UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA A DISTANCIA

ESCUELA ECBTI

PREINFORME
BIOTECNOLOGIA ALIMENTARIA

Presentado por: CEDIEL TENORIO

No Identificación: 4661417

Tutor Virtual: GIOVANNI RUEDA

Tenga en cuenta que la información que usted utilice para dar respuesta a las preguntas del pre
informe debe ser tomada de fuentes confiables de información.

Es importante ser preciso en las respuestas pero sin sacrificar los contenidos.

Evite copiar –pegar pues la información allí encontrada en la web debe ser un referente para que
cada uno haga un juicio crítico de los contenidos y tome de allí los elementos relevantes.

Recuerde marcar el archivo con su nombre y apellido

El preinforme se presenta individual o máximo en parejas.

A continuación encontrara los cuestionarios y temas a desarrollar para cada pre informe.
Esta información está en su guía de laboratorio; sin embargo se registra en este documento para
asegurar que todas las preguntas y temas sean resueltos por cada estudiante de forma individual o
máximo en parejas.

El pre informe se entrega en digital al correo laura.bernal@unad.edu.co a más tardar un día antes de
la primera sesión de laboratorio.
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Practica 0. Normas Generales de Bioseguridad

1.1 ¿Qué es bioseguridad?

La seguridad biológica o bioseguridad, es la aplicación del conocimiento, de las técnicas

y de los equipos necesarios para prevenir la exposición del personal, del área de
laboratorio y del medio ambiente a agentes potencialmente infecciosos o biopeligrosos.

Agentes Biopeligrosos Son todos aquellos agentes biológicos y materiales que son
potencialmente peligrosos para los seres humanos, los animales y las plantas. Entre
ellos podemos citar: bacterias, virus, hongos, parásitos, productos recombinantes,
alergenos, priones, etc. Riesgo

Microbiológico El Riesgo Microbiológico se encuentra presente cada vez que se realiza

una actividad práctica en el Laboratorio, donde se requiera la manipulación de cultivos
de microorganismos, los cuales pueden alcanzar concentraciones muy elevadas y
pueden llegar a provocar una infección si no son manipulados adecuadamente.

Para que se produzca un accidente por un agente biológico deben estar presente
básicamente 4 elementos: un huésped susceptible, un agente infeccioso, una
concentración suficiente de éste y una ruta de transmisión adecuada; siendo este último
punto el que mejor se puede controlar en el laboratorio.

1.2. ¿Cuáles son las normas básicas de bioseguridad en el laboratorio de microbiología?

• Entrar al laboratorio en forma ordenada, dejar las carteras, libros y otros objetos personales en el
lugar que se les indique para tal fin.
• Llevar puesta la bata de laboratorio en todo momento. La misma debe permanecer completamente
cerrada.
• Limpiar y desinfectar las superficies de trabajo, antes de comenzar y al finalizar la sesión práctica.
• Lavar las manos con agua y jabón antes de realizar las actividades programadas, antes de salir del
laboratorio y siempre después de manejar materiales que se sabe o se sospecha que son
contaminantes.
• Trabajar cerca del mesón, adoptando una buena postura y estando físicamente cómodo.
• Llevar un calzado apropiado, preferiblemente cerrado y de suela antideslizante en las áreas de
laboratorio.
• Evitar llevar en el laboratorio accesorios que podrían ser fuente de contaminación (por ejemplo
joyas).
• Recoger el cabello largo. LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA – NORMAS DE SEGURIDAD EN EL
LABORATORIO
• Evitar desplazamientos innecesarios, movimientos bruscos. Hablar sólo lo indispensable.
• No comer, beber, fumar, almacenar comida, objetos personales o utensilios, aplicarse cosméticos ni
ponerse o quitarse lentes de contacto en ningún área del laboratorio.
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• Conocer el manejo de todos los equipos y reactivos a emplear antes de iniciar las actividades
indicadas en la práctica. Si usted tiene alguna duda, diríjase al profesor.
• Mantener el área de trabajo ordenada, libre de libros, cuadernos u objetos personales, exceptuando
aquellos equipos y materiales necesarios para la realización del trabajo práctico.
• Tener cuidado con el alcohol cuando manipule el mechero. Nunca debe dejar éste desatendido.
• Regresar los reactivos y equipos empleados (microscopio, mechero, etc.), limpios y de manera
ordenada a su respectivo lugar una vez finalizada la actividad. Reporte cualquier daño de los mismos
al profesor.
• Colocar los materiales de vidrio contaminados en los recipientes dispuestos para tal fin, por
ejemplo: las pipetas en los pipeteros, tubos y placas de Petri en las ollas de desecho, etc.
• No usar ningún reactivo que no esté debidamente identificado, verificar las etiquetas de los mismos
y estar seguro de cómo emplearlo.
• No devolver sustancias a sus envases originales.
• Emplear la propipeta al medir líquidos. Está rigurosamente prohibido pipetear con la boca. De igual
manera las pipetas tendrán tapones de algodón para reducir la contaminación de estos dispositivos
de pipeteo.
• Realizar solamente aquellas actividades indicadas por el profesor, no llevar a cabo experimentos no
autorizados.
• Reportar inmediatamente cualquier accidente al profesor (derrame de material contaminado,
heridas, quemaduras, etc.), ninguno puede ser catalogado como menor.
• Reducir al mínimo la formación de aerosoles durante la realización de cualquier trabajo práctico.
LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA – NORMAS DE SEGURIDAD EN EL LABORATORIO
Para desarrollar estas preguntas pueden remitirse al documento adjunto:

