Adhesión y señalización de células endoteliales

Abstracto
Las células endoteliales recubren los vasos sanguíneos y proporcionan una interfaz dinámica
entre la sangre y los tejidos. Se remodelan para permitir que leucocitos, fluidos y moléculas
pequeñas entren en los tejidos durante la inflamación y las infecciones. Aquí comparamos las
redes de señalización que contribuyen a la permeabilidad endotelial y la migración transendotelial
de leucocitos , centrándose particularmente en señales mediadas por pequeñas GTPasas que
regulan la adhesión celular y el citoesqueleto de actina. La señalización de Rho y Rap GTPasa es
importante para ambos procesos, pero difieren en que las señales se activan localmente bajo
leucocitos, mientras que la permeabilidad endotelial es un evento más amplio que afecta a toda la
célula. Algunas moléculas desempeñan un papel único en uno de los dos procesos y, por lo tanto,
podrían dirigirse a alterar selectivamente la permeabilidad endotelial o la migracióntransendotelial
de leucocitos .

1. Introducción
Las células endoteliales (EC) forman una barrera semipermeable para separar la corriente
sanguínea de los órganos y tejidos subyacentes y controlar el transporte de fluidos, solutos y
células a través de las paredes de los vasos sanguíneos. La barrera está mediada por adhesiones
de células endoteliales incluyendo uniones estrechas (TJ), uniones adherentes (AJ) y una
variedad de otras moléculas de adhesión que incluyen PECAM-1 y nectinas , que están
conectadas al citoesqueleto de actina a través de diferentes moléculas adaptadoras ( Fig. 1 ). La
arquitectura y la composición de las uniones de células y células varía entre los lechos vasculares
dependiendo de los requisitos específicos del órgano [1] , [2] . Además de mantener la adhesión
entre EC, las uniones célula-célula controlan la permeabilidad vascular y la migración de
leucocitos mediante un complejo equilibrio entre múltiples moléculas de señalización ( Fig.
1 , Fig. 2 ) [3] , [4]
TJs regulan la difusión de iones y solutos polares y bloquean la penetración de grandes
macromoléculas a través de EC. TJs están formadas por las moléculas de homofílicas de
adhesión célula-célula ocludina,claudins y moléculas de adhesión de unión (JAM) ( Fig.
1 ) [5] , [6] . Las claudinas son las principales proteínas que forman barreras , en particular la
claudina-5 es crítica para la permeabilidad endotelial in vivo e in
vitro [7] . Ocludina y claudinas están vinculados a zonula ocludens (ZO) -1, ZO-2, ZO-
3, cingulina y otros complejos proteicos, que median la interacción entre las moléculas de
adhesión y los filamentos de actina [5] . La familia JAM está compuesta por tres proteínas
estrechamente relacionadas JAM-A, -B y -C, y por el receptor coxsackie y adenovirus (CAR). Los
JAM median la interacción célula-célula endotelial y regulan la migración transendotelial
de leucocitos (TEM) [8] . Tanto JAM como CAR regulan la permeabilidad al admitir la función y el
ensamblaje de TJ [9] .

VE-cadherina es el componente transmembrana clave de AJs endoteliales y se expresa solo en

EC [10] . VE-cadherin junto con PECAM-1 inicia y mantiene el contacto célula-célula endotelial,
manteniendo los CE juntos para proporcionar soporte mecánico al endotelio y proporcionar
estabilidad de la unión endotelial [11] , [12] . Los AJ pueden regular la expresión de los
componentes TJ y la organización TJ sigue la formación AJ. [11] , [13] . Además, AJs y TJs
están interconectados [14] , por ejemplo, la diafonía de las proteínas ZO con AJs [15] . VE-
cadherin se une indirectamente a través de su cola citoplásmica a los filamentos de actina por un
complejo de proteínas que incluye α- y β - cateninas , plakoglobina ( γ- catenina), p120-
catenina,vinculina y α - actinina ( Fig. 1 ) [16] , que son vitales para la estabilidad de
las uniones y también para la apertura y el cierre dinámicos de las uniones [17] .
Aquí discutimos los roles de las uniones endoteliales de células y células en la señalización que
conducen a cambios en la permeabilidad endotelial y durante la migración transendotelial
deleucocitos (TEM), con un enfoque particular en las pequeñas GTPasas .

