METABOLISMO CELULAR: PROCESO DE RESPIRACIÓN CELULAR

Posteriormente a los mecanismos de nutrición y digestión celular, las células usan

las moléculas producto de estos procesos como fuente para la elaboración de
energía que es necesaria para la actividad celular, para lo cual pasan procesos
como la desaminación de los aminoácidos, la beta-oxidación de los ácidos grasos y
la glucólisis que tienen como objetivo la formación de ácido pirúvico y otras
moléculas necesarias para los proceso de respiración celular. El ácido pirúvico
obtenido de estos procesos, principalmente de la glucólisis, puede dependiendo del
individuo y del medio en el cual se encuentra ir a dos rutas metabólicas:
La ruta aeróbica denominada también catabolismo aerobio degradándose
completamente hasta CO2 y agua, este mecanismo se realiza en las mitocondrias
que actúan como centrales energéticas de la célula y sintetizan ATP producto de
esta degradación.
La otra ruta mencionada es el proceso anaeróbico llamada también catabolismo
anaeróbico, que en ausencia de oxígeno transforma el ácido pirúvico en otras
moléculas degradándose parcialmente, esta ruta tiene dos procesos más
estudiados: el catabolismo láctico que por acción de la lactato deshidrogenasa se
transforma en ácido láctico y la vía alcohólica donde el ácido pirúvico se
descarboxila formando un acetaldehído y este es reducido por acción del NADH a
alcohol etílico.

Este último tipo de fermentación la realizan algunas especies de levaduras como la

Saccharomyces cerevisae que son utilizadas en la industria de la panificación y en
la industria cervecera, estas levaduras tienen la capacidad de poder realizar los dos
tipos de respiración dependiendo de la abundancia de nutrientes en el medio,
cuando se encuentran en un medio rico en carbohidratos escogen la ruta
anaeróbica.
En la presente práctica, utilizando un respirómetro artesanal, se observará la acción
de diferentes carbohidratos como facilitadores en el proceso de respiración celular
anaeróbica y la acción de un antimetabolito que interferirá en el proceso de
respiración celular inhibiendo una de las etapas de la glucólisis.
La acción del inhibidor sobre la respiración celular: La enzima enolasa cataliza la
reacción que convierte el 2 fosfoglicerato (2PG) en fosfoenolpiruvato (PEP), la
enolasa para reaccionar requiere de la presencia de iones de magnesio que
mantiene su estructura y de iones manganeso como cofactor. En el siguiente
experimento se usará el flúor para precipitar los iones magnesio y así inhibir la
reacción. Esta inhibición se puede detectar como una disminución en la velocidad
del proceso respiratorio, (disminución en la producción del CO2) en las células de
levadura. Debido a que los fluoruros son extremadamente venenosos para los
humanos, maneje las soluciones con sumo cuidado en este ejercicio y asegúrese
de lavarse las manos tan pronto como termine.

MATERIALES:
MATERIALES DEL LABORATORIO
• 9 Tubos de ensayo pequeños • 3 mL de NaF 0.01 molar
• 9 Tubos de base grandes • 3 mL de NaF 0.10 molar
• Agua destilada • Pipetas
• Solución de glucosa al 5% • Gradilla
• Solución de fructosa al 5% • Varilla de vidrio
• Solución de sacarosa al 5% • Plumón marcador para vidrio
• Solución de almidón al 5% • Incubadora a 37°C

MATERIALES DEL ESTUDIANTE

• Levaduras seca
• Regla milimetrada
PROCEDIMIENTO
 Fabricación de un Respirómetro artesanal
Para construir un respirómetro simple, siga las siguientes instrucciones: llene con
agua uno de los pequeños tubos de ensayo (en el experimento se usa la suspensión
de levaduras y las otras sustancias en lugar de agua). Invierta el tubo de ensayo
sobre el tubo de base plana. Hágalo rápidamente, de tal manera que se derrame la
menor cantidad posible de líquido del tubo de ensayo. Si hay burbuja de aire, se
mide con la regla graduada en milímetros; si éste contiene células de levadura
respirando, el dióxido de carbono tenderá a acumularse desplazando así más
líquido. Después de un rato, el volumen de la cámara de aire constituye una medida
de la cantidad de respiración que haya tenido lugar.
Preparación de las muestras experimentales
1. Preparación de muestras utilizando diferentes carbohidratos
Rotule los tubos de ensayo numerándolos del 1 al 5 por el lado curvo, manténgalos
boca abajo mientras inscribe el número. Llénelos como se indica en la siguiente
tabla:
REACTIVO 1 2 3 4 5
Levadura 3 mL 3 mL 3 mL 3 mL 3 mL
Agua 5 mL
destilada
Glucosa 5 mL
Fructosa 5 mL
Almidón 5 mL
Sacarosa 5 mL

2. Preparación de muestras utilizando antimetabolitos

Rotule los tubos de ensayo numerándolos del 1 al 5 por el lado curvo, manténgalos
boca abajo mientras inscribe el número. Llénelos como se indica en la siguiente
tabla:
REACTIVO 1 2 3 4
Levadura 3 ml 3 mL 3 mL 3 mL
Agua 5 mL
destilada

Glucosa 5 mL 2 mL 2 mL
Naf (0,01 M) 3 mL
Naf (0,10 M) 3 mL
RESULTADOS

TUBO Longitud inicial Longitud Final (L. Final-L. Inicial)

(mm) (mm) (Producción de
CO2)

