VETERINARIA Vol. 4 No.

2, Juli 2011

Isolasi Identifikasi serta Uji Kepekaan Bacillus subtilis dari Sedimen Tambak Udang
Terhadap Bahan Antimikrobial

Isolation Identification and Sensitivity Test of Bacillus subtilis from Shrimp Culture Ponds to
Antimicrobial Agents
1
Erni Rosilawati, 2Yenny Candra Christinasari., 1Emy Koestanti
1
Fakultas Kedokteran Hewan Unair
2
PPDH Fakultas Kedokteran Hewan Unair

Kampus C Unair, Jl. Mulyorejo Surabaya-60115.

Telp. 031-5992785, Fax. 031-5993015
Email : ernirosi@yahoo.co.id

Abstract

The aim of this study was to know about the characteristic and the sensitivity of Bacillus subtilis
isolated from shrimp culture ponds to antimicrobial agents. Fifty isolates of Bacillus spp. That fermented
mannitol on MSA media and showed rod shapes, had been identified by macroscopic, microscopic,
biochemical and sugars test. The result showed six isolates were Bacillus subtilis. Antimicrobial agents that
had been used for sensitivity test were Penicillin, Ampicillin, Oxytetracycline, Gentamicin, Ciprofloxacin,
and Sulfamethoxazole by in vitro using Kirby- Bauer method. Disc of these antimicrobial agents were placed
on the cultures of Bacillus subtilis at the surface of MHA media, incubated at 37oC for 24 hours. Diameter of
inhibitor area around the disc was measured on mm to identify the isolates resistant or sensitive. The
sensitivity test result that Bacillus subtilis sensitive to all of the antimicrobial agents with range of diameter
inhibition was 16 until 38 mm. It means that Bacillus subtilis didn’t have gen resistant and couldn’t transfer it
to pathogen bacteria in shrimp culture so that it was very safe for use as a probiotic. It was suggested to do
another identification test to make sure about Bacillus subtilis and do in vivo study to know the isolates safe
to be used as a probiotic or not

Keywords : Bacillus subtilis, sensitivity test, antimicrobial agents

Pendahuluan untuk pengobatan (Balakrishnan et al., 2002;

Udang merupakan salah satu komoditi
primadona yang penting dari sektor perikanan. Hal
ini berkaitan dengan perannya dalam menunjang
persediaan pangan nasional, penciptaan pen-
dapatan dan lapangan kerja serta meningkatkan
devisa negara. Permintaan pasar di luar negeri
yang cenderung meningkat serta sumberdaya yang
cukup tersedia di Indonesia memberikan peluang
yang sangat besar untuk dapat dikembangkan
budidayanya (Irianto, 2007).
Usaha pengembangan budidaya tambak
udang, baik pada usaha pembesaran maupun
perbenihan sering mengalami kerugian ekonomi
karena adanya serangan berbagai penyakit seperti
Salmonellosis, Aeromonas, Vibriosis. Berbagai
bahan antimikrobial misalnya Penisilin, Ampisilin,
Oksitetrasiklin, Gentamisin, Ciprofloxasin dan
Sulfamethoxazol biasa digunakan di tambak udang
Jayasree et al., 2006; Temmerman et al., 2002),
namun pemakaian bahan antimikrobial ini banyak
menimbulkan kerugian, antara lain resistensi obat
oleh mikrooganisme yang diperoleh melalui
adaptasi maupun pertukaran genetik (Moriarty,
1997). Oleh karena itu alternatif lain sebagai bahan
pengganti bahan antimikrobial dalam mengen-
dalikan bakteri patogen adalah dengan meng-
gunakan probiotik (Balcazar et al., 2006; Nomoto,
2005; Verschure et al., 2000).
Salah satu bakteri dari genus Bacillus yang
dianggap sebagai kandidat probiotik yang
menjanjikan adalah Bacillus subtilis (Moriarty et
al., 2005; Balcazar dan Rojas-Luna, 2007). Habitat
utama Bacillus subtilis ini adalah tanah (Strahl et
al., 2002). Selain di tanah, Bacillus subtilis juga
dapat ditemukan pada sedimen akuatik bersama-
sama dengan berbagai macam bakteri genus