2. Regulación de pequeñas GTPasas

Varios miembros de la superfamilia Ras de pequeñas GTPasas contribuyen a la adhesión de
células endoteliales y, por lo tanto, regulan la permeabilidad endotelial y / o la TEM de
leucocitos.Estos incluyen Rap1, Rap2 y varios GTPasas de la familia Rho ( Fig. 2 , Fig. 3 ). La
mayoría de las pequeñas GTPasas ciclan entre una conformación inactiva unida a GDP y una
conformación activa unida a GTP. Este ciclo está regulado por factores de intercambio de
nucleótidos de guanina (GEF), que catalizan el intercambio de GDP por GTP, activando así las
proteínas, y porproteínas activadoras de GTPasa (GAP), que estimulan la hidrólisis de GTP e
inactivan las proteínas. La interacción entre pequeñas GTPasas y sus efectores aguas abajo a
menudo requiere sulocalización a las membranas, que está mediada por la modificación
postraduccional por los lípidos ( prenilación y/o palmitoilación ). [18] , [19] . Por
ejemplo, se requiere geranilgeranilaciónde Rho GTPasas para la permeabilidad inducida por
trombina en EC [20] . Algunas GTPasas pequeñas se inhiben al unirse a las proteínas que las
extraen de las membranas, incluidos los inhibidores de la disociación de nucleótidos de guanina
(GDI) y las proteínas 14-3-3. [21] , [22] . Las pequeñas GTPasas se activan rápidamente por los
receptores de la superficie celular, y una sola GTPasa puede interactuar con múltiples objetivos
aguas abajo para inducir un rango de respuestas celulares de una manera espacio-temporal ,
dependiendo del estímulo y el tipo de célula [19] .

Fig.1 Las principales proteínas transmembrana en las uniones célula-célula

endoteliales. Las células endoteliales se alinean en el torrente sanguíneo y están
constantemente expuestas al estrés por cizalladura del fluido (panel superior). El panel inferior
muestra las principales proteínas transmembrana en las uniones célula-célula endoteliales
(derecha). Están asociados con uniones estrechas o uniones adherentes como se indica, con la
excepción de PECAM-1, que no está asociado con ningún tipo de unión. Se informa
que tres genes diferentes de claudina , JAM ynectina se expresan en células endoteliales
(números / letras indicadas bajo el nombre de la proteína). Las proteínas intracelulares unen las
proteínas transmembrana al citoesqueleto de actina.Hay moléculas de unión adicionales , como
CD99 y ESAM, que se omiten para mayor claridad

3. Señalización a las uniones endoteliales en la permeabilidad vascular

Las uniones endoteliales célula-célula se remodelan dinámicamente en respuesta a estímulos
extracelulares múltiples, que aumentan o disminuyen transitoriamente la permeabilidad endotelial
y de ese modo regulan la entrada de solutos y macromoléculas polares en los tejidos del torrente
sanguíneo ( Fig. 2 ) [4] . Por ejemplo, los estímulos proinflamatorios como la trombina, la
histamina y el TNF α aumentan la permeabilidad, mientras que los mediadores antiinflamatorios
como la esfingosina 1-fosfato (S1P) y la angiopoyetina-1 disminuyen la permeabilidad. [23] . El
aumento de la fuga de la barrera vascular se asocia con la interrupción de las uniones
endoteliales, en particular AJ [10] , y ocurre en enfermedades como el cáncer, la aterosclerosis,
la diabetes, la hipertensión, la inflamación y la isquemia [24] , [25] . Además, las
malformaciones cavernosas cerebrales (MCP) son enfermedades hereditarias o esporádicas que
se asocian con la desorganización de las uniones de los vasos sanguíneos venosos y una mayor
permeabilidad [26] .

