Cultivo in vitro de anteras y granos de polen de

cucarda Hibiscus rosa-sinensis

Ledesma.M, Lema.A
maledesma1@espe.edu.ec, aglema1@espe.edu.ec

Resumen
Para el cultivo in vitro de anteras y granos de polen se utilizó explantes de cucarda (Hibiscus rosa-
sinensis) sembrados en un frasco con medio Murashige y Skoog (MS) enriquecido con 2,5 mg/L
de Ácido 2,4-Diclorofenoxiacético. El objetivo de esta práctica fue inducir la formación de callo
a partir del ápice radical de zanahoria, empleando un protocolo de desinfección y técnicas
adecuadas de siembra.
Se evaluó los explantes a los 7, 14 y 21 días donde se observó que el 44 % de los frascos se
contaminaron con hongos y bacterias impidiendo la formación de callo, del 56 % de los frascos
que no se encontraron contaminados el 12% llegaron a la etapa 1 “inicio del encorvamiento del
explante o ensanchamiento” y el 44 % a la etapa 2 “formación parcial de callo”.
Palabras clave: anteras, cucarda (Hibiscus rosa-sinensis), Murashige y Skoog (MS).

Abstract
Key words:
Introducción
Mediante la técnica, las anteras inmaduras que contienen polen en una etapa específica de
desarrollo se colocan en medios donde el polen inmaduro de divide para formar embriones o callo.
Transferidos éstos a medios de regeneración, se forman plantas. En la mayoría de casos se
producen plantas haploides estériles, pero en algunas especies ocurre una duplicación espontánea
de los cromosomas en las etapas de desarrollo del callo y de regeneración de la planta.
La inducción del embrión y del callo requieren generalmente, en el cultivo de anteras, una mayor
concentración de auxina que la que la regeneración de plantas.
http://exa.unne.edu.ar/biologia/fisiologia.vegetal/Cultivo%20de%20Tejidos%20en%20la%20A
gricultura/capitulo11.pdf

Consiste en el cultivo de anteras enteras con polen inmaduro, el polen se divide para formar
embriones o callo. Cuando éstos se transfieren a los medios de regeneración se forman plantas.
Por lo general el cultivo de anteras se utiliza para la obtención de plantas haploides. Estas se
regeneran a través de la embriogénesis somática a partir del polen, directamente o por la vía de
organogénesis a partir de un callo. Algunas veces se cultivan el polen una vez aislado de la antera
y se llama cultivo de polen o de microesporas.
https://books.google.com.ec/books?id=T9QOAQAAIAAJ&pg=PA2&dq=cultivo+de+anteras+y
+polen&hl=es&sa=X&ved=0ahUKEwiNnLSq-
qDZAhUMON8KHfcoAiMQ6AEIJjAA#v=onepage&q=cultivo%20de%20anteras%20y%20pol
en&f=true
Las anteras de las primeras inflorescencias tienen una capacidad de respuesta mayor, que las que
provienen de la etapa final de la floración.
En general, la variación en la repuesta al cultivo in vitro de las anteras de plantas que crecen bajo
diferentes condiciones ambientales, puede ser debida a la diferencia en el contenido de hormonas
endógenas.
El estado de desarrollo del polen en el momento en que se separan las anteras para someterlas al
cultivo in vitro, es un factor clave para asegurar una respuesta exitosa. En estudios comparativos
y en la práctica se ha determinado que la etapa de desarrollo del polen comprendida entre el estado
uninucleado tardío y el binucleado temprano, es la óptima para asegurar una respuesta exitosa. Si
la siembra de anteras en medio nutritivo se realiza cunado el estado de desarrollo del polen está
en una etapa anterior o posterior a las mencionadas, la producción de callos decrece notablemente.
Las investigaciones en la fisiología de las anteras han revelado que los efectos benéficos del
tratamiento con frío y en ausencia de luz, consisten en reducir la actividad respiratorio de las
anteras al disminuir el consumo de materiales, lo cual prolonga la actividad biológica del
arquesporio que alberga a los granos de polen, manteniendo su viabilidad y evitando la
dehiscencia prematura de las anteras en el cultivo.
La temperatura adecuada para los procesos de formación de callos y de regeneración de plantas
está entre los 24 y 26ºC. Con temperaturas por encima de los 28ºC las anteras se degradan
rápidamente, disminuyen la formación de callos y la tasa de regeneración de plantas y aumenta la
presencia de plantas albinas.
La calidad e intensidad de la luz no afecta drásticamente los resultados del cultivo de anteras; sin
embargo, mantener el cultivo en la oscuridad durante la etapa de formación de callos favorece su
rápido crecimiento.
https://books.google.com.ec/books?id=i5zRon0BiucC&pg=PA19&dq=cultivo+de+anteras+y+p
olen&hl=es&sa=X&ved=0ahUKEwiNnLSq-
qDZAhUMON8KHfcoAiMQ6AEIKjAB#v=onepage&q=cultivo%20de%20anteras%20y%20po
len&f=true

