Universidad Autónoma de Chiriquí

Facultad de Ciencias Naturales y Exactas

Escuela de Biología
AISLAMIENTO DE GLUCOGENO
Arauz Anyeliz, Brown Yaney, Candanedo Juan, Salazar Lorena

I. Resumen

Con el objetivo de extraer glucógeno de una muestra de hígado se procedió a

extraer el mismo mediante un tratamiento con KOH más calor, con este tratamiento,
las proteínas y lípidos complejos son hidrolizados, pero no el glucógeno.
Posteriormente, cuando se adiciona etanol, el glucógeno se hace insoluble y los
otros compuestos permanecen en solución. El glucógeno insoluble es luego
separado por centrifugación y determinado como glucosa, sin previa hidrólisis. Se
ha demostrado que en tejidos con alto contenido de glucógeno como hígado, este
polisacárido puede ser determinado en presencia de proteínas y sin hidrólisis. Esto
representa una ventaja sobre otros métodos en los cuales hay que precipitar el
glucógeno y someterlo a un proceso de hidrólisis larga.
unidades de glucosa unidas por
enlace α (1-4) y ramificaciones α (1-6)
II. Objetivos El glucógeno actúa como regulador de
 Extraer el glucógeno presente en la glucosa sanguínea, almacenándola
una mezcla de hígado de pollo. como glucógeno durante una buena
alimentación (gluconeogénesis) y
 Caracterizar mediante pruebas liberándola por fosforolisis
químicas el glucógeno extraído (glucogenolisis) durante el ayuno, ya
III. Marco Teórico que en esta situación no hay absorción
intestinal. La duración del glucógeno
Introducción: hepático en ayunas es de
aproximadamente 24h. A partir de ese
El glucógeno consta de cadena de
momento, la concentración en sangre
glucosa unidas por enlaces
se mantiene por síntesis de glucosa a
glicosidicos α (1-4) y ramificaciones,
partir de sustancias distintas de
cada 8 o 10 unidades, de glucosa
carbohidratos (gluconeogénesis). En
mediante enlace glicosidicos α (1-6).
estos mecanismos de control, actúan
El glucógeno es la forma de
la adrenalina y el cortisol. (L. Díaz
almacenamiento de la glucosa en los
2002)
tejidos animales. Se encuentra
principalmente en el hígado y en el El glucógeno se libera de los tejidos
musculo representado hasta un 10% y que lo contienen por calentamiento
un 1-2% de su peso húmedo, con una base fuerte (KOH) hasta la
respectivamente. Está formado por

destrucción total del tejido. La
separación del glucógeno del tejido se
consigue mediante la adición de
etanol (Precipita polisacáridos y
elimina monosacáridos solubles) y
sulfato de sodio (Precipitante). Así se
produce un precipitado que contiene
una mezcla de glucógeno, proteínas,
ácidos nucleicos, que han resistido el
calentamiento anterior. El tratamiento
posterior con ácido hace que
precipiten proteínas y ácidos nucleicos
de la muestra. El glucógeno aislado se
vuelve a precipitar con etanol,
obteniéndose una preparación con un
alto grado de pureza. El tratamiento
que contiene (H2SO4) es un método
rápido para la determinación de las
hexosas y a lo pentosas
constituyentes de un polisacárido. (M.
Rouse 2005)
Mediante este método, el glucógeno
es hidrolizado por un ácido H2SO4
hasta sus unidades elementales
(Monosacáridos), que pueden ser
luego deshidratadas dando furfural, la
prueba da positiva cuando se forma un
anillo de color violeta.
IV. Materiales y Reactivos
Descripción Cant. Capacidad
Reactivos Toxicidad
KOH al Hidróxido de potasio: DL50 365 mg/kg en
50% rata. La
gravedad del daño al tejido depende de
la concentración del producto, la
prolongación del
contacto con el tejido y el estado del
tejido local. Después de la exposición
puede pasar un
tiempo antes de que aparezca la
irritación u otros efectos. Este material es
un fuerte
irritante y es corrosivo para la piel, ojos y
membranas mucosas.
Etanol al Inhalación: Los efectos no son serios
95% siempre que se use de manera
razonable. Una inhalación
prolongada de concentraciones altas
(mayores de 5000 ppm) produce
irritación de ojos y tracto
respiratorio superior, náuseas, vómito.
Contacto con ojos: Se presenta irritación
solo en concentraciones mayores a 5000
a 10000
ppm. Contacto con la piel: El líquido
puede afectar la piel, produciendo
dermatitis caracterizada por
resequedad y agrietamiento.
Ingestión: Dosis grandes provocan
envenenamiento alcohólico, mientras
que su ingestión constante, alcoholismo.
Reactivo Provoca mareos, náuseas, Dolor
de Molish abdominal, anemia hemolítica, Diarrea.
Al ser ingerido y al contacto con la piel
provoca peladuras.
V. Fase Experimental
Calentamos en un
Se corto en trozos
erlemeyer 36ml de KOH
pequeños los 50 g de
al 50% y adicione
higado de pollo
inmediatamente los
previamente pesados
trozos de higado.