Fig.2 Moléculas de señalización que regulan la permeabilidad vascular. Las

principales proteínas de unión que regulan la permeabilidad vascular se muestran en la célula
derecha. La celda izquierda muestra ejemplos de receptores que aumentan la permeabilidad
vascular y las moléculas de señalización intracelular que contribuyen a esta respuesta,
centrándose en aquellos regulados por Rho y Rap GTPasas . ROS, oxígeno reactivo especie .
Fig.3 Moléculas de señalización que regulan la migración transendotelial de leucocitos . La
unión de los leucocitos y la transmigración a través de las células endoteliales es un proceso de
múltiples pasos, que implica una variedad de diferentes moléculas de adhesión en los leucocitos y
las células endoteliales (panel superior). Durante la migración transendotelial , las moléculas de
adhesión endotelial ICAM-1, VCAM-1 y PECAM-1 interactúan con leucocitos y transmiten señales
a la célula endotelial (panel inferior), lo que promueve el proceso de transmigración. La celda
izquierda muestra señales que implican RhoG , Rac1 y Rap1 GTPasas ; la celda derecha muestra
señales que involucran
a RhoA . LBRC, borde lateral reciclaje compartimento ; ROS, oxígenoreactivo especie .

3.1. Señales que aumentan la permeabilidad endotelial

Los estímulos proinflamatorios aumentan la permeabilidad a través de una combinación de
cambios en AJ, TJ y el citoesqueleto de actina asociado ( Fig. 2 ). La composición e integridad de
AJ está regulada por cambios en la fosforilación de las proteínas de unión . Por ejemplo, la
trombina activa la serina / treonina quinasa proteína quinasa C (PKC ) α , que induce el
desensamblaje del complejo VE-cadherina mediante la fosforilación de p120ctn [27] . En ECs
estimulados por VEGF, Src media la activación de Rac1, lo que conduce a la fosforilación de VE-
cadherina a través de la serina / treonina quinasa PAK, y por lo tanto aumenta la permeabilidad
endotelial [28] . LPS activa la familia Rab GTPasa Rab5, que media VE-cadherina internalización
que resulta en aumento de la permeabilidad [29] .
La fosforilación de la tirosina de los componentes AJ también se asocia con una mayor
permeabilidad. En ECs no estimuladas , el receptor y las proteínas tirosina fosfatasas
citoplásmicas (PTP) se localizan en los AJ endoteliales y desfosforilan los componentes de AJ
para reducir la permeabilidad. [17] , [30] , [31] . Por ejemplo, la tirosina fosfatasa SHP2 se
asocia con la β- catenina en los complejos VE-cadherina / p120 / plakoglobina [32] . La depleción
de SHP2 potencia la fosforilación de los componentes del complejo AJ que conduce a una mayor
permeabilidad en respuesta a la trombina [32] , [33] . TNF α aumenta la fosforilación de tirosina
de VE-cadherina para mejorar la permeabilidad vascular [34] , [35] . La fosforilación VE-
cadherin Tyr685 es necesaria para la permeabilidad inducida por VEGF e histamina in
vivo [36] . Además, se informó que la fosforilación de VE-cadherina en Tyr658 y Tyr685 era
necesaria para aumentar la permeabilidad y la endocitosis de VE-cadherina en respuesta
a bradiquinina e histamina. [37] .
Los contactos entre células endoteliales están relacionados con el citoesqueleto de actina, que es
fundamental para la estabilidad de la unión y contribuye a los cambios en la permeabilidad
vascular [38] . Los factores inductores de permeabilidad desestabilizan las uniones célula-célula
al cambiar la orientación del haz de actina, que pasa de ser paralela a las uniones a ser
perpendicular. Los filamentos de actina perpendiculares, incluidas las fibras de tensión, imponen
una fuerza mecánica sobre las uniones e interrumpen su
integridad [39] , [40] , [41] . RhoAinduce fibras de estrés y aumenta la contractilidad que
conduce a una mayor permeabilidad vascular en respuesta a una variedad de estímulos
extracelulares que incluyen trombina e histamina (Fig. 2 ). RhoA activa la serina / treonina quinasa
ROCK, que fosforila la subunidad MYPT1 de la fosfatasa de la cadena ligera de
miosina trimérica (MLC), lo que inhibe su actividad enzimática. [42] , [43] . La posterior
fosforilación incrementada de MLC conduce a un aumento de la contractilidad de
la actomiosina . Se requiere RhoA para aumentar la permeabilidad en respuesta a varios
estímulos, incluidos la trombina y el TNF α [44] . Curiosamente, RhoB y RhoC también se activan
por la trombina [45] , y RhoB promueve la contracción sostenida inducida por trombina [46] . Por
el contrario, la activación de RhoA por angiopoyetina-1 conduce a la estabilización de la unión
célula-célula e inhibe la permeabilidad inducida por VEGF, y esta respuesta depende de
la formina activada por Rho mDia1 pero no de ROCK [47] . Esto sugiere que el efecto de
la RhoA en uniones depende de si se activa ROCK, la promoción de la
contractilidad actomiosina, o en mDia1, que estimula la polimerización de la actina [48] .
El aumento de la permeabilidad a menudo refleja la pérdida de proteínas TJ a partir de las
uniones, lo que está relacionado con la mejora Señalización RhoA / ROCK. Por ejemplo, ROCK
induce la fosforilación de claudin-5 y occludin [49] . TNF α aumenta la permeabilidad al inducir
una disminución en claudin-5 en las uniones a través de ROCK1 y ROCK2 [50] . LPS induce la
pérdida de proteínas TJ y el aumento de la permeabilidad endotelial a través de la activación
de RhoA por p115RhoGEF [51] . En el complejo TJ, ZO-1 está unido a la cingulina que está
unida al citoesqueleto de actina ( figura 1 ). La cingulina promueve la función de barrera endotelial
in vitro e in vivo , en parte interactuando e inhibiendo el RhoA GEF-H1 [52] , [53] , mientras
que el Cingulin -como asociados JACOP proteína con p114RhoGEF para mantener TJs
endoteliales y AJs, presumiblemente mediante la estimulación de la actividad de RhoA en las
uniones célula-célula [15] . Esto indica que el sitio de activación de RhoA , y cuál de sus objetivos
estimula, determina si inhibe o estimula la interrupción de la unión.

