Biología: EMVZ - FCAG – UNJBG - 2016

MICROSCOPÍA

I. INTRODUCCION:
Los seres vivos simples o complejos están compuestos por células (arqueas, bacterias y eucariotas), los cuales son
muy pequeñas y para ser observadas a simple vista, y por lo tanto se requieren de los microscopios para amplificar dichos
organismos. El microscopio es el instrumento óptico necesario en un laboratorio de biología, ya que gracias a un sistema
de lentes y fuentes de iluminación permiten la observación de organismos o sus estructuras que no pueden ser apreciados
en detalle a simple vista, a su vez la biología celular comenzó con la microscopia óptica. Hoy en día existe una gran
variedad de microscopios y según la fuente de iluminación utilizada, se agrupan en microscopios ópticos y microscopios
electrónicos. Etimológicamente la palabra microscopio proviene de dos voces griegas: Micros = pequeño y scopium =
ver u observar. Los microscopios pueden ser ópticos o electrónicos
Microscopios ópticos: la fuente de iluminación es la luz y los lentes son oculares y objetivos. De campo oscuro.
Permiten la observación de formas celulares que destacan brillantes sobre un fondo oscuro. Este efecto se consigue
utilizando diafragmas especiales. De contraste de fases. Gracias a la utilización de diafragmas y objetivos especiales, que
consiguen aumentar las diferencias en el índice de refracción de las células y el medio que las rodea, permiten la
observación de células vivas, ya que no es necesario realizar ninguna tinción de las mismas. De interferencia. Permiten
observar células vivas sin teñir, obteniéndose una imagen en relieve de las mismas. De fluorescencia. La fuente de
iluminación proporciona luz ultravioleta que excita ciertas moléculas presentes en las células (bien de forma natural o
añadida a la preparación) que emiten fluorescencia en el espectro visible.
Microscopios electrónicos: La fuente de “iluminación” son electrones y las “lentes” son electroimanes. De
transmisión. Permiten la observación de muestras teñidas con sustancias que son resistentes al paso de electrones y
cortadas dando lugar a láminas finas, denominadas cortes finos. Los electrones no son visibles directamente por lo que
éstos se envían a una pantalla que emite fluorescencia más o menos intensa según el número de electrones que inciden en
ella. Las estructuras celulares que se tiñan más intensamente impedirán el paso de electrones y por lo tanto no permitirán
la emisión de fluorescencia, por lo que estas estructuras aparecerán oscuras en un fondo más brillante. Se consiguen entre
10.000 y 100.000 aumentos. De barrido. Permiten la observación de células enteras, sin necesidad de cortes finos, de
modo que aparecen los relieves originales y las superficies externas. Alcanzan entre 1.000 y 10.000 aumentos.
Microscopio de Fuerza Atómica (AFM): es una poderosa técnica usada para investigar un amplio rango de propiedades
a escala manométrica, que incluye topografía de muestras y mecánica, por nombrar algunos. Para imágenes, una punta
afilada rastrea la superficie, iluminando su estructura. Típicamente la superficie se crea grabando la deflexión de una viga
flotante (movimiento), la cual se mide monitoreando la reflexión de un punto de láser sobre la viga flotante a través de
una serie de fotodiodos.

II. OBJETIVOS:
1. Conocer e identificar las diferentes partes del microscopio compuesto y sus respectivas funciones.
2. Aprender a manejar correctamente el microscopio.
3. Adquirir destreza para calcular las medidas de estructuras celulares, células y organismos.

III. MATERIALES
- Microscopio compuesto, Lámina portaobjeto, laminillas cubreobjetos, goteros y papel milimetrado.
IV. PROCEDIMIENTO:
A) Descripción de las partes del microscopio:
El microscopio se divide en tres sistemas: sistema óptico, sistema de iluminación y parte mecaniza.
1. Sistema óptico
Ocular: Consta de un sistema de lentes planas, convexas, dispuestas en un tubo cilíndrico de metal, con un diafragma
intermedio, ambos lentes presentan las caras planas hacia el ojo del observador y las caras convexas hacia el objeto. La
lente que va cerca al ojo del observador (es el ocular) y la lente inferior (es la lente de campo o colectora), el cual recibe
la imagen ya formada por el objetivo, siendo una imagen luminosa y corregida de aberraciones. En la parte lateral del
tubo cilíndrico del ocular lleva inscrito: 4x, 5x, 10x, 15x, etc. Que indica el N° de aumentos del ocular, dando una imagen
virtual y derecha formándose la altura del diafragma.
Lentes Objetivos: Son lentes situados cerca del preparado de la muestra. Un objetivo está constituido por tubo metálico
y cilíndrico y en su interior lleva un sistema de lentes destinados a proporcionar una imagen real e invertida del objeto en
estudio. La lente de la parte inferior (es la lente frontal). En la parte lateral de cada tubo metálico llevan inscrito: 4x, 10x,
40x, 60x, 95x, o 100x, que indican el N° de aumentos del objetivo y a su vez la apertura numérica (capacidad de reunión
de la luz de objetivo) siendo de 0,30 para el objetivo de 10x, de 0,65 para el de 40x y de 1,30 para el de 100x.

Los objetivos pueden ser de dos clases:

a) Objetivos a seco: Son aquellos que entre el objetivo y la muestra no llevan ninguna sustancia, y son usados para
preparados en fresco y los aumentos pueden ser: pequeño aumento (mayor de 0 y menor de 10x) y de gran aumento
mayor de 30 y menor de 90x).
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b) Objetivos de inmersión: llevan un líquido (comúnmente aceite de cedro) entre el objetivo y el preparado de la
muestra este aceite tiene un índice de refracción de 1,5 usados para preparados en seco.

