INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS

BIOLÓGICAS

MÉTODOS DE ANÁLISIS

VERIFICCIÓN DEL FUNCIONAMIENTO DE UN

ESPECTROFOTOMETRO.

ALUMNO: RÍOS GARCÍA BERTARIO

GRUPO: 4IV1

SECCIÓN: 3
 OBJETIVO
Comprobar el rendimiento y funcionamiento de nuestro espectrofotómetro.

FUNDAMENTO.
La espectrofotometría es uno de los métodos de análisis más usados, y se basa en
la relación que existe entre la absorción de luz por parte de un compuesto y su
concentración. Cuando se hace incidir luz monocromática (de una sola longitud de
onda) sobre un medio homogéneo, una parte de la luz incidente es absorbida por el
medio y otra transmitida.
Cada sustancia tiene su propio espectro de absorción, el cual es una curva que
muestra la cantidad de energía radiante absorbida, Absorbancia, por la sustancia
en cada longitud de onda del espectro electromagnético, es decir, a una
determinada longitud de onda de la energía radiante, cada sustancia absorbe una
cantidad de radiación que es distinta a la que absorbe otro compuesto.

RESULTADOS
Exactitud de la escala de longitud de onda
1) Método del filtro de tierras raras (Didimio)

Tabla 1. Espectro de transmisión del filtro de didimio

Longitud de onda [nm] %T Longitud de onda [nm] %T

400 43 500 55.5
410 53 510 43
420 56 520 31
430 51 530 31
440 46 540 48
450 47 550 65
460 47 560 66.5
470 49.5 570 36
480 49 580 13

ESPECTRO DE TRANSMISIÓN DEL FILTRO DE

DIDIMIO
80
70
60
%TRANSMITANCIA

50
40
30
20
10
0
370 380 390 400 410 420 430 440 450 460 470 480 490 500 510 520 530 540 550 560 570 580 590 600
LONGITUD DE ONDA

Gráfica 1. Espectro de transmisión del filtro de didimio

 490 57 590 7
En la gráfica anterior se muestran los picos y valles, los cuales representan los
máximos y mínimos, respectivamente, del espectro de absorción del filtro de
didimio.
1) Método de la solución de estándar (NiSO4*6H2O al 20%)

Tabla 2. Espectro de transmisión de la solución de NiSO4*6H2O al 20%

Longitud de onda %T Longitud de onda %T

(nm) (nm)
380 4 490 83
390 3.5 500 86.5
400 3.5 510 86
410 4.5 520 83
420 8 530 80
430 17 540 76
440 30.5 550 72
450 42 560 67
460 52.5 570 60
470 65 580 52
480 76 590 43

Espectro de transmición de la solución de NiSO4

(20%)
100
90
80
Transmitancia.

70
60
50
40
30
20
10
0
300 350 400 450 500 550 600 650
Longitud de onda

Gráfica 2. Espectro de transmisión de NiSO4

Observamos que en la anterior gráfica tenemos un máximo de absorción a 500 nm,

esto representa la longitud de onda con la mayor sensibilidad posible y por lo tanto
es el punto en el cual se realizará para el análisis espectrofotométrico del compuesto
de sulfato de níquel hexahidratado.
El método de filtro de didimio presenta mayor ventaja contra el de la solución de
sulfato de níquel, debido a que existe una mayor cantidad de máximos y mínimos
conocidos, teniendo así una mayor certeza en el análisis realizado, sin embargo,
posee la desventaja que dicho filtro es bastante caro pues es un filtro con una
certificación que garantiza los resultados emitidos por el aparato.

Proporcionalidad fotométrica
Tabla 3. Proporcionalidad entre A y longitud de onda para el NiSO46H2O al 20%

Longitud de onda (nm) Absorbancia

530 0.1
540 0.28
550 0.25
560 0.225
570 0.38

Absorbancia.
0.4
0.35
0.3
Absorbacia.

0.25 y = 0.0051x - 2.5305

0.2 R² = 0.6238

0.15
0.1
0.05
0
525 530 535 540 545 550 555 560 565 570 575
Longitud de onda.