3.2. Señales que reduce la permeabilidad

Los estímulos que reducen la permeabilidad y promueven la función de barrera endotelial
generalmente actúan a través de tres pequeñas GTPasas , Rap1, Rac1 y Cdc42, y como se
describió anteriormente en algunos casos RhoA , que actúan juntas a través de redes de
señalización interconectadas ( figura 2 ). Por ejemplo, la trombina inicialmente aumenta la
permeabilidad endotelial a través de RhoA , pero también aumenta la generación de S1P, que
luego estimula la activación de Rac1 dando como resultado una mayor integridad de la barrera
para revertir la permeabilidad inducida por trombina. [54] .
La integridad de la unión endotelial se ve reforzada por estímulos que elevan los niveles
de cAMP , como adrenomedulina , prostaciclina, prostaglandina E2 y agonistas adrenérgicos β ,
que reducen la permeabilidad de la CE. [55] . cAMP activa directamente el RapGEF Epac , que
activa Rap1 [56] . Hay dos proteínas Rap1, Rap1a y Rap1b. Rap1b es el más expresado en EC,
pero la depleción de Rap1a reduce la función de barrera de la CE más que la depleción de Rap1b,
lo que podría explicarse por su colocalización con VE-cadherin en AJs [57] .
Rap1 actúa a través de múltiples vías para promover la adhesión mediada por VE-cadherina y
mantener la función de barrera [56] . En primer lugar, conduce a la activación de Rac1 y Cdc42,
que a su vez fortalecen las uniones célula-célula endoteliales. Por ejemplo, Epac1 / Rap1 actúan a
través de Rac GEFs Tiam1 y Vav2 para promover la activación de Rac1 [55] . Además, los
eritrocitos circulantes o plaquetas liberan S1P que activa Rac1 aguas abajo de Rap1 a través
de Akt , lo que lleva a la estabilización de la barrera endotelial [58] , [59] . Rap1 también
promueve el ensamblaje de uniones complejo mecanosensor de PECAM1, VE-cadherina y
VEGFR2 en respuesta a la tensión de corte, que luego activa Rac1 a través de Vav2 y Tiam1 para
aumentar lafunción de barrera [60] , [61] , [62] . Finalmente, Rap1 activa Cdc42 a través
de RhoGEF FGD5 para promover la estabilización de la unión célula-célula [63] , [64] .
Además de activar Rac1 y Cdc42, Rap1 actúa a través de varios mecanismos para reducir
la actividad de RhoA / ROCK, lo que resulta en una mayor función de barrera endotelial ( Fig.
2 ).Actúa a través de su efector Rasip1, que recluta el RhoGAP ARHGAP29 para inhibir
la actividad RhoA y ROCK [65] , [66] . Rasip1 también disminuye la formación de fibras de
estrés y la permeabilidad endotelial por interacción directa con el corazón del
receptor transmembrana de vidrio (HEG1) [67] . Además, Rap1 controla la barrera endotelial al
reclutar su efector CCM1 / KRIT1 a las uniones EC, lo que reduce las fibras de estrés y
la actividad de RhoA en EC [68] , [69] . A diferencia de Rap1, el agotamiento de Rap2 aumenta
la resistencia a la barrera endotelial, aunque no se conoce el mecanismo mediante el cual la
función de barrera altera el Rap2. [70] .
Rac1 aumenta la estabilidad de la unión CE y por lo tanto reduce la permeabilidad, tanto al
estimular la extensión de lamellipodia para cerrar las brechas intercelulares como al inducir el
ensamblaje de haces corticales de actina F y reducir la tensión
de actomiosina [71] , [72] . Además, el estrés de cizallamiento actúa a través de VE-cadherina,
Tiam1 y Rac1 para reducir el nivel de fosforilación de la tirosina en ocludina , lo que lleva a una
mejora de la barrera [73] , aunque la tirosina fosfatasa implicada en esta vía no ha sido
