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1. Indique y prepare un cuadro parea indicar que bacterias son Gram positivas y
cuales son Gram negativas indique las características como formas de cada uno de
ellos.
NOMBRE DIBUJO CARACTERÍSTICAS
GRAM +
Forma esférica.
staphylococcus Ausencia de endosporas
Cocos forma de racimo de
uvas
E.coli GRAM -
Tienen forma de bacilos
rectos
Es un coco bacilo
Cándida GRAM+
Cocos en cadena
Color morado
GRAM+
streptococcus mitis Cocos en cadena o en
pares
Tinción morada
Forma redonda u ovoide
GRAM+
Bacillus Bacilos rectos, delgados,
formadores de endosporas
2. Indique que son Colorantes y que son Tinciones, e indique la clasificación
respectiva en cada caso.
Los colorantes son sustancias de origen químico o biológico, generalmente tintes,
pigmentos, reactivos u otros compuestos, empleados en la coloración de tejidos
microorganismos para exámenes microscópicos.
Clasificación
Colorantes básicos: La acción colorante está a cargo del catión, mientras que el anión
no tiene esa propiedad, por ejemplo: - cloruro de azul de metileno+.
Colorante ácido: Sucede todo lo contrario, la sustancia colorante está a cargo del
anión, mientras que el catión no tiene propiedad, por ejemplo: eosinato- de sodio+
Colorantes neutros: Están formados simultáneamente por soluciones acuosas de
colorantes ácido y básicos, donde el precipitado resultante, soluble exclusivamente en
alcohol, constituye el colorante neutro, que tiene la propiedad tintorial de sus
componentes ácidos y básicos, por ejemplo: la giemsa.
Clasificación
Tinción Simple: utiliza un solo colorante.
Tinción de Gram:
Utiliza varios colorantes (cristal violeta 1m, Yodo 1m, lavado con alcohol, Safranina 30
seg)
Tinción Ácido Resistente:
Una vez teñidos, conservan su color resistiendo al lavado con ácido mineral reducido.
En esta tinción las bacterias ácido resistentes conservan el colorante primario color rosa
o rojo, los demás microorganismos son decolorados por el ácido y toman el color azul.
Tinción de Giensa:
El colorante se aplica a un frotis de sangre y se utiliza cuando se sospeche de protozoos
en la sangre para observar materias núcleos de las células.
Tinción de Esporas:
Se usa verde de malaquita en contraste con safranina.
Tinción de Cápsula:
Colorante nigrosuna, aquí se observa microorganismos encapsulados
creando resistencias.
Tinción de Flagelos:
Se usa mordiente el cual aumenta el tamaño del microorganismo.
6. Indique que tipo de Tinciones se puede usar para poder diferenciar esporas,
cápsula y flagelos de una bacteria
Tinción estructural ya que con él se puede identificar y estudiar las estructuras de las
bacterias.
7. Realice una lista de BACTERIAS Gram positivas y Gram Negativas que se
encuentren en el medio ambiente.
GRAM POSITIVAS GRAM NEGATIVAS
Bacillus anthrasis Neisseria gonorrhoeae
Clostridium, perfringens Neisseria meningitidis
Clostridium tetani, Salmonella typhi
Clostridium botulini Hemophilus influenzae
Corynebacterium pyogenes Klebsiella pneumoniae
Lactobacillus acidofillus Helicobacter pylori
Listeria monocytogenes Pseudomonas aeruginosa
Streptococcus epidermidis Escherichia coli
Staphylococcus aureius Proteus mirabilis
10. Indique que tipo de baterías puede desarrollar en el Agar EMB, KF y ABP y
porque y cuál de sus componentes hace que las bacterias tengan las características
observadas en la práctica
EMB:
La diferenciación entre organismos capaces de utilizar la lactosa y/o sacarosa, está dada
por los indicadores eosina y azul de metileno; éstos ejercen un efecto inhibitorio sobre
muchas bacterias Gram positivas. Muchas cepas de Escherichia coli y Citrobacter spp.
presentan un característico brillo metálico. Las cepas que utilizan la lactosa poseen
centro oscuro con periferia azulada o rosada, mientras que las que no lo hacen son
incoloras. Este medio permite el crecimiento de Candida spp.; la siembra en
profundidad permite el desarrollo de clamidosporas en C. albicans. Enterococcus spp.
crece en este medio como colonias puntiformes y transparentes, mientras que
Acinetobacter spp. y otras bacterias oxidativas pueden dar colonias de color azul
lavanda; esto puede ocurrir aunque las cepas no sean capaces de acidificar a partir de
lactosa al 0.5% y ello se debe a la incorporación de azul de metileno a sus membranas.
