Extracción de proteínas por el método de Osborne y Mendel y su cuantificación por

el Método de Kjeldahl, Biuret cuantitativo y U.V. en una muestra de Harina de

Trigo.
Ana María Gómez Prado
Manuel Fernando Muñoz
Carlos Andrés Ramírez Millán
Laura María Rodríguez1

Objetivos

 Extracción de Proteínas por el método de Osborne y Mendel.

 Determinación y cuantificación de proteínas por el método de Kjeldahl, Biuret y U.V.

Materiales y Reactivos
Tabla 1 Materiales y Reactivos de la práctica

Materiales Reactivos
Espátula Harina (Trigo, avena) Homogeneizada
2 vidrio de reloj NaCl 1%
Equipo automático (digestor y destilador) Etanol 75%
1 pipeta de 1 mL NaOH 0.1 N
2 pipetas de 10 mL Ácido Sulfúrico H2SO4 98%
1 pipeta de 5 mL Ácido Bórico H3BO4 4%
4 matraces aforados 100 mL Indicador Tashiro
Pinza para bureta Ácido clorhídrico HCl 0.1 N
Soporte universal Reactivo Biuret
Bureta 50 mL Patrón albúmina de huevo 5mg/ml
Espectrofotómetro
19 tubos de ensayo
Equipo de Centrifugado.
Beaker de 200 mL
Frasco lavador
Escobilla
Agitador de vidrio

1
Estudiantes de Licenciatura en Química, Informe de Laboratorio presentado al Profesor Rodrigo Rodríguez, sistemas
Bioquímicos.
Metodología

Ilustración 1 Procedimiento extracción de Proteínas por el Método de Osborne y Mendel

Ilustración 2 Procedimiento cuantificación de Nitrógeno total

Adicionar las
Método Biuret En 9 tubos de
cantidades de la
Cuantitativo ensayo
*Tabla 2

Leer Absorbancia Mezclar y reposar

λ=540nm 30min.

Ilustración 3 Procedimiento Método Biuret Cuantitativo

*Tabla 2 Cantidades usadas para Biuret Cuantitativo

Tubo/Reactivo Blanco 1,0 2,0 3,0 4,0 5,0 6,0 7,0 8 MP 9MP
Patrón Albúmina (mL) 0,0 0,1 0,3 0,5 0,7 0,9 1,2 1,5 ----- -----
[Albúmina] mg/mL 0,0 0,1 0,3 0,5 0,7 0,9 1,2 1,5 ----- -----
Extracto (Harina) ----- ----- ----- --- --- --- --- --- 0,5 1,0
Agua 2,0 1,9 1,7 1,5 1,3 1,1 0,8 0,5 1,5 1,0
Reactivo Biuret 3,0 3,0 3,0 3,0 3,0 3,0 3,0 3,0 3,0 3,0
 Adicionar las
En 8 tubos de
Método U.V. cantidades de la
ensayo
*Tabla 3

Leer Absorbancia
Mezclar
λ=280nm

Ilustración 4 Procedimiento del Método U.V.

*Tabla 3 Cantidades usadas para Método U.V.

Tubo/Reactivo Blanco 1,0 2,0 3,0 4,0 5,0 6,0 7 MP 8 MP
Patrón Albúmina (mL) 0,0 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0 1,2 ----- -----
[Albúmina] mg/mL 0,0 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0 1,2 ----- -----
Extracto (Harina) ----- ----- ----- ----- ----- ----- ----- 0,5 1,0
NaCl 1% (mL) 5,0 4,8 4,6 4,4 4,2 4,0 3,8 4,5 4,0

Resultados y discusión
1. Cuantificación de Proteína Método Kjeldahl
Tabla 4 Datos obtenidos

Peso de la Harina (g) Volumen de HCl (mL)

1,006 15,0

14,08⁄ 𝑚𝑔/𝑚𝑜𝑙
15,0 𝑚𝐿 𝐻𝐶𝑙 ∗ [0,1𝑁] ∗ 1
𝑚𝑔 𝑁 1𝑚𝑒𝑞 − 𝑔𝑁
= = 0,02099
𝑚𝑔 1000𝑚𝑔
1,006 𝑔 𝐻𝑎𝑟𝑖𝑛𝑎 ∗
1𝑔
𝑚
% 𝑁 = 0,02099 ∗ 100% = 2,099
𝑚
2. Cuantificación por el método Biuret Cuantitativo
Tabla 5 Datos obtenidos

[Albúmina] ̅̅̅̅̅
Abs 𝐴𝑏𝑠
mg/mL
0,00 0,001 0,002 0,002 0,002
0,10 0,230 0,230 0,230 0,230
0,30 0,243 0,243 0,243 0,243
0,50 0,347 0,347 0,347 0,347
0,70 0,381 0,381 0,381 0,381
0,90 0,427 0,427 0,427 0,427
1,20 0,483 0,483 0,484 0,483
1,50 0,560 0,560 0,560 0,560
MP (Albumina) 0,033 0,033 0,033 0,033
MP (Globulina) 0,067 0,067 0,067 0,067

3. Cuantificación por Método U.V.

Tabla 6 Datos Obtenidos

[Albúmina] ̅̅̅̅̅
Abs 𝐴𝑏𝑠
mg/mL
0,00 0,001 0,001 0,001 0,001
0,2 0,123 0,123 0,123 0,123
0,4 0,302 0,302 0,302 0,302
0,8 0,552 0,552 0,552 0,552
1,0 0,549 0,549 0,550 0,549
1,2 0,729 0,729 0,728 0,729
MP (Prolinas) 0,750 0,750 0,750 0,750

Conclusiones
Referencias bibliográficas