identificada, la angiopoyetina-1 reducela fosforilación de tirosina de ocludina a través de la
proteína tirosina fosfatasa N-2 y promueve la interacción de ocludina con ZO-1 para mejorar las
TJ [74] , y por lo tanto será interesante probar si esta fosfatasa actúa aguas abajo de Rac1.
Rac1 actúa a través de varios efectores aguas abajo para mediar la estabilización de unión,
incluido IQGAP1, que se une a Rac1 y Cdc42, e interactúa con activadores de la polimerización
de actina (N-WASP, complejo Arp2 / 3) para promover el ensamblaje de AJ [75] , [76] . Por el
contrario, se ha informado que Rac1 aumenta la permeabilidad aguas abajo de VEGF a través de
la fosforilación mediada por PAK de un motivo altamente conservado dentro de la cola intracelular
de VE-cadherina, Ser665, dando como resultado la internalización de cadherina VE [47] .VEGF
activa VEGFR2 que se asocia con VE-cadherin y activa Rac1 a través
de Src y RacGEF Vav2 [47] . VEGF también puede actuar a través de la fosfatidilinositol (3, 4,5) -
intercambiador de Rac dependiente de trifosfato de 1 (P-Rex1) para activar Rac1 y aumentar la
permeabilidad [77] . Por lo tanto, es probable que el efecto de Rac1 sobre la permeabilidad
dependa del contexto celular.
Además de ser activado aguas abajo de Rap1, Rac1 se activa localmente en las uniones célula-
célula, en parte a través de RhoGEFs Trio y Tiam1, que interactúan con VE-
cadherin [44] , [78] , [79] , [80] . Por otro lado, los mediadores inflamatorios tales como LPS,
TNF \ alpha , angiotensina 2 y trombina reducen la actividad de Rac1 dando como resultado la
apertura de la unión y el aumento de la permeabilidad. [81] . RhoB inhibe la actividad de Rac1 en
las uniones al reducir el tráfico de Rac1 a las uniones célula-célula. La expresión de RhoB es
inducida por las citoquinas inflamatorias TNF α e IL-1 β , y promueve la contracción sostenida de
la CE tras la exposición a la trombina en el contexto de la inflamación [46] .
Como Rac1, Cdc42 es importante para mantener AJs [82] , [83] , [84] . Por ejemplo, Cdc42
restaura la función de barrera endotelial tras la estimulación con trombina [85] . El aumento de la
permeabilidad endotelial inducida por la pérdida o desestabilización de VE-cadherina aumenta la
actividad de Cdc42 [84] , [86] , lo que presumiblemente promueve la restauración de unión .In
vivo, se requiere Cdc42 para la adhesión célula-célula endotelial durante el desarrollo, y es
necesaria para la polaridad endotelial [87] .
Cdc42 actúa a través de varios mecanismos para estimular el ensamblaje AJ. Promueve el
transporte de VE-cadherina después de Golgi a AJs [88 ] y controla la unión de α- catenina
con β-catenina e interacción del complejo VE-cadherina con el citoesqueleto de
actina [84] . Además, Cdc42 controla la organización de actina pensó dos vías: primero a través
de sus efectores PAK2 y PAK4 que regulan la unión actomiosina , y en segundo lugar a través de
N-WASP que se requiere para el ensamblaje de la actina de unión [87] . Cdc42 También se ha
informado de actuar a través de la atípica proteína quinasa C PKC ι para mediar en la adhesión
célula-célula endotelial in vivo [89] .
En general, la permeabilidad endotelial refleja las acciones combinadas de múltiples moléculas de
señalización, incluidas pequeñas GTPasas , quinasas y fosfatasas, que modifican directamente
las moléculas de unión y actúan sobre el citoesqueleto de actina asociado para alterar
la integridad de la unión ( figura 2 ).