115
Erni Rosilawati dkk. Isolasi Identifikasi serta Uji kepekaan ...
Bacillus lainnya (Moriarty et al., 2005; Awais et
al., 2007). Bacillus subtilis dapat dibedakan
dengan spesies dari genus Bacillus lainnya antara
lain dengan melakukan pengamatan karakteristik
bakteri ini secara makroskopis, mikroskopis, uji
biokimia dan uji gula-gula.
Bacillus subtilis merupakan salah satu
bakteri yang dapat digunakan sebagai kandidat
probiotik, karena bakteri ini tidak patogen,
memiliki daya bunuh untuk menghambat per-
tumbuhan bakteri patogen dan dapat membantu
dalam penyeimbangan mikroba pada saluran pen-
cernaan hewan-hewan air, termasuk udang
(Balcazar et al., 2006). Hal ini sesuai dengan salah
satu syarat bakteri probiotik yaitu harus mem-
punyai efek yang menguntungkan bagi inang yang
mengkonsumsinya (Fuller, 1987; FAO, 2001).
Beberapa uji dilakukan untuk mendapatkan
bakteri sebagai kandidat probiotik, salah satunya
adalah uji kepekaan bakteri terhadap antibiotika
dan kemoterapeutika.
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui
karakteristik Bacillus subtilis yang diisolasi dari
sedimen tambak udang secara makroskopis,
mikroskopis, uji biokimia dan uji gula-gula, serta
kepekannya terhadap Penisilin, Ampicillin, Oksi-
tetrasiklin, Gentamisin, Ciprofloxasin dan Sulfa-
methoxazol.
Materi dan Metode Penelitian
Tempat dan waktu penelitian
Penelitian ini dilaksanakan di Laboratorium
Bakteriologi dan Mikologi Fakultas Kedokteran
Hewan Universitas Airlangga Surabaya dan ber-
langsung pada bulan Februari sampai Juni 2011.
Teknik pengambilan sampel
Sampel penelitian yang digunakan dalam
penelitian ini berupa sedimen tambak udang
diambil dari sedimen tambak udang Kecamatan
Bungah Kabupaten Gresik. Pengambilan sampel
dilakukan pada dua lokasi tambak udang yang
berbeda dalam satu pemilik sebanyak empat
sampel masing-masing tambak diambil dua
sampel. Pengambilan dilakukan dengan cara
mengambil sebanyak + 5 gram sedimen pada
bagian dasar tambak, kemudian dimasukkan ke
dalam botol sampel yang sudah disterilkan dan
dibawa ke Laboratorium Bakteriologi dan
Mikologi Fakultas Kedokteran Hewan Universitas
Airlangga Surabaya.
Isolasi dan identifikasi Bacillus subtilis
Sampel dipanaskan pada suhu 80oC selama 20
menit. Masing-masing sampel sebanyak 0,5 g di-
116
larutkan 4,5 ml aquadest steril kemudian diencer-
kan hingga pengenceran 10 -6. Masing-masing
pengenceran ditanam pada media MSA, kemudian
diinkubasi pada suhu 37 oC selama 24-48 jam
(Aslim et al., 2000; Purivirojkul et al., 2005).
Setelah dua hari dilihat pertumbuhannya dan
koloni yang memfermentasi mannitol ditunjukkan
dengan berubahnya media MSA menjadi kuning.
Kemudian dilakukan identifikasi secara mikros-
kopis dengan melakukan pewarnaan Gram pada
bakteri yang memfermentasi mannitol. Bakteri
yang berbentuk batang, Gram positif dan tidak
berantai (Logan et al., 1984); Hong et al., 2004)
kemudian dites untuk reaksi katalase positif
(Berber and Yenidunya, 2004) dan diperbanyak
dengan isolasi sekunder pada agar miring untuk
selanjutnya dilakukan uji biokimia dan gula-gula
yang meliputi uji Sulfide Indol Motility (SIM), uji
Voges-Proskauer (VP), uji Simmon Citrate (SCA),
uji urease, uji starch, uji glukosa dan sukrosa.
Uji Kepekaan Bahan Antimikrobial
Isolat bakteri yang telah teridentifikasi,
diambil sedikit koloninya dengan ose jarum,
kemudian ditanam dalam Mueller Hinton Broth
(MHB) dan diinkubasi selama 24 jam pada suhu
370 C. Setelah diinkubasi, kemudian dilihat per-
tumbuhan bakteri dan membandingkan kekeruhan
yang terjadi dengan standar Mc Farland 0,5 dengan
jumlah bakteri 1,5 x 108/ml (Bailey dan Scott,
2002).
Suspensi kuman yang telah disiapkan
diambil dengan cotton bud dan distreak secara
merata pada media Mueller Hinton Agar. Biarkan
selama 5 menit agar bakteri menempel pada
permukaan media. Disk yang mengandung
penicillin 10 IU, ampicillin 10 µg, oxytetracycline
30 µg, gentamicin 10 µg, ciprofloxacin 5 µg, dan
sulfamethoxazol 25 µg diletakkan diatas per-
mukaan media MHA dengan pinset steril, diatur
jaraknya dan sedikit ditekan agar disk benar-benar
menempel. Kemudian inkubasi pada suhu 370 C
selama 24 jam. Daerah hambatan pertumbuhan
bakteri disekeliling disk diukur diameternya
(Ivanova et al., 1999; Balakrishnan et al., 2003).
Hasil dan Pembahasan
Setelah melakukan isolasi empat sampel
sedimen tambak udang yang diperoleh dari tambak
udang kecamatan Bungah Kabupaten Gresik,
didapatkan 50 koloni bakteri yang positif mem-
fermentasi mannitol pada media MSA dan ber-
bentuk batang pada pemeriksaan mikroskopis.
VETERINARIA Vol. 4 No. 2, Juli 2011

