INFORME LABORATORIO N° 6

Introducción

Mediante la practica de laboratorio el alumno pretende adquirir los fundamentos

para el análisis químico (reactividad y comportamiento) de aminoácidos,
polipéptidos y proteínas.

Establecer la reactividad de algunas proteínas a través de pruebas de análisis

cualitativo, identificando así mismo características químicas particulares.

Le permitió analizar el comportamiento químico de aminoácidos, polipéptidos y

proteínas a través de reacciones químicas y procesos especificos.

Y finalmente se adquiere una destreza en el manejo de instrumental de

laboratorio asociado a procedimientos relacionados con la química orgánica, el
manejo de los reactivos y la bioseguridad dentro del laboratorio.

En esta práctica se trabajó con proteínas de origen natural como son las
provenientes de la clara de huevo, leche, gelatina sin sabor ni colorante, soya.

En la metodología se aplicaron los ensayos de:

Biuret, Millón, de Hopkin’s – Cole, de Sakaguchi, Ensayo para detectar

azufre, Titulación de Sorensen y Reacción Xantoprotéica.

El termino proteína fue utilizado por primera vez por el químico alemán Gerardus
Mulder, en 1838, tomo este nombre del vocablo griego PROTERIOS, que significa
primordial nivel primario. Las proteínas son un grupo de biopolímeros
constituidos de aminoácidos que exhiben una amplia gama de estructuras y
funciones. Las proteínas como un grupo de biomoléculas, desempeñan una gran
variedad de funciones, algunas participan en la contracción muscular y sirven
para dar soporte estructural, otras trasportan y almacenan moléculas pequeñas.
Los anticuerpos (moléculas que sirven para protección inmunológica) son
proteínas al igual que las enzimas (catalizadores biológicos) y algunas
hormonas. Las proteínas pueden llevar a cabo funciones tan diversas por la
enorme posibilidad de combinaciones en la composición y secuencia de
aminoácidos. Las proteínas también se clasifican según su composición, las que
se forman solo de residuos de aminoácidos y no tienen otras biomoléculas son
PROTEÍNAS SIMPLES; no todas las proteínas son solubles en agua, de hecho las
proteínas insolubles son esenciales para dar soporte y mantener la integridad
estructural de las células y organismos

Ensayo de BIURET. En esta práctica nos dio un resultado de la reacción de

BIURET sobre una muestra tonalidad color azul claro, posteriormente se dejó
unos minutos más y no presentó cambios.
El Reactivo de Biuret es aquel que detecta la presencia de proteínas, péptidos
cortos y otros compuestos con dos o más enlaces peptídicos en sustancias de
composición desconocida. Para el caso que nos ocupó en el laboratorio aquí
interviene el (Cu) cobre que es el determinador del color.

El reactivo, de color azul, cambia a violeta en presencia de proteínas, y vira a

rosa cuando se combina con polipéptidos de cadena corta. El hidróxido de
potasio no participa en la reacción, pero proporciona el medio alcalino necesario
para que tenga lugar.

GLICINA: La glicina es uno de los aminoácidos que forman las proteínas de los
seres vivos. Es el aminoácido más pequeño y el único no quiral de los 20
aminoácidos presentes en la célula. Su fórmula química es NH2CH2COOH y su
masa es 75,07. La glicina es un aminoácido no esencial.

La glicina es un aminoácido, por tanto la prueba da como resultado positiva, al

entrar en contacto con la ninhidrina el grupo aldehído será liberado (resaltado
en color azul) y se generara un tinte intenso color purpura.

Reacción Xantoproteica. Esta reacción se usa para detectar la presencia de

proteínas solubles en una solución. Se realiza mediante el uso de HNO3
concentrado que, en presencia de proteínas o aminoácidos con restos aromáticos
como la fenialanina se torna la solución de un color amarillo oscuro. Los anillos
fenilo que contengan un grupo activante pueden ser nitrados produciendo un
compuesto Amarillo. La producción de un producto coloreado Amarillo al añadir
ácido nítrico es una prueba para la presencia de tirosina o triptófano en una
proteína. La adición de base fuerte hace que el color se torne más oscuro hacia
anaranjado. Las manchas amarillas en la piel causadas por ácido nítrico son el
resultado de la reacción xantoproteica. La reacción xantoproteica se puede
considerar como una sustitución electrofìlica aromática de los residuos de
tirosina de las proteínas por el ácido nítrico dando un compuesto coloreado
amarillo a pH acido.