https://academia.unad.edu.co/images/laboratorios/Reglamentaci%C3%B3n_Normas_Bioseguridad_L
aboratorios_UNAD.compressed.pdf

Practica 1. Cinética de Crecimiento Microbiano

1.1 Bioprocesos. Concepto, áreas de conocimiento aplicaciones

Un bioproceso es cualquier proceso que usa células vivas completas o sus componentes (por ejemplo
enzimas, cloroplastos, etc.) para obtener los cambios físicos o químicos deseados. El transporte de
materia y energía es fundamental para muchos procesos biológicos y ambientales. Las distintas áreas,
desde la fabricación de alimentos al diseño térmico de edificios y desde dispositivos médicos hasta el
control de la contaminación y el calentamiento global, requieren de conocimientos sobre cómo la
materia y la energía pueden transportarse a través de los materiales.
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Tipos de bioprocesos

Cultivos de superficie

Se usan principalmente cuando los micelios actúan como catalizadores. El micelio crece en bandejas
que contienen una pequeña cantidad de medio de cultivo. A medida que el micelio crece, va
formando una capa compacta. Este método se usó para la producción de ácido cítrico.

Este tipo de cultivo se usa muy poco en la producción a gran escala y se prefiere en su lugar, el cultivo
sumergido.

Cultivos sumergidos

En este tipo de procesos, los microorganismos se suspenden en un medio líquido. El ejemplo más
simple de un cultivo sumergido consiste en un recipiente sin ningún dispositivo de agitación en el cual
los microorganismos se establecen en el fondo y forman una capa compacta. Este es el arreglo clásico
para todos los procesos de producción de etanol. En este caso, puede presentarse movimiento del
líquido debido a las burbujas de dióxido de carbono que se forman y ascienden.

Los siguientes campos de aplicación de los procesos bioquímicos y microbiológicos, poseen

actualmente importancia industrial y económica:

 Producción de proteína unicelular (SCP, por sus siglas en inglés) a partir del metano, fracciones
de aceite mineral, residuos agrícolas, etc.
 Producción de alimentos: levadura para panadería, vinagre y bebidas alcohólicas, entre otros.
 Productos farmacéuticos: antibióticos, vitaminas, esteroides y sustancias químicas orgánicas
como: ácidos, aminoácidos, solventes, polisacáridos y sustancias para crecimiento.
 Recuperación microbiológica de suelos contaminados.
 Producción de energía (hidrógeno, metano, etanol) y de materias primas por lixiviación
microbial de minerales.
 Uso de microorganismos como catalizadores en reacciones orgánicas (biooxidación,
biorreducción, biofosforilación, etc.) y como fuentes de enzimas importantes (detergentes,
industria de alimentos, medicina)
Un importante ejemplo de la aplicación industrial de biocatalizadores, es el tratamiento de aguas
residuales:
En el tratamiento de aguas residuales, los microorganismos son importantes por dos razones.
Primera, uno de los objetivos del tratamiento es la destrucción de todos los organismos microbiales
patógenos que están presentes en el agua. Segunda, la actividad microbial se emplea para oxidar la
materia orgánica presente a metano o dióxido de carbono.
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1.2 Crecimiento microbiano. Concepto y fases de crecimiento