Tabel 1. Hasil Pengamatan Bacillus subtilis yang Diisolasi dari Sedimen Tambak Udang secara
Makroskopis, Mikroskopis, Uji Biokimia dan Uji Gula-Gula.

No Jenis Pengamatan Hasil

1. Makroskopis Perubahan Warna media berubah dari merah menjadi
warna media MSA kuning
Bentuk koloni Bulat tidak beraturan
Warna koloni Putih
Permukaan koloni Kasar, berkeriput
Tepi koloni Tidak rata
2. Mikroskopis Pewarnaan Gram Gram +
Bentuk Sel Batang
Rantai Pendek / Tidak berantai
3. Uji Biokimia Katalase +
Sulfid -
Indol -
Motility +
VP +
Sitrat +
Urease -
Starch +
4. Uji Glukose +
Gula-Gula Sukrose +

Tabel 2. Diameter Zona Hambat Bacillus subtilis dari Sedimen Tambak Udang terhadap Bahan
Antimikrobial

Bahan Antimikrobial Disk

Penisilin Ampi- Oksitetras Gentamisi Ciproflo Sulfame
No Koloni
10 µg silin iklin 30µg n 10 µg xasin 5µg thoxazol
10 µg 25µg
1 TU 4 25( S**) 24 (S**) 31 (S***) 22 (S**) 31 (S***) 31 (S***)
2 TU 21 32 (S***) 32 (S***) 16 (S**) 23 (S**) 38 (S***) 34 (S***)
3 TU 28 23 (S**) 31 (S***) 17 (S**) 22 (S**) 34 (S***) 33 (S***)
4 TU 34 31 (S***) 29 (S***) 26 (S***) 24 (S**) 33 (S***) 30 (S***)
5 TU 43 31 (S***) 33 (S***) 19 (S**) 21 (S**) 30 (S***) 31 (S***)
6 TU 48 29 (S***) 28 (S***) 17 (S**) 23 (S**) 31 (S***) 31 (S***)

Keterangan : Diameter zona hambatan dinyatakan dalam satuan millimeter (mm)

Standart zona hambatan berdasarkan “Antibiotic Sensitivity Pattern of Bacillus spesies”
(Adewumi et al., 2009)
0-5 mm = Resistant (R)
6-15 mm = Sensitive (S*)
16-25 mm = Sensitive (S**)
26-35 mm = Sensitive (S***)

Hasil identifikasi selanjutnya dengan cara
makroskopik, mikroskopik, uji biokimia dan gula-
gula menunjukkan bahwa koloni bakteri yang
positif Bacillus subtilis berjumlah 6 dari 50 koloni
bakteri yang dicurigai atau sekitar 12%, dengan
karakteristik Bacillus subtilis sebagai berikut:
koloni berbentuk bulat tidak beraturan dengan
permukaan keriput, kasar, tidak mengkilat,
berwarna putih dan tepi tidak rata (Earl et al.,
2008; Ryan and Ray, 2004). Pada pemeriksaan
mikroskopis menunjukkan kuman berbentuk
batang dengan rantai pendek atau tidak berantai,
tersusun sendiri-sendiri atau berpasangan, dan
bersifat Gram positif (Hong et al., 2004; Harwood
et al, 2001), sedangkan untuk uji biokimia meliputi
uji katalase, SIM, VP, urease, sitrat dan starch,
menunjukkan Bacillus subtilis bersifat mempro-
duksi enzim katalase, yang ditandai dengan

