PRECIPITACIÓN, SEPARACIÓN Y PUNTO

ISOELÉCTRICO DE PROTEÍNAS

OBJETIVOS Tubo 1 2 3 4 5 6

 Analizar el efecto que produce la modificación de

HgCl2 5%

factores fisicoquímicos sobre la solubilidad de las AgNO3 2%

proteínas.
 Determinar el punto isoeléctrico de la insulina
Pb(C2H3O2

)2 5%
basándose en sus propiedades de solubilidad a
diferentes valores de Ph.
BaCl2 5%

RESULTADOS
NaCl 5%

PRECIPITACION CON SALES (SALTING-OUT)
Agua

COLORACIÓN INTERPRETACION
FILTRADO 1 Morado Prueba positiva, hay  = Si precipito
proteínas
PRECIPITADO Morado Prueba positiva, hay  = No precipito
1 proteínas
FILTRADO 2 Azul Prueba negativa, no
hay proteínas
PRECIPITADO Morado Prueba positiva, hay DETERMINACIÓN DEL PUNTO ISOELÉCTRICO DE LA
2 proteínas INSULINA

Tubo Ácido Acetato pH Observaciones

PRECIPITACION POR EFECTO DEL pH Y SOLVENTES acético de sodio
0.2 M 0.2 M
Tubo 1 2 3
1 0.23 0.02 1.81 No presenta
HCl 0.1 N No cambios
observamos
2 0.15 0.10 2.70 Ligera turbidez
cambios
3 0.05 0.20 3.48 Presenta un
NaOH 0.1 No
color violeta
N observamos
4 0.01 0.24 4.26 Ligera turbidez
cambios
5 0.00 0.25 ----- No presenta
Regulador Observamos
de cambios
una ligera
acetatos turbidez
1.1 M pH
4.7
DISCUSIONES
Etanol 96° Observamos Observamos Observamos PRECIPITACION CON SALES (SALTING-OUT)
algunas algunas un
partículas partículas precipitado Las sales neutras con fuerzas iónicas alta, disminuyen la
que se que se blanco solubilidad de las proteínas, cuando aumentamos la
quieren quieren concentración de la sal esta desplaza el agua de
precipitar precipitar hidratación alrededor de los grupos cargados de la
proteína y la transforma en agua de hidratación alrededor
de los iones de la sal. Es por ello que observamos mayor
PRECIPITACION POR METALES PESADOS precipitación al adicionar Sulfato de amonio en el filtrado
1.
1
Al realizar la reacción de Biuret, si observamos un color CONCLUSIONES
morado significa que la prueba es positiva y hay
presencia de proteínas, en cambio cuando observamos  Se lograron separar proteínas de la albumina
un color azul, como en el filtrado 1 es porque la prueba mediante 4 métodos diferentes.
es negativa y no hay presencia de proteínas. 

PRECIPITACION POR EFECTO DEL pH Y SOLVENTES BIBLIOGRAFÍA

En este experimento observamos que los tubos que
contienen NaOH y HCl no presentan cambio alguno, pero
en el tubo de Regulador de acetatos observamos una
turbidez, lo cual significa que las proteínas no precipitan
a un pH ni muy básico (NaOH) ni muy ácido (HCl), pero a
un pH en donde se encuentra su punto isoeléctrico (Reg.
Acetatos) si precipitan.
1. Devlin Thomas, “Bioquímica con aplicaciones”,
4ta, Edición, Editorial Reverté, 2004, España.
2. E. Conn Eric, “Bioquímica fundamental”,
Universidad de California, Editorial Limusa, 2001,
México D.F.

A su vez en este experimento tenemos al agua como

solvente con una constante dieléctrica alta, y al cambiar
al agua por etanol que tiene una constante dieléctrica
menor, observamos que los 3 tubos comienzan a
precipitar más, esto significa que logramos cambiar la
constante dieléctrica del solvente. Sabemos que los
alcoholes reducen la constante dieléctrica de las
soluciones acuosas de proteínas, disminuyendo así su
afinidad por el solvente, provocando que las proteínas se
disuelvan menos o precipiten.

PRECIPITACION POR METALES PESADOS

Las proteínas tienden a precipitar cuando se les adiciona

a sus soluciones sales de metales pesados, como lo
observamos en el experimento, por ello es que
reaccionan únicamente con el cloruro mercúrico, nitrato
de plata y acetato de plomo, dando un precipitado. Y no
reaccionan con el agua, cloruro de bario y cloruro de
sodio.

DETERMINACIÓN DEL PUNTO ISOELÉCTRICO DE LA

INSULINA

El punto isoeléctrico de una proteína es el pH al cual la

proteína presenta su mínima solubilidad. Es ahí cuando
observamos un precipitado, en el experimento realizado
tenemos que el único tubo que presenta un precipitado
color violeta-azul es el número 3, con un pH de 3.48.