https://books.google.com.ec/books?id=lUdW8cOp3M4C&pg=PA145&dq=cultivo+de+anteras+
y+polen&hl=es&sa=X&ved=0ahUKEwiNnLSq-
qDZAhUMON8KHfcoAiMQ6AEILjAC#v=onepage&q=cultivo%20de%20anteras%20y%20po
len&f=true
Informacion cucarda
https://books.google.com.ec/books?id=ucvFdpS2tBMC&pg=PA135&dq=cucarda+Hibiscus+ros
a-
sinensis&hl=es&sa=X&ved=0ahUKEwi9gPCdgKHZAhWBk1kKHRQ_AiQQ6AEIJjAA#v=onepage&q
=cucarda%20Hibiscus%20rosa-sinensis&f=true
https://books.google.com.ec/books?id=RLNCDwAAQBAJ&pg=PA882&dq=cucarda+Hibiscus+ro
sa-
sinensis&hl=es&sa=X&ved=0ahUKEwi9gPCdgKHZAhWBk1kKHRQ_AiQQ6AEITzAH#v=onepage&
q=cucarda%20Hibiscus%20rosa-sinensis&f=true

Materiales y Métodos

Recolección de la muestra

Se recolecto en fundas ziploc flores inmaduras completamente cerradas y sin presencia de

oxidación u insectos de cucarda (Hibiscus rosa-sinensis) del campus Sangolquí de la Universidad
de las Fuerzas Armadas-ESPE.
Preparación de la sala de siembra

El piso del área donde se realizó la siembra se barrió y se desinfectó con Kalipto, se esperó por
10 minutos, se procedió a limpiar las cámaras con alcohol al 70%, luego se roció con atomizadores
de alcohol al 70% todos los materiales a utilizar en la siembra, después se prendió las lámparas
UV de las cabinas durante 20 minutos, una vez transcurrido el tiempo propuesto se apagaron las
cámaras, al realizar la siembra los estudiantes debían llevar el equipo de protección: gorro,
mascarilla, guantes, zapatones, cofia, camiseta previamente esterilizado.

Desinfección

Se lavaron las flores con agua corriente, luego se preparó 500mL de solución al 2% de detergente
donde se sumergieron a las flores durante 20 minutos en agitación baja para no estropear las flores
y evitar que se abran, se procedió a desinfectar la muestra con agua destilada dos veces, se eliminó
el agua y se sumergió la muestra en una solución de hipoclorito de sodio al 2% con 3 gotas de
Tween 20 durante 10 minutos con agitación. Las muestras inmersas en cloro se colocaron dentro
de las cámaras de siembra donde se realizó tres lavados con agua estéril.

Siembra del material

Desinfectada la muestra se procedió a realizar el proceso de siembra, primero se flameó el bisturí

y las pinzas para tomar la flor cerrada sin agua y flamearla, se colocó la flor sobre la servilleta se
realizó cortes verticales en la parte lateral de la flor desde la base para dejar libre las anteras, con
la ayuda del bisturí se raspo sutilmente el polen sobre el frasco con medio MS, se flameó la boca
del frasco y se selló con dos capas de plástico y ligas, finalmente se colocó en oscuridad y se
evaluó la contaminación y características a los 7, 14 y 21 días.

Resultados
Discusión

Conclusiones y Recomendaciones

Cuestionario
Calcular la proporción de los granos de polen en cada antera que se desarrolló en las
plántulas.

¿Cómo puede usted determinar si las plantas son haploides o diploides?

Las características de hojas erectas, poco vigor y esterilidad en plantas desarrolladas permiten
distinguir a las plantas haploides de las diploides (Prasanna, Chaikam, & Mahuku, 2013). La
morfología también se emplea para esta diferencia, ya que en general las partes vegetativas y
florales son más pequeñas en las plantas haploides que en las diploides debido al tamaño reducido
de sus células (Roque, 2011).
Otra manera de determinar plantas haploides es mediante la presencia de poliembrionia o
verificando el número de cromosomas empleando análisis citológicos (Parra, 2010).
El empleo de marcadores de fenotipos basado en la coloración de antocianinas también es un
mecanismo que permite distinguir las plantas haploides de diploides en la etapa de semilla así
como en las etapas de crecimiento de la planta (Prasanna, Chaikam, & Mahuku, 2013).
Bibliografía

https://es.scribd.com/document/275246709/Informe-anteras

https://es.slideshare.net/pahola_estefy/obtencin-de-plantas-haploides-mediante-el-cultivo-in-
vitro-de-anteras-y-granos-de-polen-de-cucarda-hibiscus-rosa-sinensis