4. Señalización en las uniones endoteliales y migración transendotelial leucocitaria

La TEM de leucocitos es esencial tanto en inmunosurvencias como durante el daño o la infección
de tejidos [90] , [91] . El TEM es un proceso único en el cual un leucocito se comprime a través
del endotelio e implica una señalización dinámica entre los leucocitos y las EC que conduce a los
cambios en la morfología requerida para TEM ( Fig. 3 ).
Los leucocitos cruzan el endotelio a través de una cascada de pasos múltiples que implica la
captura, enrollamiento, adherencia y rastreo de leucocitos en CE, seguido de la migración de
leucocitos a través del endotelio en presencia de fuerzas de cizallamiento ejercidas por el flujo
sanguíneo ( Fig. 3 ) [92] , [93] , [94] . Los leucocitos pueden atravesar el endotelio a través de
dos rutas diferentes: paracelular , a través de las uniones célula-célula, o transcelular , a través del
cuerpo celular endotelial [95] , [96] . La elección de la ruta depende del tipo de célula de
transmigración, el sitio de TEM y el tipo de endotelio vascular [97] , [98] . Además, la ruta de
la diapedesis depende de la integridad de la unión endotelial : es más probable que las células T
tomen una ruta transcelular cuando las uniones se fortalecen [99] .
Varias moléculas de adhesión expresadas por EC contribuyen a TEM, incluyendo ICAM-1 y / o
VCAM-1 en la superficie luminal y PECAM-1 y / o JAM en
las membranas basolaterales [8] , [93] , [100] . La expresión y regulación de estas moléculas
depende del estrés de cizallamiento del flujo sanguíneo, las citoquinas proinflamatorias y
las quimiocinas , el lecho vascular y la rigidez del tejido [101] , [102] .
4.1. Arrastre de leucocitos y extensión endotelial de estructuras de atraque
Los leucocitos inicialmente se arrastran sobre CE antes de arrestar y transmigrar. La interacción
de la integrina leucocitaria LFA-1 / α L β 2 con ICAM-1 activa RhoA [94] . RhoA promueve la
rigidez de la superficie endotelial, mejorando la migración de leucocitos sobre ella y, por lo tanto,
la capacidad de los leucocitos para encontrar un sitio para TEM. ICAM-1 activa RhoA a través
de RhoGEF LARG ( Rho GEF asido por leucemia , ARHGEF12), y el agotamiento de LARG
endotelial reduce el rastreo de leucocitos en EC [103] .
Los CE a menudo extienden protuberancias dinámicas similares a microvellosidades conocidas
como estructuras de atraque o copas transmigratorias alrededor de leucocitos adherentes ( Fig.
3 ) [94] . Estas estructuras contribuyen a TEM, probablemente aumentando el área de contacto
leucocito-endotelio con una interrupción mínima de la barrera y ayudando a los leucocitos a
extender las protuberancias para cruzar el endotelio. [104] . Inicialmente ICAM-1 y VCAM-1 se
agrupan en estructuras similares a anillos alrededor del leucocito, seguidas por la protrusión de la
membrana apical. El anclaje de ICAM-1 al citoesqueleto de actina a través de proteínas
adaptadoras, tales como filamina y cortactina , es esencial para la formación de anillos ICAM-1 y
la posterior TEM de leucocitos. [105] , [106] , [107] .
Se requiere Rac1 para la agrupación ICAM-1, mientras que RhoG controla la protrusión de la
membrana ( Fig. 3 ). RhoG se activa mediante la unión de ICAM-1 a la SGEF específica de GEF
de RhoG [108] . ICAM-1 también se asocia y activa el GEF Trio, que activa Rac1 y luego RhoG
a través de sus dos dominios RhoGEF diferentes [109] . Curiosamente, la expresión de Trio está
fuertemente regulada positivamente por la estimulación de TNFα , lo que sugiere que el
ensamblaje de la estructura de acoplamiento está acoplado a la inducción de ICAM-1 y VCAM-
1. [109].