Gráfica 3. Proporcionalidad fotométrica

A partir de la regresión lineal realizada con los datos anteriores se obtuvieron los siguientes
datos de la ecuación de la recta:
 m: 0.0051
 a: -2.5305
 r2: 0.6238
 r: 0.7898

Intervalo dinámico lineal de concentración

Tabla 4. Intervalo dinámico lineal de la concentración

Tubo Concentración A400

a a’ de NiSO4*6H2O [M] Serie a Serie b
 1 1’ 0 0 0
2 2’ 0.0095 0.045 0.05
3 3’ 0.0285 0.115 0.155
4 4’ 0.0665 0.25 0.25
5 5’ 0.1045 0.37 0.41
6 6’ 0.1425 0.5 0.5
7 7’ 0.1520 0.515 0.525
8 8’ 0.1710 0.58 0.59
9 9’ 0.1805 0.61 0.605
10 10’ 0.1900 0.64 0.64

Curva de calibración del NiSO4*6H2O

0.7

0.6

0.5
Absorbancia

0.4 y = 3.216x + 0.0349

R² = 0.9953
0.3

0.2

0.1

0
0 0.02 0.04 0.06 0.08 0.1 0.12 0.14 0.16 0.18 0.2
[NiSO4*6H2O]

Gráfica 4. Curva de calibración de sulfato de níquel

A continuación, se muestran los resultados obtenidos de forma general.

Tabla 5. Resumen de los resultados de la evaluación del funcionamiento del espectrofotómetro

Parámetro estudiado Valores de Valores Conclusión
referencia experimentales
EXACTITUD DE LA ESCALA Máximo (λ, nm) Máximo (λ, nm) El aparato tiene
DE LONGITUD DE ONDA similitud con las
400, 420, 500 & 400,460, 500, 550 longitudes de onda de
1.Filtro de didimio 550 referencia, son
Máximo (λ, nm) similares pero no
Mínimo (λ, nm) Mínimo (λ, Mínimo (λ, nm) iguales por lo que se
nm)470, 520, 450, 470, 520, 580 considera que un
570-600 cambio en la fuente de
luz solucionaría las
diferencias.
2.Soluciónde NiSO46H2O al Máximo (λ, nm) Máximo (λ, nm)
20% 500 500
Máximo (λ, nm) Mínimo (λ, nm) Mínimo (λ, nm)
Mínimo (λ, nm) 380-400, 590 390-400, 590

PROPORCIONALIDAD a=-1.5779 a: -2.5305 De acuerdo al

FOTOMÉTRICA b=0.0032 b: 0.0051 coeficiente de
Datos de la regresión lineal de r=0.9890 r: 0.7898 correlación y
530 a 570 nm. r2=0.979 r2: 0.6238 determinación, no
existe una linealidad y
por lo tanto no cumple
la ley de Bouger y
Beer, por lo que el
detector presenta un
problema, o tuvimos
un error durante el
experimento,
arrojándonos datos
erróneos.
LUZ DISPERSA Solución de No existe luz parásita
 %T a 400 nm <3% T NiSO46H2O al 20%. en el aparato evaluado
(solución de 410 nm: 3 % T debido a que los
NiSO46H2O al 20%) valores de
Transmitancias se
 %T a 450 nm Filtro de 325- encuentran dentro del
405 intervalo de referencia.
1% T 450 nm: 0% T
 %T a 500 nm Filtro de 600-
900
1% 500nm: 0% T

ANCHO DE BANDA 87% T+-3% 87% T El ancho de banda es

 %T A 500 nm adecuado en el
aparato según el valor
de referencia, por lo
que las resoluciones
de los espectros
emitidos son
adecuadas para un
análisis, indicando que
el monocromador
 funciona
adecuadamente.

EXACTITUD La exactitud del

FOTOMÉTRICA espectrofotómetro, no
1.metodo del filtro de vidrio es adecuada.
neutro 84% T +- 5% 92% T
 %T a 530 nm

2.metodo de la solución de
NiSO46H2O al 20%
 Absorbancia a 400 1.98 1.50
nm 0.028 0.06
 Absorbancia a 500
nm
INTERVALO DINÁMICO a=0.0042 a=-0.0349 El intervalo es lineal de
LINEAL DE b=4.68 b=3.216 0.01 y 0.19 M
CONCENTRACIÓN r≥0.9999 r=0.9976
 Datos de la regresión r2=0.9995 r2=0.9963
lineal
 Intervalos de
concentración

