FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

ESCUELA DE MEDICINA HUMANA

BIOQUIMICA
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EFECTO DEL AYUNO SOBRE EL CONTENIDO
DE GLUCÓGENO HEPÁTICO
Profesor: Salazar Sanchez, Juan Alberto

Alumnos: - Coz Montero, Nicole Xiomara

-Herrera Apaza, Milagros Guadalupe
- Huaman Marin, Caroline Sheyla
- Mendiola Ubillús, Flavia Lucía
- Serván Rochabrunt,Valeria

SEMESTRE 2018-I
2018
12 DE MAYO
Introducción

El hígado es un importante órgano que está presente tanto en el ser humano, como en
todos los animales vertebrados. El hígado humano tiene un peso medio de 1500 gramos,
está situado en la parte superior derecha del abdomen, debajo del diafragma, secreta la
bilis esencial para la digestión de las grasas y cuenta con otras muchas funciones, entre
ellas la síntesis de proteínas plasmáticas, función desintoxicante y almacenamiento de
vitaminas y glucógeno.

El glucógeno es la forma principal de almacenaje de carbohidratos. En los animales se

encuentra en proporción mayor en el hígado (hasta 6%) y en el músculo, donde rara vez
excede de 1%. Sin embargo, debido a su masa mayor, el músculo almacena tres a cuatro
veces la cantidad de glucógeno que tiene el hígado como reserva. Al igual que el
almidón, es un polímero ramificado de alfa-glucosa

El glucógeno es un polisacárido de la D-glucosa con enlaces alfa 1-4, sinembargo, está

más ramificado, y su molécula es más reducida que laamilopectina; las ramificaciones
aparecen cada 8 a 12 residuos de glucosa

El propósito de esta práctica es tener conocimiento sobre los efectos del ayuno en
cuanto al contenido de glucógeno en el hígado, ya que este órgano es responsable del
almacenamiento del glucógeno y cuando es necesario lo degrada para poder liberar
glucosa a la sangre y mantener la glicemia durante periodos de escases de alimentos.

Para la extracción del contenido del glucógeno se va a utilizar dos hígados de dos ratas,
de las cuales una se le dio una alimentación constante y a la otra se le mantuvo en un
periodo de ayunas por 24 horas, previo a la extracción de ambos hígados. (teniendo la
misma hidratación).

Metodología

MATERIALES EN LA MESA DEL ALUMNO

 01 Gradilla
 04 Tubos de ensayo
 01 Piseta con agua destilada
 04 Embudos para tubos de ensayo
 01 Plancha de calentamiento
 01 Beaker de 250mL
 03 Pipetas de 5mL
 03 Propipetas

REACTIVOS EN LA MESA DE LOS ESTUDIANTES

  1mL Estándar de glucosa 5mg/dL
 5mL Alcohol etílico

MATERIALES EN LA MESA CENTRAL

 6mL hidróxido de potasio KOH 30%

 01 hielo
 3g Hígado de roedor en ayunas por 24h
 3g Hígado de roedor alimentado Ad libitum
 01 espectrofotómetro
 01 centrifuga
 01 micropipeta 10-100 µL y/o de 5-50µL
 12 puntas descartables respectivas
 12 cubetas para espectrofotometría

Se pesará 0.5 g de hígado de cada animal se colocarán en tubos de boca ancha y se les
adicionará 1 mL de KOH al 30%. Se colocará en la boca de cada tubo un embudo
pequeño y se le someterá al baño maría hirviente durante 30 minutos. Después de
enfriar, se les adicionará 3 mL de agua destilada y 5 mL de alcohol etílico. Se formará
precipitado en aquel hígado que contenga glucógeno. Se centrifugará durante 10
minutos a 3000 rpm a cuyo término se eliminará el sobrenadante. Disolver el
precipitado en 200 mL de agua destilada.