117
Erni Rosilawati dkk. Isolasi Identifikasi serta Uji kepekaan ...

Tabel 3. Hasil Uji Kepekaan (%) Bacillus subtilis terhadap Bahan Antimikrobial
Bahan Antimikrobial
Kategori Penisilin Ampisilin Oksitetras Gentamisi Ciproflo Sulfame
iklin n xasin thoxazol
Sensitive (S) 100% 100% 100% 100% 100% 100%
Resistant (R) 0% 0% 0% 0% 0% 0%

Gambar 1. Hasil Pengamatan Uji Kepekaan Bacillus subtilis terhadap Bahan Antimikrobial

Keterangan :
BD = Blank Disk (Disk kosong)
P = Penisilin
A = Ampisilin
O = Oksitetrasiklin
G = Gentamisin
C = Ciprofloxasin
S = Sulfamethoxazol

timbulnya gelembung gas dengan penambahan
H2O2 3%. Indol positif, H2S negatif, serta motilitas
positif pada media SIM, ditandai dengan tidak
adanya cincin merah, tidak adanya warna hitam
pada bagian dasar media, tetapi bakteri bersifat
motil dengan adanya pertumbuhan yang menyebar
disekitar tempat tusukan. Tidak adanya perubahan
pada media urea menunjukkan Bacillus subtilis
bersifat tidak memproduksi enzim urease ((Fox,
2000; Cappucino and Sherman, 2005), sedangkan
untuk Hasil uji VP, sitrat dan starch, ketiganya
positif, yang ditandai dengan adanya warna merah
coklat pada media VP, warna biru tua pada media
SCA, dan zona bening disekitar pertumbuhan
kuman. (Cappucino and Sherman, 2005; Logan
and Berkeley, 1984).
Identifikasi Bacillus subtilis dengan uji gula-gula,
meliputi glukose dan sukrose, keduanya me-
nunjukkan fermentasi positif, yaitu ditandai
dengan perubahan media dari merah menjadi
kuning. Untuk lebih jelasnya, karakteristik
Bacillus subtilis dari sedimen tambak udang
secara makroskopik, mikroskopik, uji biokimia
dan uji gula-gula dapat dilihat pada Tabel 1.
Berdasarkan pemeriksaan makroskopis dan
mikroskopis serta hasil uji biokimia dan gula-gula,
enam bakteri yang diisolasi dari sedimen tambak
udang positif teridentifikasi sebagai Bacillus
subtilis, walaupun demikian, untuk mengklari
fikasi dan memastikan kebenaran spesies tersebut,
metode identifikasi yang lebih modern disarankan
untuk penelitian lebih lanjut, misalnya PCR
seperti yang dikemukakan oleh Sreekumar dan
Krishnan, (2010).
Terhadap enam isolat Bacillus subtilis yang
telah teridentifikasi tersebut diatas, dilakukan uji
kepekaan kuman terhadap antibiotika dan
kemoterapeutika, yang hasilnya dapat dilihat pada
tabel 2, tabel 3, dan gambar 1.
Hasil uji kepekaan enam isolat Bacillus
subtilis terhadap enam bahan antimikrobial setelah
dibandingkan dengan standart Antibiotic Sensiti-