Introducción
Mediante esta técnica, las anteras inmaduras que contienen polen en una etapa específica de
desarrollo se colocan en medios donde el polen inmaduro de divide para formar embriones o callo.
Transferidos éstos a medios de regeneración, se forman plantas. En la mayoría de casos se
producen plantas haploides estériles, pero en algunas especies ocurre una duplicación espontánea
de los cromosomas en las etapas de desarrollo del callo y de regeneración de la planta (Roca,
Núñez, & Mornan, 1991).
Esta capacidad hace que el cultivo de anteras sea adoptado como un sistema de micropropagación
de plantas en muchos cultivos frutivinicolas y ornamentales (Carloni, 2016). Así como, un
método de fitomejoramiento de diferentes variedades; ahorrando espacio, tiempo y costos (Reyes,
Celi, & Arana, 2012).
Existen algunos factores relevantes en el éxito del cultivo de anteras como: El estado de desarrollo
del polen al iniciarse el cultivo, ya que en estudios comparativos y en la práctica se ha determinado
que la etapa de desarrollo del polen comprendida entre el estado uninucleado medio y el
binucleado tardío es la óptima para asegurar una respuesta exitosa; El estado fisiológico de la
planta donde la efectividad del cultivo se incrementa si las anteras son extraídas de los botones
de las primeras floraciones (Lentini, Reyes, Martínez, Núñez, & Roca, 1994).

Otros factores son: El genotipo, las condiciones ambientales, el tratamiento de la antera antes del
cultivo, la pared de la antera, el medio de cultivo, las condiciones físicas de incubación de las
anteras (Lentini, Reyes, Martínez, Núñez, & Roca, 1994).

La Cucarda (Hibiscus rosa - sinensis L.) es una especie ornamental popular, valorada por sus
grandes flores efímeras de colores brillantes y una amplia gama de propiedades promotoras de la
salud (Trivellini, Ferrante, & Hunter, 2015).

https://revistas.unal.edu.co/index.php/refame/article/viewFile/28312/28666

https://books.google.com.ec/books?id=dXQaR_WROjsC&pg=PA14&lpg=PA14&dq=citoquini
nas+presentes+en+los+granos+de+polen+y+anteras&source=bl&ots=oi6XRKW4RM&sig=0zlr
hyKG2o2HluqczedtesJ0AaQ&hl=es&sa=X&ved=0ahUKEwjysuXAk6PZAhUC7VMKHSdiA
UoQ6AEIRTAJ#v=onepage&q=citoquininas%20presentes%20en%20los%20granos%20de%20
polen%20y%20anteras&f=false

https://books.google.com.ec/books?id=i5zRon0BiucC&pg=PA14&lpg=PA14&dq=citoquininas
+presentes+en+los+granos+de+polen+y+anteras&source=bl&ots=zuR7JCl0Xj&sig=wENf_9zJ
tKOwDcru6192Iod3lgE&hl=es&sa=X&ved=0ahUKEwjysuXAk6PZAhUC7VMKHSdiAUoQ6
AEIRzAK#v=onepage&q=citoquininas%20presentes%20en%20los%20granos%20de%20polen
%20y%20anteras&f=false
https://books.google.com.ec/books?id=WHmjAwAAQBAJ&pg=PA303&lpg=PA303&dq=cito
quininas+presentes+en+los+granos+de+polen+y+anteras&source=bl&ots=vbOhBOnR0c&sig=
GHfBBkAXYBRQy7yS0XTACOQcNLw&hl=es&sa=X&ved=0ahUKEwjysuXAk6PZAhUC7
VMKHSdiAUoQ6AEISTAL#v=onepage&q=citoquininas%20presentes%20en%20los%20gran
os%20de%20polen%20y%20anteras&f=false

https://books.google.com.ec/books?id=xmqSE-
VSGLgC&pg=PA13&lpg=PA13&dq=citoquininas+presentes+en+los+granos+de+polen+y+ant
eras&source=bl&ots=GWCdmPPRNB&sig=_tRD6aSxOBJ8AuQOf5pkDCJ7Jbc&hl=es&sa=X
&ved=0ahUKEwjysuXAk6PZAhUC7VMKHSdiAUoQ6AEITjAM#v=onepage&q=citoquinina
s%20presentes%20en%20los%20granos%20de%20polen%20y%20anteras&f=false

http://www.saber.ula.ve/bitstream/123456789/35671/1/articulo3.pdf

https://books.google.com.ec/books?id=i5zRon0BiucC&pg=PA26&lpg=PA26&dq=hormonas+p
resentes+en+la+pared+celular+de+las+anteras&source=bl&ots=zuR7JCp0Sl&sig=Bc6UvH7qtf
D7W7czbjfcMaI_aNs&hl=es&sa=X&ved=0ahUKEwjSwPKcoqPZAhXKrFkKHYtvBfwQ6AE
IMzAB#v=onepage&q=hormonas%20presentes%20en%20la%20pared%20celular%20de%20la
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