UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CENTRO DEL PERU

LABORATORIO DE CONTROL DE CALIDAD

M.S.c. Br. Luis Artica Mallqui

Evaluación de polifenoles

Método de medida de preparación de patrones y de muestras.

a) Preparación de patrones
Atendiendo a la solubilidad de los patrones de polifenoles que se van a analizar, casi
todos* se prepararan a una concentración de 1mg/10mL en agua, excepto aquellos no
solubles en agua que se disolverán en metanol (el ácido elágico, el resveratrol y la
galoepicatequina-3-galato, quercetina). La preparación de cada uno de los patrones
analizados queda expuesta en la tabla 4.3.

Se analiza también el patrón del ácido ascórbico, que se prepara en agua y a la

concentración de los patrones anteriormente mencionados (1mg/10ml).

*El resveratrol y la galoepicatequina-3-galato, quercetina se preparan a una

concentración de 1 mg/ml.

Las cantidades correspondientes de cada compuesto se pesarán en balanza de

precisión, se disolverán con ayuda de un agitador magnético y se llevarán al volumen
correspondiente haciendo uso de un matraz aforado cuando corresponda.
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Preparación de las muestras:

Para su análisis, unos 30 minutos antes, se sacan del congelador y se dejan

descongelar completamente a temperatura ambiente. Una vez descongelados se
Homogeneizan y se cogen 10 ml de cada una de las muestras para su posterior análisis.

Estos zumos se diluyen 5 veces con agua y, antes de analizarse, se filtran

aproximadamente 2 ml de muestra a través de filtros de nylon de 0,45 μm para eliminar
las posibles partículas que puedan quedarse retenidas en la columna cromatográfica y
obturarla.

Condiciones del análisis por HPLC con detector de arreglo de diodos.

Las condiciones del método de trabajo consisten en:
Fase móvil A: Agua/metanol (99,5/0,5) (v/v)
Fase móvil B: Agua/acetonitrilo/metanol (49,5/50/0,5) (v/v/v)
Flujo: 1 mL/min
Volumen de inyección: 10 μl de cada muestra de frutos rojos.
Cuidados de la columna: limpieza con acetonitrilo, pues no se debe conservar la
Columna en medio ácido.