118
VETERINARIA
vity Pattern of Bacillus spesies menurut Adewumi
et al. (2009) pada tabel 2, gambar 1 menunjukkan
besarnya diameter zona hambatan yang terbentuk
bervariasi mulai 16 mm – 38 mm (sensitive** dan
sensitive ***). Dari enam macam antibiotika,
Ciprofloxasin dan Sulfamethoxazol 100% me-
nunjukkan diameter terbesar, yaitu 30 mm – 38
mm (sensitive ***) Perbedaan hasil uji kepekaan
ini dapat disebabkan karena adanya perbedaan
mekanisme kerja masing-masing bahan anti-
mikrobial terhadap Bacillus subtilis.
Tabel 3 menunjukkan bahwa Bacillus
subtilis 100% sensitif terhadap keenam bahan
antimikrobial, dengan kata lain tidak ada satupun
isolat B.subtilis yang menunjukkan sifat resisten.
Hal ini menyatakan belum terjadi transfer gen
resisten antar bakteri dalam tambak udang.
Menurut penelitian yang dilakukan oleh
Sreekumar and Krishnan (2010), pada rentang
diameter zona hambatan yang besar (18 – 34 mm),
Bacillus subtilis sangat aman digunakan sebagai
probiotik karena bakteri ini tidak memiliki gen
resisten yang akan ditularkan ke bakteri patogen.
Meskipun Bacillus subtilis telah dilaporkan
mampu untuk mentransfer materi genetiknya
kepada spesies Bacillus yang lain maupun spesies
Listeria pada kondisi laboratorium (Earl et al.,
2008), dengan range sensitifitas seluas ini Bacillus
subtilis masih akan jadi probiotik yang aman. Oleh
karena itu untuk menunjang atau membuktikan
pernyataan ini perlu dilakukan penelitian lanjut
secara in vivo untuk mengetahui apakah Bacillus
subtilis tersebut aman digunakan sebagai
probiotik.
Kesimpulan
Berdasarkan hasil penelitian, dapat disim-
pulkan bahwa keempat sampel sedimen tambak
udang menunjukkan positif adanya bakteri
Bacillus subtilis berdasarkan hasil pengamatan
secara makroskopis, mikroskopis, uji biokimia dan
uji gula-gula. Dari enam isolat Bacillus subtilis
yang didapat dari sedimen tambak udang
semuanya sensitif terhadap Penisilin, Ampisilin,
Oksitetrasiklin, Gentamisin, Ciprofloxasin, dan
Sulfamethoxazol.
Daftar Pustaka
Adewumi, G.A., R.A. Quadri, and F.A.
Oguntoyinbo. 2009. Antibiotic Sensitivity
Pattern of Bacillus Species Isolated from
Solid Substrate Fermentation of Cassava
for Gari Production. African Journal of
Microbiology Research 3 : 11.
Vol. 4 No. 2, Juli 2011
Aslim, B., N.Saglam, and Y.Beyatli. 2000.
Determination of Some Properties of
Bacillus Isolated from Soil. Turkish
Journal of Biology. 41-48.
Awais, M., A.A.Shah, A.Hameed, and F.Hasan.
2007. Isolation, Identification and Optimi-
zation of Bacitracin Produced by Bacillus
spp. Department of Microbiology Faculty
of Biological Sciences, Quaid-i-Azam
University, Islamabad, Pakistan. Pak. J.
Bot., 39(4): 1303-1312.
Bailey and Scott. 2002. Diagnostic Microbiology.
11th edition. The C.V.Mosby Company.
St.Louis. United States of America. 232-
240.
Balakrishnan, S., K.R.John, and M.R.George.
2002. Antibiotic Susceptibility of Bacillus
spp. Isolated from Shrimp (Penaeus
Monodon) Culture Ponds. Department of
Aquaculture, Fisheries College and
Research Institude, Tamil Veterinary,
India. Indian Journal of Marine Sciences.
32(1). 81-84.
Balcazar, J.L., I.D.Blas, I.R.Zarzuela, D. Cunning-
ham, D.Vendrell, and J.L.Muzquiz. 2006.
The Role of Probiotics in Aquaculture.
Veterinary Microbiology. 144: 173-186.
Balcazar, J.L. and T. Rojas-Luna. 2007. Inhibitory
Activity pf Probiotic Bacillus subtilis
UTM 126 Against Vibrio Species Confers
Protection Against Vibriosis in Juvenile
Shrimp (Litopenaeus vannamei). Curr.
Microbiol. 55: 409-412.
Berber, I. and E. Yenidunya. 2004. Identification
of Alkaphilic Bacillus Species Isolated
from Lake Van Its Surroundings by
Computerized Analysis of Extra Cellular