Tubo 1 50 50 0
Tubo 2 70 160 90
Tubo 3 60 100 40
Tubo 4 55 100 45

Tubo PROCEDIMIENTO RESULTADO

1 Se agregó 3 ml de levadura y 5 ml En esta muestra no se observó
de agua destilada en un tubo de desplazamiento
ensayo, luego este se invierte
sobre un tubo base para tener un
respirometro artesanal. Luego se
llevó a una incubadora a 37ºC
durante una hora
2 Se agregó 3 ml de levadura y 5 ml En esta muestra se pudo observar
de glucosa en un tubo de ensayo, un desplazamiento de 90 mm
luego este se invierte sobre un (mayor a las otras muestras)
tubo base para tener un
respirometro artesanal. Luego se
llevó a una incubadora a 37ºC
durante una hora
3 Se agregó 3 ml de levadura, 2 ml En esta muestra se pudo observar
de glucosa y 3 ml de Naf (0,01 M) un desplazamiento de 40 mm.
en un tubo de ensayo, luego este
se invierte sobre un tubo base
para tener un respirometro
artesanal. Luego se llevó a una
incubadora a 37ºC durante una
hora
4 Se agregó 3 ml de levadura, 2 ml En esta muestra se pudo observar
de glucosa y 3 ml de Naf (0,10 M) un desplazamiento de 45 mm.
en un tubo de ensayo, luego este
se invierte sobre un tubo base
para tener un respirometro
artesanal. Luego se llevó a una
incubadora a 37ºC durante una
hora
ANALISIS Y DISCUSION DE RESULTADOS

 En el 1mer tubo (levadura y agua destilada) (control negativo) en esta

muestra no se pudo observar el desplazamiento del tubo de ensayo, ya que
el agua destilada no posee carbohidratos, los cuales se degradarían
mediante la respiración de la levadura, generando a su vez CO2. Lo cual no
ocurrió en esta experiencia.

GLUCÓLISIS
La glucólisis, lisis o escisión de la glucosa, tiene lugar en una serie de nueve
reacciones, cada una catalizada por una enzima específica, hasta formar dos
moléculas de ácido pirúvico, con la producción concomitante de ATP. La
ganancia neta es de dos moléculas de ATP, y dos de NADH por cada
molécula de glucosa.
Entonces:
 En el 2do tubo (levadura y glucosa) en esta muestra se pudo un mayor
desplazamiento del tubo de ensayo, ya que se produce la respiración celular
degradando a la glucosa, esta genera gran cantidad de CO2 produciendo
dicho desplazamiento.

INHIBIDOR ENZIMATICO
Los inhibidores enzimáticos son moléculas que se unen a enzimas y
disminuyen su actividad. Puesto que el bloqueo de una enzima puede matar
a un organismo patógeno o corregir un desequilibrio metabólico, muchos
medicamentos actúan como inhibidores enzimáticos.
INHIBIDOR NAF
El fluoruro inhibe la glicólisis, con acumulación de 2PG y 3PG, al inhibir
fuertemente la enolasa en presencia de Pi. Se ha demostrado que el F- y el
Pi forman un complejo con el catión divalente en el sitio activo de la enzima,
lo que afecta la reacción catalizada.
 En el 3 tubo (levadura, glucosa y Naf 0,01 M) en esta muestra se observó
menor desplazamiento del tubo de ensayo, no como la segunda experiencia,
esto se debió por la acción del NAF (inhibidor) en este caso no se llevó a
cabo el proceso de fermentación, esto se debe a que el ion fluoruro actúa
como inhibidor de la enolasa.
 En el 4 tubo (levadura, glucosa y Naf 0.10 M) en esta muestra se observó
menor desplazamiento del tubo de ensayo, no como la segunda experiencia,
esto se debió por la acción del NAF (inhibidor) en este caso no se llevó a
cabo el proceso de fermentación, esto se debe a que el ion fluoruro actúa
como inhibidor de la enolasa.
  En el 3 y 4 tubo, el NAF impide la glucolisis, y como resultado no hay
presencia de CO2.

CONCLUSIONES
 La respiración celular es el proceso por el cual las células degradan
moléculas de los alimentos para obtener energía, mediante vías catabólicas
y anabólicas.
 Se pudo observar que la fermentación alcohólica tiene como resultado etanol
o alcohol etílico y CO2, observamos el desplazamiento de la cantidad de CO2
liberada en este proceso, con ayuda de Levadura y Carbohidratos como la
glucosa.
 Las reacciones catabólicas degradan las moléculas de los alimentos
mediante vías oxidativas y liberan energía. Las reacciones anabólicas
generan las diferentes moléculas complejas que necesitan las células y
requieren aporte de energía.
 Las ATP, NADH Y NADPH, desempeñan un papel central en el metabolismo.
El ATP transporta grupos fosfatos ricos en energía, mientras que el NADH Y
NADPH transportan electrones de alta energía.
 La velocidad a la que una enzima cataliza una reacción uniéndose a las
moléculas de un sustrato particular, de modo que no disminuyen la energía
de activación necesaria para formar y rompe enlaces covalentes específicos.

BIBLIOGRAFIA
1. Alberts B. Introducción a la biología celular.3° ed. México: Editorial Medica
Panamericana. 2011. p.82-114.
2. Rojas-Sánchez Fátima, Lalaguna Fernando, Infante Yanira, Acevedo Ana
Maria. Efecto inhibitorio del nonanoato de potasio y el fluoruro de sodio en la
acidogenicidad de la placa dental humana in vitro: Nonanoato de Potasio y
Fluoruros como inhibidores de la placa dental. Acta odontol. venez [Internet].
2000 Jun [citado 2016 Mayo 26] ; 38( 2 ): 27-32. Disponible en:
http://www.scielo.org.ve/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0001-
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