4.2. Cruzando el endotelio y cerrando el poro de transmigración

Para TEM paracelular , se producen dos eventos de señalización una vez que el leucocito está
anclado al endotelio: internalización VE-cadherina local a través de vesículas recubiertas de
clatrina e influjo de proteínas de membrana y membrana que incluyen PECAM-1 desde un
compartimento de reciclado de borde lateral (LBRC) al TEM sitio [110] , [111] , [112] , [113] .
La apertura de la unión implica la señalización de VCAM-1 a VE-cadherina. La interacción de
VCAM-1 con la integrina leucocitaria VLA-4 induce la activación de Rac1 y la posterior producción
de especies reactivas de oxígeno intracelulares (ROS) por NADPH oxidasa [114] . Esto a su vez
activa la tirosina cinasa rica en prolina (Pyk2) [115] que luego fosforila VE-cadherina en Tyr658
y Tyr731, lo que resulta en la pérdida local de la función de cadherina VE, apertura de la unión y
aumento de TEM ( Fig. 3 ) [36] , [116] , [117] , [118] . La inhibición de esta vía, a través de la
PI3-quinasa p110 α , Pyk2 y Rac1, reduce la TEM [114] , [118] , [119] , [120] . Rac1, ROS y
Pyk2 también inducen disociación de VE-PTP de VE-cadherina, lo que conduce a un aumento de
la fosforilación de la tirosina de la cadherina VE y de la internalización de la cadherina VE, lo que
facilita la transmigración. [3] , [31] , [113] , [121] . Además, la señalización endotelial estimula
la unión la contractilidad de la actomiosina y actúa sobre las proteínas de unión célula-célula , lo
que conduce al desensamblaje de las uniones transitorias ylocalizadas esenciales para los
leucocitos TEM [94] , [122] .
Múltiples proteínas están asociadas con la fracción LBRC durante TEM, incluida PECAM-1, que
es importante para TEM [123] , [124] . La interacción homotípica PECAM-1 inicia el
reclutamiento del LBRC al sitio de interacción leucocitaria. Esto está relacionado con
el reclutamiento localizado de Ca 2+ canal TRPC6, que aumenta el Ca 2+ intracelular y se
requiere para la etapa final de TEM, similar a PECAM-1 [125] . Aumento de
Ca 2+ intracelular desencadena la contractilidad de la actomiosina por la miosina cadena ligera
quinasa (MLCK), que se requiere para TEM [102] . PECAM-1 también está involucrado
en TEM transcelular , ya que la agrupación ICAM-1 en EC no es suficiente para promover
la vía transcelular si PECAM-1 está bloqueado [126] .
Endotelial RhoA se activa localmente por ICAM-1 durante TEM a través del reclutamiento
de RhoGEFs LARG y Ect2 [45] , [97] . La actividad de RhoA es máxima durante la etapa final
de extravasación, y media en la remodelación endotelial de actina F para formar estructuras
circulares alrededor de leucocitos transmigratorios, que previenen la pérdida vascular durante
ladiapedesis leucocitaria y promueven el cierre de poro y la transmigración [97] .