Protein Profiles. Turk J. Biol. 29: 181-
188.
Cappucino, J.G. and N.Sherman. 2005. Microbio-
logy: A Laboratory Manual. 7th edition.
Pearson Education Inc. USA.pp. 101-102,
117, 164, 166, 189, 204, 409-410, 415-
416, 509, 511-512.
Earl, A., R.Losick and R.Kolter. 2008. Ecology
and Genomics of Bacillus subtilis.
Department of Microbiology and Mole-
cular Genetics, Havard Medical School,
Boston, USA; Department of Molecular
and Cellular Biology, Harvard University,
Cambridge, USA. 16(6).
Food and Agriculture Organization of the United
Nations (FAO). 2001. Health and
Nutritional Properties of Probiotics in
Food including Powder Milk with Live
119
Erni Rosilawati dkk. Isolasi Identifikasi serta Uji kepekaan ...
Lactic acid Bacteria.axonomy of the
Genus Bacillus and Related Genera, The
Aerobic Endospore Forming Bacteria.
Germany. The American Phytopathology
Society. 94(11) : 1245-1248.
Fuller, R. 1987. A review, Probiotics in Man and
Animals. J. Applied Bacteriology 66:
365-378.
Fox, M.T. 2000. Identification of Gram Positive
Bacteria. //http:web.indstole.edu/theme/
micro/pos.lab.html
Harwood, C.R., S.G.Crawshaw and A.Wipat.
2001. From Genome to Function: Syste-
matic Analysis of The Soil Bacterium
Bacillus subtilis. University of Newcastle.
2:22-24.
Hong, H.A., L.H.Duc and S.M.Cutting. 2004. The
Use of Bacterial Spore Formers as
Probiotics. School of Biological Sciences,
Royal Holloway University of London,
Egham, Surrey TW20 OEX, UK. 813-
835.
Irianto, A. 2007. Potensi Mikroorga-nisme: Di
Atas Langit Ada Langit. http://www.
unsoed.ac.id
Ivanova, E., M.V.Vysotskii, V.I.Svetashev, O.I.
Nedashkovskaya. N.M. Gorshkova, V.V.
Mikhailov, N.Yumoto, Y.Shigeri, T.
Taguchi and S.Yoshikawa. 1999. Charac-
terization of Bacillus strains of marine
origin. J. Intern. Microb. 2: 267-271.
Jayasree, L., I.Janakiram, and R.Madhavi. 2006.
Characterization of Vibrio spp. Asso-
ciated with Diseased Shrimp from Culture
Ponds of Andhra Pradesh (India). Journal
of The World Aquaculture Society.37(4):
523-532.
Logan, N.A. and R.C.W.Berkeley. 1984. Iden-
tification of Bacillus Strains Using API
System. Department of Micro-biology.
The Medical School, University of
Bristol. J. General Microbiology. 130:
1871-1882.
120
Moriarty, D. 1997. The Role of microorganisms in
aquaculture ponds. Aquaculture 151:333-
349.
Nomoto, K. 2005. Prevention of Infection by
Probiotics. Yakult Central Institute for
Microbiological Research, Kunitachi-shi
Tokyo Japan. Journal of Bioscience and
Bioengineering. 100(6): 583-592.
Purivirojkul, W., M.Maketon and N.Areechon.
2005. Probiotic Properties of Bacillus
pumilus, Bacillus sphaericus and Bacillus
subtilis in Black Tiger Shrimp (Penaeus
monodon Fabricius) Culture. Department
of Zoology, Thailand.
Ryan, K.J., and Ray C.G. 2004. Sherris Medical
Microbiology Bacillus. Forth Edition.
McGraw Hill.
Sreekumar, G., and S.Krishnan. 2010. Isolation
and Characteristic of Probiotic Bacillus
subtilis SK09 from Dairy Effluent.
Journal of Science and Technology. 3(8).
Strahl, E.D., W.E.Dobson and L.L.Lundie. 2002.
Isolation and Screening of Brittle Star
Associated Bacteria of Antibacterial
Activity. Current Microbiology. 44: 450-
459.
Temmerman R., B.Pot, G.Huys and J. Swings.
2002. Identification and Antibiotic Sus-
ceptibility of Bacterial Isolates from
Probiotic Products. Laboratorium voor
Microbiology, University Gent, K.L.
Ledeganckstr, Ghent, Belgium. Inter-
national J. Food Microbiology 81: 1-10.
Verschuere., L.Rombaut, P.Sorgeloos and W.
Verstraete. 2000. Probiotic bacteria as
biological control agents in aquaculture.
Microbiology and Molecular Biology
Review 64: 655-671.