Características de los objetivos

Escala de reproducción: relación lineal que existe entre el tamaño del objeto y su imagen, por ejemplo, 4:1, 40:1,
65:1, etc. (donde 1 representa el tamaño del objeto y 4,40 y 65 representa el aumento de su imagen).
Poder definidor: es la capacidad del objetivo de formar imágenes de contornos nítidos.
Límite de resolución: es la menor distancia que debe existir entre dos objetos para q puedan visualizarse por
separado.
Poder de resolución: es la capacidad de mostrar la imagen en sus detalles más finos. Está en relación inversa con el
límite de resolución.
Poder de penetración. Es la propiedad de permitir la observación simultánea de varios planos del preparado. Es
inversamente proporcional a la escala de reproducción o aumento.
Distancia frontal: es la distancia de la lente frontal al preparado colocado en la platina, cuando esta enfocado.
Disminuye cuando aumenta la escala de reproducción del objetivo.
Pequeño aumento: entre 0.5cm y 3cm, Mediano aumento: entre 3mm y 0.5cm
Pequeño aumento: entre 1mm y 3mm, Inmersión: entre 0.8mm y 1.2mm
Aumento total: El ocular también tiene un aumento, por lo tanto el aumento total de la imagen que observamos es el
producto entre el aumento del objetivo y del ocular. Ejemplo: Si tenemos colocado el objetivo cuya escala de
reproducción es de 40:1 y nuestro ocular tiene un aumento de 10x, entonces el aumento total será de 40x10 = 400

2. Sistema de iluminación
Espejo o lámpara de iluminación: Tiene dos caras (cóncava y plana) y es móvil en todas direcciones. La cara cóncava
se empleas de preferencia con iluminación artificial y la plana para luz natural. Y los microscopios que traen lámpara
incorporada carecen de estos espejos.
Diafragma: Es un dispositivo constituido por un sistema de laminillas metálicas dispuestas concéntricamente, regulando
la entrada de luz emitida por la emitida por el espejo o la lámpara.
Condensador: Está constituido por un sistema de dos o más lentes montadas dentro de un cilindro cónico truncado de
metal. Su ubicación esta por debajo de la platina. Su función es la de concentrar o concentrar la luz emitida por la
lámpara.
Portafiltros: Este dispositivo permite colocar filtros de diferentes colores que facilitan la observación.

3. Sistema mecánico
El pie: Es la base sobre el cual se apoya el microscopio y tiene por lo general forma rectangular o de “Y”.
La columna o brazo: Ubicada en la parte posterior de los sistemas ópticos y de iluminación. Sostiene el tubo en su
porción superior y por el extremo inferior se adapta al pie.
La platina: Estructura metálica plana en la que se coloca el preparado o muestra que se va a observar. Presenta un
orificio en el eje óptico del tubo que permite el paso de los rayos luminosos a la preparación. Puede ser fija o giratoria
mediante tornillos laterales que pueden centrar el preparado.
El tubo óptico: Tiene forma cilíndrica y esta ennegrecido para evitar molestias que ocasionan los reflejos de la luz. En su
extremidad superior se colocan oculares
El revolver: Estructura giratoria provista de orificios en los cuales se enroscan los objetivos. Al girar el revólver, los
objetivos pasan por el eje del tubo y se colocan posición de trabajo.
El carril: Es un dispositivo colocado sobre la platina que permite deslizar la preparación con movimiento de adelante
hacia atrás y de derecha a izquierda.
El tornillo macrométrico: Este tornillo permite ascender o descender la platina junto con el preparado. Deslizándose en
forma vertical por medio de una cremallera este tornillo permite movimiento largos enfocando con mayor rapidez la
preparación.
El tornillo micrométrico: Este dispositivo permite moviendo casi imperceptibles de la platina en forma vertical,
logrando el enfoque exacto y nítido de la preparación. Lleva acoplado un tambor graduado en divisiones de 0.001 mm
que se utiliza para precisar sus movimientos y a la vez puede medir el espesor de los objetos en observación.

B) El manejo del microscopio

1. Iluminación
 Verificar que el diafragma del condensador este abierta.
 Encender la lámpara y observar a través del ocular que el campo microscópico esté completamente iluminado.
 Verificar que el tubo óptico este a unos 3cm de la platina.
2. Preparación de la muestra
 Con ayuda de una tijera recortar un trozo de papel alrededor de 3x3 mm que incluya una letra “e” o “3”.
 Colocar la letra en el portaobjeto agregando una gota de agua.
 Colocar el cubreobjetos sobre la muestra.
 Colocar el preparado sobre la platina.
3. Enfoque de la muestra
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 Ubicar el portaobjeto de modo que la letra quede en el medio de la apertura de la platina.
 Con el tornillo micrométrico bajar lentamente el tubo hasta que el extremo inferior este a 1 mm
aprox. de la muestra.
 Observar a través del ocular hasta que la letra sea visible.
 Mejorar la imagen con el tornillo micrométrico hasta lo mejor foco posible. Y ajustando el diafragma se
mejora la claridad de la imagen.
 Comparar la posición de la imagen de la letra en el ocular con la posición de la letra sobre el portaobjeto.
 Dibujar la letra observada, indicando su posición y calcular su tamaño en número de aumentos.
4. Cambio de objetivo
 Girar el revólver y centrar el objetivo de mediano aumento.
 Enfocar y aclarar la imagen con el tornillo micrométrico.
 Describir lo observado. Dibujar y estimar el tamaño de la imagen en número de aumentos.

V. RESULTADOS
VI. DISCUSIÓN
VII. CONCLUSIONES
VIII. BIBLIOGRAFÍA
IX. CUESTIONARIO