5. Conclusiones y perspectivas futuras

La permeabilidad endotelial y la TEM de leucocitos implican mecanismos de señalización
intracelular similares, que incluyen la señalización Rho y Rap GTPasa , la unión célula-célula y
laremodelación de la F-actina , y por lo tanto, ha sido difícil separar los dos procesos de forma
mecánica. Sin embargo, una diferencia clave entre ellos es cuándo y dónde ocurren las señales
en EC. Para leucocitos TEM, los receptores se activan localmente en EC debajo y alrededor del
leucocito [94] , mientras que para la permeabilidad endotelial los receptores generalmente se
activan en toda la membrana plasmática de la CE y / o en las uniones célula-célula [4] . Además,
TEM no implica un aumento de la permeabilidad vascular , sino que existen mecanismos para
garantizar una fuga mínima [36] , [97] , [127 ] . Además, los estímulos que conducen a la
permeabilidad vascular generalmente actúan en minutos [23] , mientras que la TEM de leucocitos
durante la inflamación requiere una regulación positiva de los receptores de unión a leucocitos en
los CE [91] .
Aunque varios mecanismos de señalización son similares entre la permeabilidad endotelial y TEM,
también hay señales que difieren, que podrían manipularse para inhibir uno u otro proceso. Por
ejemplo, se han informado diferencias en la fosforilación de la tirosina VE-cadherina entre los dos
procesos [36] , [128] . Las investigaciones futuras deberían identificar cómo estos sitios de
fosforilación median los cambios locales frente a los globales en las uniones de las
CE. Además, RhoG hasta ahora solo está implicado en TEM [108] . Por otro lado, Rap1, RhoA y
Rac1 están involucrados en ambos procesos. Sin embargo, es probable que formen parte de
complejos proteicos diferentes porque los receptores transmembrana implicados en la
permeabilidad y TEM son diferentes. Aunque se han identificado varios GEF para contribuir a la
permeabilidad y al TEM, las investigaciones futuras deberían tener como objetivo identificar qué
objetivos aguas abajo y GAP de Rho y Rap GTPasas son críticos para la permeabilidad vascular
frente al TEM de los leucocitos.
A diferencia de los leucocitos TEM, comparativamente se sabe poco sobre la contribución de la
señalización de la CE al cáncer TEM. Los receptores múltiples en EC se han implicado en la
mediación de TEM de células cancerosas, pero se sabe poco de sus funciones mecánicas más
allá de simplemente facilitar la adhesión [129] . Recientemente, Ephrin-1 se identificó como un
ligando en las CE que estimula la fosforilación de la tirosina de EphA2 en las células cancerosas,
lo que induce la repulsión de las células y conduce a la disminución de TEM de las células de
cáncer de mama [130] . Será interesante determinar cómo otros receptores contribuyen a la
señalización dinámica entre las células cancerosas y los EC.
En conclusión, los cambios en la permeabilidad vascular y la TEM de los leucocitos están
orquestados por una combinación de pequeñas GTPasas , proteínas quinasas y fosfatasas, que
coordinan los cambios a las uniones célula-célula endoteliales con el citoesqueleto de
actina. Dirigirse a estas moléculas de señalización podría usarse para reducir la inflamación y las
enfermedades autoinmunes.