En este medio se obtiene además, un buen desarrollo de especies de Salmonella y
Shigella.
KF
La peptona ptoteosa es una peptona mixta de alta calidad nutritiva y el extracto de
levadura proporcionan la fuente de nutrientes necesarios para el crecimiento de los
microorganismos exigentes. La azida de sodio inhibe flora Gram negativa. La maltosa y
lactosa son utilizadas por la mayoría de loa Enterococos como fuente de energía con
formación de ácido, éste se manifiesta por el vire a amarillo del indicador púrpura de
bromocresol.
Enterococcus faecalis, Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes
BP
En el medio de cultivo preparado y completo la peptona y el extracto de carne
constituyen la fuente de carbono y nitrógeno, el extracto de levadura aporta vitaminas
del complejo B, la glicina y el piruvato estimulan el crecimiento de los estafilococos.
Este medio de cultivo es selectivo y diferencial debido al telurito de potasio y al cloruro
de litio, los cuales inhiben el desarrollo de la flora acompañante. La yema de huevo
permite demostrar la actividad lecitinásica.
Los estafilococos coagulasa positiva reducen el telurito a teluro y originan colonias de
color grisáceo-negro, y dan reacción sobre la yema de huevo produciendo alrededor de
la colonia una zona opaca que a menudo tiene una zona clara más externa
Se pueden encontrar cepas no lipolíticas, que presentan igual características de colonias
pero sin la zona opaca y clara.
Se debe confirmar la presencia de S. aureus mediante pruebas bioquímicas.
KIA P. aeruginosa
Pico/fondo: k/k
Producción de gas: (-)
Producción de ácido sulfhídrico: (-)
Este medio se emplea para la identificación de bacilos gram – basada en la fermentación
de la lactosa y la glucosa y en la producción de H 2 S. Los organismos que fermentan
glucosa pero no lactosa mostrarán un crecimiento K/A, mientras que los que si
fermentan lactosa mostrarán un resultado A/A, con o sin formación de gas. La
formación de H 2 S se demostrará por el ennegrecimiento del medio. Si el tubo no
muestra ningún cambio es porque la bacteria no consume ni lactosa ni glucosa.
SIM E.coli
Movilidad (+) producen turbidez del medio, que se extiende más allá de la línea de
siembra.
Indol (+) desarrollo de color rojo luego de agregar el reactivo de Kovac´
Producción de ácido sulfhídrico (-) el medio permanece sin cambio de color.
La motilidad se pone de manifiesto por la turbidez difusa del medio de cultivo alrededor
del canal de la picadura La producción de H 2 S se reconoce por el ennegrecimiento de
la zona de crecimiento o del medio debido a la presencia del tiosulfato sódico. Para la
demostración del indol se usa el rvo de Kovacs, que manifiesta la degradación del
triptófano por la enzima triptofanasa en indol, que se combina con el aldehído presente
en el rvo de Kovacs, para producir un color rojo.
TSI S. enteritidis
Producción de gas (+)
Producción de ácido sulfhídrico (+)
En este medio se busca determinar la capacidad de la bacteria para degradar los
azúcares y la formación de gas y de H 2 S.La fermentación aeróbica se produce en el
pico de tubo y la anaeróbica en el fondo del tubo. La degradación de la lactosa ocurre en
la parte superior, la de la sacarosa en la parte intermedia y la de la glucosa en la parte
profunda, produciéndose un viraje del rojo al amarillo. El tiosulfato es reducido a H 2 S
quien reacciona con el citrato férrico amoniacal para dar formación al sulfuro de fierro
que es de color negro. La presencia de gas se debe al CO 2 producto de la fermentación.
S. typhimurium
Actividad ureásica: (-)
Color del medio amarillo