Resultados

HIGADO DE RATA ABSORCIÓN FINAL

TUBO 1 Hígado normal -0.004 (redondeado a 0)

TUBO 2 Hígado ayuna 0.003

Los tubos 1 y 2 (muestras con el hígado de ratón normal y en ayunas,

respectivamente) pasaron por los mismos procesos. Esto con intención de aislar el
glucógeno del órgano. Después de liquidar el hígado en una solución acuosa de
hidróxido de potasio a baño maría por media hora se añadió 5ml de alcohol y 3ml
de agua para generar la lisis celular y liberar el glucógeno de la muestra. Esto fue
centrifugado lo cual resulto en ambas muestras presentando cantidades muy
similares de glucógeno a la base de los tubos de ensayo. Por razones obvias, como
no hubo una conclusión definitiva, se tuvo que añadir 4 ml de ácido clorhídrico de
concentración 1.33 mol para romper los enlaces glucogénicos y así pasar las
muestras por espectomatografia para observar las diferencias. Esta muestra acida
se tuvo que alcalinizar antes de poder centrifugar la muestra una última vez y
probar su absorción de luz. Los resultados finales fueron 0.003 y -0.004 para las
absorciones a aproximadamente 535m. Esto nos indica que hubo una diferencia
casi nula entre la cantidad de glucógeno almacenado en un hígado de rata normal y
un hígado de rata en ayunas por un día. Si bien es cierto, se podría redondear el -
0.004 presente en el tubo 2 a cero, ya que es un valor negativo. Sin embargo, esto
no cambia la diferencia casi nula entre las muestras. Se esperaba encontrar un
valor de aproximadamente 0.20 en la muestra con el hígado normal, sin embargo
no ocurrió.

Conclusiones

El ayuno prolongado en la situación en la que durante varios días no se ingieren

alimentos, pero sí se toma agua. Esta etapa comienza, cuando las concentraciones de
glucosa en sangre empiezan a disminuir y los procesos metabólicos del estado post-
absortivo se invierten. La secreción de insulina disminuye y la de glucagón aumenta.
Esta última hormona promueve la degradación del glucógeno hepático (glucogenólisis)
a través de mecanismos donde se activa la glucógeno fosforilasa y se inactiva la
glucógeno sintasa. También se activa la degradación de los triacilgliceroles
almacenados en el tejido adiposo por acción de la lipasa hormona sensible y son
transportados a la sangre los ácidos grasos y el glicerol; los ácidos grasos alcanzan
muchos tejidos para ser utilizados como combustibles y el glicerol pasa al hígado como
alimentador de la vía de la gluconeogénesis. A la vez la disminución de insulina reduce
el consumo de glucosa por el músculo, el hígado y el tejido adiposo. Se activa la
gluconeogénesis en el hígado a partir del glicerol derivado del tejido adiposo, y de ácido
láctico y aminoácidos como la alanina provenientes del músculo. Disminuye la
glucólisis por disminución de la fructosa 2,6-bisfosfato, y la glucosa finalmente tiende a
aumentar en sangre para utilizarse por el cerebro. El glucagón elevado promueve que la
acetil-CoA carboxilasa pase a su forma inactiva fosforilada y por eso la síntesis de
ácidos grasos en el hígado disminuye. El hígado y el músculo utilizan preferentemente
como combustibles a los ácidos grasos cuando las concentraciones de glucosa sanguínea
descienden durante estas horas de ayuno.

En otras palabras, el ayuno promueve que los niveles de glucógeno disminuyan, así
como también disminuye las concentraciones de otros metabolitos que son usados como
combustibles, por consiguiente, el hígado de rata que estaba en un ayuno prolongado
formo menos precipitado, ya que poseía menos concentración celular de glucógeno, ya
que estos eran usados para obtener glucosa y así brindar energía a las células durante
este estado.
Las características del hígado de rata en estado post-absortivo (que había sido
alimentada), poseía un color rojo purpúreo, muy oscuro y profundo y de forma
voluminosa, eso se debe a que las células hepáticas están almacenando glucógeno. En
cuanto al hígado de la rata que estaba en ayuno, era de color rojo purpúreo, menos
intenso que el anterior, lo cual era debido a que disminuían las concentraciones de
glucógeno que esta almacenaba, así como también disminuían las concentraciones de
otros metabolitos.

BIBLIOGRAFIA

1. Blog.elinsignia.com. (2018). La importancia de un hígado sano | Blog El

Insignia. [online] Available at: http://blog.elinsignia.com/2017/06/13/la-
importancia-de-un-higado-sano/ [Accessed 6 May 2018].
2. Completo, V. (2018). definicion de higado. [online]
Elhigadohumanotema.blogspot.pe. Available at:
http://elhigadohumanotema.blogspot.pe/2017/05/el-higado-humano-el-higado-
un.html [Accessed 6 May 2018].