NOTA: en esta práctica en el laboratorio de la UNAD, no presento precipitado ni

coloración, quiere decir que no tiene un grupo aromático.

Ensayo de Millón. Es una mezcla de nitrato y nitrito mercúrico disueltos en

ácido nítrico concentrado. La prueba dio resultado (color rojo) debido a la
formación de nitro tirosina, que por adición de mercurio y por calentamiento.
El compuesto del millón reacciona con el aminoácido y se formó sal mercúrica
roja.

Hopkin’s – Cole. Prueba estándar para el triptófano y para las proteínas que
contienen este aminoácido, recordemos que el triptófano está contenido en
algunos alimentos como los chocolates los cuales causan la sensación de la
felicidad en el ser humano, se haya en el laboratorio con ácido glioxilico pero
también se puede reemplazar con ácido acético, cuando da color violeta estamos
hablando un resultado positivo quiere decir que hay triptófano, para este ensayo
el ácido sulfúrico actúa como catalizador y no interviene en la reacción. Esta
prueba no se realizó en la práctica laboratorio UNAD.

Sakaguchi. Es una prueba para detectar en compuestos que contengan el grupo

guanidinio como la arginina, el reactivo que se utiliza contiene a-naftol e
hipoclorito sódico en medio alcalino, la aparición de la coloración roja es
indicativo de una reacción positiva para el aminoácido que tiene grupo guanidinio
de la arginina. La muestra presento coloración (roja)

Ensayo para detectar azufre. Adicionamos 2ml de hidróxido de sodio al 10%

luego añadimos 1 ml de solución acuosa de nitrato de plomo al 10% calentamos
a baño María aproximadamente 10 minutos y observamos un precipitado negro
correspondiente al sulfato de plomo me confirmó la presencia de azufre.

La prueba de azufre reducido, sirve para identificar los aminoácidos que contiene
azufre en su estructura, como es el caso de la cisteína (RSH), este aminoácido
al reaccionar con NaOH y acetato de plomo producen un precipitado café a
negro, el cual es sulfuro de plomo. Gotas de solución de Nitroprusiato de sodio,
en este caso un color violeta indica la presencia de azufre

CONCLUSIONES

Indicamos la presencia de proteínas en diferentes muestras de alimentos

mediante pruebas cualitativas, del mismo modo identificamos algunos de los
aminoácidos presentes en ellas por medio de las reacciones que ocurrieron en
cada caso de acuerdo al radical o al grupo que caracteriza al aminoácido.
Identificamos estructuralmente diferentes aminoácidos presentes en
determinadas proteínas o en su defecto como aminoácidos libres. Por medio de
la marcha analítica, identificamos, que la leche (soya) es una fuente de proteína
y por lo tanto de aminoácidos muy importante comparado con la harina de trigo
ya que según los resultados contiene varios tipos de aminoácidos. Las pruebas
realizadas no permitieron reconocer aminoácidos esenciales tales como la
metionina y el triptófano al parecer por errores durante la realización de la
práctica o por el estado de los reactivos.

En el desarrollo de esta práctica se realizaron diferentes ensayos cualitativos

(ninhidrina, Millon, Xantoproteico, prueba de Biuret, reacción de Sakaguchi,
reacción de Hopkins Cole con el objetivo de identificar aminoácidos presentes
en muestras conocidas como la leche de soya, la harina de trigo, de igual forma
se siguió una marcha analítica para caracterizar una muestra problema la cual
finalizó en el reconocimiento de las características estructurales de cada
aminoácido se consiguió reconocer la presencia o ausencia de ellos en las
muestras analizadas.

Anexo N° 1
 Ensayo biuret

Reacción Xantoproteica, no presento

coloración ni precipitado, lo cual indica que no tiene grupo aromático.
 Ensayo de Millón, La prueba dio resultado (color rojo).

Sakaguchi presento coloración roja

BIBLIOGRAFIA

A Leigh R. Elderfield, P. Smith, W. Bachmann, A Manual for the Organic Chemistry Laboratory. Ed
John Wiley & Sons, INC, New York, 1960

R. Adams, J. Jhonson, Ch. Wilcox, Laboratory Experiments in Organic Chemistry, Ed The Macmillan
company, New York, 1965