Matraz 1 250 mL y
Erlenmeyer 500 mL. Pasados 40 min
Probetas 1 de 25 mL, Luego se caleno en baño adicionas 30 ml de agua
maria por 40 min y 70 ml de alcohol y
50 mL, 100 agitandolo agitamos, y se dejo
mL. reposar por 10 min.
Baño María. 1
Centrifugadora. 1
Vasos 2 50ml Adcionamos la mezlca
en tubos de centrifuga
químicos.
para pasar a 5 min de
Tubos de 2 10ml centrifugacion y Realizar
centrifuga la Prueba de Molish
 VI. Resultados y Discusiones VII. Discusión

Fig 1. La Para aislar el glucógeno del tejido

mezcla luego animal se utilizó hígado de pollo. El
de los 40 hígado como ya se mencionó contiene
minutos de un mayor porcentaje de glucógeno de
centrifugación y reserva. El glucógeno se libera de los
tejidos que lo contienen por
los 10 minutos
calentamiento con una base fuerte
de reposo.
(KOH) hasta la destrucción total del
tejido, esto se logra colocándolo en
baño María hirviente durante 45
minutos. El hidróxido de potasio al
calentarse en agua hirviendo
alcaliniza el medio ya que es una base
fuerte. El glucógeno es estable en este
medio en comparación a los demás
Fig 2. Tubos
componentes que se hidrolizan. La
luego de pasar separación del glucógeno del tejido se
por 5 minutos consigue mediante la adición de
de etanol (precipita polisacáridos y
centrifugación elimina los monosacáridos solubles).
Así, se produce un precipitado que
contiene una mezcla de glucógeno,
proteínas y ácidos nucleicos, que han
resistido el calentamiento anterior. Se
procedió a centrifugar por 5 minutos
para precipitar el tejido fibroso no
Nota: En los resultados presentados no se digerido y dejar en el sobrenadante el
observó el precipitado luego de pasar a glucógeno más las proteínas solubles
centrifugación, esto ocasiono que no se en medio alcalinas. Aún no se tiene
pudiera hacer la prueba de Molish para glucógeno concentrado, así que se
observar la presencia de glucógeno. procede a extraer cuidadosamente el
sobrenadante que contiene
A continuación una imagen de lo que se polisacáridos, monosacáridos
debió observar. solubles en medio alcalinos. El
tratamiento posterior se realiza con el
reactivo de Molish dando positivo para
Fig 3. Prueba de
glucógeno pues toda muestra en
Molish da positivo presencia de carbohidratos a la cual
por la formación se le agrega el reactivo de Molish, da
de un anillo rojo- positivo (violeta). Como se observa en
violáceo que nuestros resultados no se pudo
indica la realizar la prueba de Molish por que no
presencia de se formó el precipitado luego de ser
glucógeno. centrifugado, lo que pudo ocasionar
que no se formara el precipitado fue
que se pesó en vez de 50g fueron 18g
que era la cantidad de hígado que se
 trajo, además se agregó 30 ml de agua
y 70ml de alcohol que estaba
estipulado para un floculado de 50g de
hígado. Talvez si se hubiera añadido
menos agua y alcohol se podía
obtener un mejor resultado.
VIII. Conclusión
• R. Rouse. Polisacáridos.
Universidad de Colorado.2005
• Lehninger. Principios de
Bioquímica. 3ª ed. Nelson D. y Cox, M.
Editorial Omega (2002). 1 vol.
• Adams, Johnson and wilcon
(1979). Laboratory experiment and
organic chemistry 7º ed Chicago

Se realizó el aislamiento del glucógeno a

partir del hígado de pollo, este es un
proceso de homogenización del tejido y
ruptura celular, así como de extracción y la
eliminación de las proteínas. El glucógeno
puede separarse de los monosacáridos y
otros compuestos hidrosolubles por
precipitación con el etanol.

El glucógeno se libera de los tejidos

mediante el calentamiento con una base
fuerte (KOH) hasta la destrucción total del
tejido. Es importante saber que Una sola
molécula de glucógeno puede contener
más de 120.000 moléculas de glucosa.

El reactivo de Molish da positivo en

presencia de carbohidratos presentando
una coloración violeta esto demuestra la
presencia de glucógeno.

La importancia de que el glucógeno sea

una molécula tan ramificada es debido a
que su ramificación aumenta su
solubilidad y a que la ramificación permite
la abundancia de residuos de glucosa, que
al estar unidos entre si no poseen
extremos reductores libres, que van a ser
los lugares de unión de las enzimas
glucógeno fosforilasa y glucógeno
sintetiza, es decir, las ramificaciones
facilitan tanto la velocidad de síntesis
como la de degradación del glucógeno.

IX. Bibliografía
• L. Díaz. Identificación de
carbohidratos. Universidad de
colorado.2002