Recorrido: Espectrofotometría

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2 Fundamento de la espectrofotometría
El término Espectrofotometría hace referencia a
una serie de técnicas analíticas que se
fundamentan en la espectroscopía atómica y
molecular. Dichas técnicas permiten obtener
información a partir del análisis de las distintas
interacciones de las radiaciones
electromagnéticas con la materia.
En la química analítica, una manera práctica y
precisa de conocer la concentración de una
solución consiste en medir el efecto que dicha
concentración tiene sobre la intensidad de un
haz de luz luminoso que incide sobre ella.
Para comprender qué ocurre en el seno de una
solución cuando un haz de luz la atraviesa,
consideremos una cubeta de material
transparente y no absorbente que contiene la
solución con el analito cuya concentración se
desea conocer. Si se ilumina la solución con luz
monocromática (luz de una sola longitud de
onda) parte de la intensidad de esa luz (Io) será
absorbida por las moléculas que están en dicha
solución (Ia), parte se reflejará (Ir) y parte será
transmitida (It). Podemos representarlo
esquemáticamente como se muestra en la
siguiente figura:

 Luz que incide sobre un tubo conteniendo una solución

coloreada

Para que se cumpla el principio de conservación

de la energía, la suma de éstas tres últimas
intensidades será igual a Io:

Si la incidencia del haz de luz es normal a la

pared del tubo que contiene la solución, la luz
reflejada será despreciable y la ecuación se
reduce a:
Si se divide esta expresión por Io, y se llama
absorción (S) a la relación Ia / Io y transmitancia
(T) a la relación It / Io, se obtiene la expresión:

Esta es la expresión matemática de la ley de

Grotthus - Draper.
Ahora bien, ¿cómo resultará la intensidad
transmitida con respecto a la incidente si
aumenta o disminuye la intensidad de la fuente?
¿Y si se aumenta o disminuye el espesor de la
cubeta que contiene a la solución?
La expresión matemática que involucra a estos
parámetros es la siguiente:.

Lo que significa que la variación (disminución) de

la intensidad es directamente proporcional al
espesor del material interpuesto (l) y a una 
constante k propia de cada material, llamada
coeficiente de absorción.
Si procedemos a integrar la ecuación anterior
entre ciertos límites se obtiene:        

Resolviendo:.

.Despejando It: .

Esta fórmula es una expresión matemática de

la ley de Lambert y expresa que la intensidad de
la luz monocromática transmitida decrece en
forma geométrica cuando el espesor del medio
absorbente crece en forma aritmética.
¿Qué ocurre si manteniéndose constante la
intensidad incidente y el espesor, se aumenta o
disminuye la concentración de la solución

atravesada por la luz?
Un desarrollo matemático análogo, sustituyendo
a dl por dc (variación de la concentración), lleva
a la siguiente expresión matemática:

De modo que la intensidad de luz

monocromática transmitida por la solución de
una sustancia determinada decrece en forma
geométrica cuando su concentración aumenta
en forma aritmética.
Si se repite la experiencia variando a la vez el
espesor y la concentración de la solución,
cambiando además la base e a base decimal,
obteniéndose la siguiente expresión:

Esta expresión se conoce con el nombre de Ley

de Lambert - Beer, donde a es una constante
denominada absortividad. Esta ley se cumple
trabajando a bajas concentraciones y en
presencia de luz monocromática (Ver Anexo:
Espectrofotoemtría).
Reordenando y reemplazando obtenemos una
relación entre transmitancia (T) y concentración

(c):
Según esta ecuación no existe una relación
lineal entre transmitancia y concentración, sino
que la transmitancia decae en forma
exponencial con la concentración. La misma
relación se mantiene para T% (que es la T
expresada en porcentaje) y concentración según
se muestra a continuación
..

T% en función de la concentración

..

La absortividad (a) es una constante propia de
cada sustancia que depende de la longitud de
onda, la temperatura y el solvente con que se
trabaje. Para comprender mejor su significado,
apliquemos logaritmo y reordenemos la
expresión de la Ley de Lambert-Beer:

A partir de esta ecuación surge un nuevo

parámetro: la absorbancia (Abs) que es –
logaritmo T (o bien,- log It /I0 ). Entonces,
reordenando y reemplazando obtenemos:

Reordenando la ecuación anterior la

absortividad (a) se puede definir como la
absorbancia (Abs) que presenta una solución de
concentración unitaria de una sustancia,
observada bajo un espesor unitario.

El valor numérico de a depende de las unidades

de concentración empleadas. Si c se expresa en
g/mL, se obtiene la absortividad
-1 específica (ao) y
[ a ] = mL . (gr . cm) . Si c se expresa en moles
por litro, se obtiene absortividad molar o
coeficiente de extinción
-1 molar, y sus unidades
serán L . (mol . cm) . Nótese además que Abs
es una magnitud adimensional.
Finalmente, reordenando las ecuaciones
anteriores se obtienen:

Por lo tanto, si se representa gráficamente Abs

= f ( c ) el gráfico teórico obtenido mostrará una
relación lineal entre las dos variables, siempre
que se trabaje con luz monocromática y a bajas
concentraciones. Sin embargo, en la práctica
esta relación se cumple para algunas sustancias
pero para otras no. Si se trabaja con una
sustancia determinada y al medir la absorbancia
de distintas concentraciones de dicha sustancia
se obtiene una representación lineal entre las
absorbancias y las correspondientes
concentraciones, entonces esa sustancia 
cumple la Ley de Lambert-Beer en el rango de
concentraciones usadas.
Es importante recalcar que la variable física
“real” es la transmitancia y no la absorbancia. El
instrumento de medida, que es el
espectrofotómetro, determina transmitancia a
partir de la medida de intensidad transmitida
comparándola con la intensidad incidente. El
parámetro absorbancia es creado a partir de
una relación matemática para simplificar el
tratamiento. Como vimos la absorbancia, a
diferencia de la transmitancia, presentará una
relación directamente proporcional con la
concentración de una sustancia que cumpla con
la Ley de Lambert-Beer.
Valores límites de absorbancia y
transmitancia
Analizando las ecuaciones anteriores podemos
establecer los límites de estos parámetros:

El espectrofotómetro posee dos tipos de tipos


de escalas: la escala de transmitancia %, que
es lineal y abarca de 0 a 100% y la escala de
absorbancia que es logarítmica y abarca de 0
a ∞. Si bien en los espectrofotómetros
analógicos éstas se pueden visualizar, en
nuestros instrumentos de medida como el
display es digital, muestra directamente el valor
de T% o de Abs, según se seleccione.

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