Es definido como un incremento ordenado de todos los constituyentes y estructura celular. En

muchos microorganismos, este incremento continúa hasta que la célula se divide en dos nuevas
células: Fisión binaria

El crecimiento microbiano conlleva usualmente a un incremento en el número de células. Es

importante distinguir entre el crecimiento individual de células y el crecimiento de poblaciones de
células:

Crecimiento individual
Es el incremento en el tamaño y peso y es usualmente un preludio a la división celular

Crecimiento poblacional
Es el incremento en el número de células como una consecuencia del crecimiento y división celular

b) Tasa de crecimiento
Es el cambio del número de células o masa por unidad de tiempo
c) Generación
Intervalo para la formación de dos células provenientes de una.
d) Tiempo de generación
Tiempo que tarda una población en duplicarse. Se puede definir también como la cantidad de tiempo
requerida para completar un ciclo de división.

Fases

Fase de latencia: período de adaptación de un microorganismo a un nuevo medio de cultivo.

Fase exponencial o logarítmica: aumento regular de la población que se duplica a intervalos regulares
de tiempo (G).
Fase estacionaria: cese del crecimiento por agotamiento de nutrientes, por acumulación de productos
tóxicos, etc.
Fase de declinación o muerte: el número de células que mueren es mayor que el número de células
que se dividen.
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Practica 2. Extracción de ADN Bacteriano

2.1 Herramientas analíticas para la extracción de macromoléculas orgánicas (mencionar y explicar

varias herramientas)

ELECTROFORESIS
La electroforesis es un método de separación basado en la movilidad de las biomoléculas en una fase
líquida sometida a un campo eléctrico. Las moléculas que posean carga negativa migrarán hacia el
polo positivo de un aparato electroforético y viceversa. La inclusión de una matriz sólida, además de
la fase líquida, permitió agregar un nuevo punto de separación y versatilidad en la electroforesis
(Smithies, 1955). De esta manera, no solo las biomoléculas pueden ser separadas por su carga, sino
también por su tamaño. La inclusión de una matriz permite algo que invariablemente sorprende a los
estudiantes de biología molecular: recuperar físicamente a la biomolécula que ha sido separada en un
gel, con la ayuda de una navaja y un agente de visualización.

SECUENCIACIÓN

ADN, ARN y Proteínas forman el orden del flujo de la información genética en todas las células y los
tres son polímeros lineares. El objetivo de la secuenciación es conocer exactamente el orden de sus
monómeros. Del orden de los nucleótidos en el ADN y ARN se puede inferir su evolución y su función
(al menos en teoría), lo mismo ocurre con los aminoácidos de las proteínas.

CLONACIÓN

La clonación de ADN fue posible gracias a la acumulación de conocimiento básico sobre las enzimas
de restricción (er). Las ER fueron descubiertas en el estudio de los mecanismos bacterianos de
defensa ante las infecciones virales (Kelly y Smith, 1970). Actualmente, en los catálogos comerciales
hay más de 200 ERs que se producen de forma recombinante (New England Biolabs, 2011a).

Las ERs cortan de forma precisa secciones de ADN y hacen compatibles los extremos de los productos
escindidos con otras moléculas de ADN, como adaptadores, plásmidos, promotores y regiones
codificantes, a los que se unen en una reacción in vitro catalizada por la enzima ligasa. Estas nuevas
construcciones de ADN formadas por moléculas de orígenes genéticos distintos, se denominan
quimeras. Las quimeras a su vez pueden ser escindidas para ligarse a otro fragmento de ADN, en un
proceso llamado subclonación. Mediante programas de cómputo se puede simular la mejor estrategia
para obtener quimeras en el laboratorio (Invitrogen, 2008b). Las quimeras son útiles para comprobar
hipótesis sobre la función génica, así como para la producción en masa de proteínas recombinantes
(Goeddel et al., 1979, Chan et al., 2010).
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DETECCIÓN DE BIOMOLÉCULAS POR HIBRIDACIÓN

Cuando los ácidos nucleicos o las proteínas en solución interactúan con superficies sólidas pueden
llegar a adsorberse en ellas. Las superficies más utilizadas son las membranas de nitrocelulosa y de
nylon. Esta propiedad de interacción no ha sido clarificada del todo pero se plantea la hipótesis de
que reside en interacciones no covalentes como interacciones hidrofóbicas o de cargas parciales entre
las biomoléculas y la superficie (Dubitsky y Perrault, 2012). En el caso de los ácidos nucleicos, estas
interacciones se pueden hacer covalentes con luz ultravioleta. En los catálogos modernos se puede
encontrar una gran variedad de membranas en cuanto a capacidad de adsorción, resistencia, tamaño
y grupos químicos activos, que se pueden adecuar a diferentes aplicaciones (GE, 2011).

REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR)

La PCR es un método que permite la amplificación o copiado masivo in vitro de un fragmento

específico de ADN. La longitud del fragmento copiado está indicada por dos secuencias pequeñas de
ADN (llamadas oligonucleótidos) que son adicionadas a la reacción y que flanquean al fragmento que
se desea amplificar. Estas secuencias pequeñas indican además el sitio desde el cual debe iniciarse la
reacción de amplificación. La reacción es llevada a cabo por la ADN polimerasa.

Dos avances técnicos hicieron popular a la PCR. Uno fue la invención de los termocicladores (Hsieh y
Chen, 2009). Los termocicladores realizan automáticamente los pasos de incremento y decremento
de la temperatura indispensables en la PCR (figura 1A). El otro descubrimiento fue el de las ADN
polimerasas termoestables (Chien et al., 1976). Estas polimerasas toleran las temperaturas a las que
se lleva a cabo una PCR. Hoy en día las variantes de polimerasas termoestables que existen en el
mercado se pueden contar por decenas. Se pueden seleccionar por velocidad de síntesis, fidelidad del
copiado, capacidad de sintetizar moléculas largas, tolerancia a inhibidores de reacción y por
ornamentaciones adicionales que hacen a los productos (ej. adenilación terminal) (New England
Biolabs, 2011b).

Practica 3. Actividad Enzimática e Inmovilización de La Enzima Invertasa

3.1 Unidad de actividad enzimática. Definicion

Se define la unidad de actividad enzimática (U) como la cantidad de enzima que cataliza
la conversión de 1 µmol de sustrato en un minuto. La actividad específica es el número
de unidades de enzima por miligramo de proteína (U/mg prot) o por mililitro de
disolución (U/ml).

Recientemente, el Sistema Internacional de unidades (SI) ha definido la unidad de

actividad enzimática como la cantidad de enzima que transforma 1 mol de sustrato por
segundo. Esta unidad se llama katal (kat). Como 1 mol son 106 µmoles y 1 minuto son 60
segundos, resulta que 1 katal equivale a 60 x 106 U. Esta unidad es muy grande, de
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forma que se utilizan frecuentemente los submúltiplos como el microkatal (µkat, 10-6
kat) o el nanokatal (nkat, 10-9 kat).

Cuando se conoce el peso molecular del enzima puro y el número de centros activos por
molécula de enzima, las medidas de actividad enzimática permiten calcular el número
de recambio del enzima, o sea, el número de reacciones elementales que realiza el
enzima por cada centro activo y por unidad de tiempo.

3.2. Inmovilización de enzimas: Fundamento y aplicaciones

La inmovilización de enzimas es un proceso en el que se confina o localiza a la enzima en una región

definida del espacio, para dar lugar a formas insolubles que retienen su actividad catalítica y que
pueden ser reutilizadas repetidamente (1). Posteriormente esta definición se ha ampliado a aquel
proceso por el cual se restringen, completa o parcialmente, los grados de libertad de movimiento de
enzimas, orgánulos, células, etc. por su unión a un soporte (2).

Como ventajas del empleo de enzimas inmovilizadas podemos destacar (3):

1. El aumento de la estabilidad de la enzima;

2. La posible reutilización del derivado, por lo que disminuyen los costes del proceso.

3. La posibilidad de diseñar un reactor enzimático de fácil manejo y control, adaptado a la aplicación

de la enzima inmovilizada. Los diferentes tipos de reactores enzimáticos aparecen en la Figura 1. Estos
reactores con enzimas inmovilizadas permiten el empleo de cargas elevadas de enzima, la cual
mantendrá su actividad durante más tiempo. Estos sistemas pueden incluir el reciclado, lo que
permite la obtención de productos con mayor pureza. Los principales inconvenientes del proceso de
inmovilización son (4):

1. La alteración de la conformación de la enzima respecto de su estado nativo.

2. La gran heterogeneidad del sistema enzima-soporte donde pueden existir distintas fracciones de
proteínas inmovilizadas con un diferente número de uniones al soporte.
3. Siempre suele haber una pérdida de actividad de la enzima durante la movilización.
4. El biocatalizador es más caro que la enzima nativa.