PREGUNTAS EXTRAS
Señale dos causas que originen:
 Luz extraña
o Azotar fuertemente la tapa dónde se coloca la celda.
o Colocar el aparato en un lugar con demasiada exposición a la luz
 Cambio en el ancho de banda
o Acumulación de polvo dentro del espectro
 Alteración de la respuesta relativa o rendimiento instrumental
o Utilizar celdas con ralladuras
o No darle un mantenimiento constante al aparato

DISCUSIONES
La evaluación del funcionamiento de un espectrofotómetro nos permite determinar
si dicho aparato se encuentra en condiciones de realizar análisis con resultados
confiables.
La exactitud de la escala en la longitud de onda nos permite conocer el
funcionamiento del monocromador, para ello empleó un patrón de referencia
certificado, filtro de didimio, el cual presenta bandas de absorción estrechas
(máximas o mínimas) y conocidas. De igual forma se utilizó una solución patrón de
NiSO4 l 6H2O al 20%, al comparar los resultados experimentales con los resultados
teóricos de las absorbancias máximas y mínimas de los patrones de referencia se
puede observar que las longitudes de onda coinciden en su mayoría, por lo que se
puede emitir un resultado en el que el monocromador funciona adecuadamente.
Para el análisis de proporcionalidad fotométrica se graficó la absorbancia obtenida
a partir de la transmitancia de la disolución de NiSO4*6H2O al 20% y la longitud de
onda de 530 a 570 nm. A partir del gráfico y el valor del coeficiente de correlación
linear (r= 0.7898) se determina que no existe una relación lineal entre la absorbancia
y la longitud de onda, por lo tanto, la lectura emitida por el espectrofotómetro es
incorrecta ya que hay algún problema en el detector, debido a que la radiación (en
forma de fotones) que llega al detector, no es proporcional a la energía (en forma
de electrones) que se transmiten y que el aparato registra y da lectura, o pudo haber
sido un error por nuestra parte como analistas.

La Luz dispersa es toda radiación electromagnética de longitud de onda distinta a

la seleccionada por el monocromador y para verificar la ausencia de esta se colocó
el filtro de didimio con su cara posterior, para así impedir el paso de luz emitida por
la fuente dando como resultado 0% de transmitancia a 450 y 0.1%T a 500, por lo
que podemos decir que el aparato no presenta fuentes de luz parásita.

El resultado obtenido para la evaluación del ancho de banda cae dentro del intervalo
de referencia, por lo que nos indica que existe diferencia entre la longitud de onda
máxima y mínima de longitudes de onda que salen del monocromador y que alcanza
al menos el 50% de transmitancia máxima de esta banda de radiación y este
fenómeno acurre en el monocromador por lo que no hay problema en él.

Por otro lado en la prueba de exactitud fotométrica el resultado no se encuentra

dentro del intervalo de confianza, por lo que se determina que no hay exactitud en
el aparato, esto se debe a que nuestro aparato es muy antiguo, fue de los primeros
espectrofotómetros.

En el intervalo dinámico lineal de concentración se evalúa la fuente de radiación, el

detector, el monocromador y al analista mismo y dado que el coeficiente de
correlación es de 0.9976 se determina que no existe un correcto funcionamiento del
aparato, o que tuvios un error por nuestra parte.

CONCLUSIONES
 El espectrofotómetro evaluado durante la práctica no se encuentra en
condiciones para utilizarlo.
 La verificación periódica del funcionamiento del espectrofotómetro aumenta
la confiabilidad de los resultados reportados.
 La evaluación del funcionamiento de un espectrofotómetro nos permite
evaluar al mismo tiempo al analista que realiza las determinaciones
analíticas.
 Es indispensable utilizar patrones certificados para asegurar la exactitud de
los resultados.
BIBLIOGRAFÍA
 Skoog, D. A., Holler, J. H., Nieman, T. A. “Principios de Análisis
Instrumental”, 5a Edición. McGraw Hill. Madrid, España. 2001. (p.p 1028-
1029)
 Rubinson, K. A., Rubinson, J. F. “Análisis Instrumental”. Pearson Educación,
S.A. Madrid, España, 2001. (p.p 845-847)