginosa en la parte
superior.
 Se desarrolló la siembra en un medio de cultivo semisólido, donde observamos que
puede utilizarse para determinar el tipo de motilidad de P. aeruginosa que es por
medio de un solo flagelo.
 Se desarrolló la siembra en un medio de cultivo sólido donde se formó colonias
bacterianas separadas. Este medio se utilizó para aislar e individualizar distintos tipos
de microorganismos presentes en la muestra de P. aeruginosa.
 Se desarrolló la tinción de Gram siguiendo la secuencia de la tinción inicial, mordente,
decoloración y contratincion; esta técnica tuvo como finalidad crear un contraste entre
la célula y el medio que la rodea para diferenciar bacterias Gram positivas y Gram
negativas de acuerdo a la estructura y grosor de sus paredes bacterianas.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS:
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