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CUESTIONARIO PRÁCTICA 9
1.Qué valores de DO600 obtienes en los pre-cultivos saturados, en su dilución inicial 1:20, y
en el momento de inducir los cultivos? Estima el tiempo de duplicación del cultivo en esta
condiciones optimas.
2.Discute los motivos por los que se realiza la dilución 1:20, por qué la inducción con IPTG se
hace cuando el cultivo alcanza una DO600 de 0,3-0,5, y por qué la inducción se realiza a 25
grados y no a 37 grados.
absorbancia que se obtiene en someter las muestras al espectròmetro, se obtienen unos valores
fuera del limite de detección , es decir, no se puede fijar un valor de absorbáncia. La inducción
con IPTG se hace cuando el cultivo alcanza una D600 en este rango porque se considera que
entre estos valores, el cultivo se encuentra en fase de crecimiento , es decir, es la fase en que se
obtienen medidas más precisas. También, se realiza la inducción a 25 grados y no a 37 para evitar
química en la fase estacionaria, de la fase móvil, y de los compuestos lípidos que queremos
separar , así como las interacciones que se dan entre ellos durante su separación
cromatografica.
componentes de una mezcla. Se basa en el reparto de cada compuesto entre una fase móvil y
una fase estacionaria. El reparto se produce sobre la fase estacionaria, que tiende a retener el
una mezcla de disolventes (eluyente). El eluyente se selecciona de acuerdo con los lípidos que se
desean separar: los lípidos neutros se separan con eluyentes apolares y los lípidos cargados con
eluyentes polares. Cada lípido migra a una distancia característica en función de su polaridad que
4. Cómo explicas el patrón de manchas en la TLC obtenido en la cepa de E.coli que expresa
qué tipo de sustancias lipídicas corresponde cada una de las manchas de la TLC? Qué
1 2 3 4 5 6
1. lípido
2 lípido
3 lípido
4 glicoglicerolipido
5 glicoglicerolipido
6 glicoglicerolipidos
7. triaciglicerido
diferenciadas: por una parte, en la parte superior (mas alejada de la linia de carga) se
distinguir dos tipos de manchas. Las 3 primeras, se trata de las 3 muestras de E.coli
siguientes, E.coli tenia el plasmido incorporado y las manchas tienen lugar a dos alturas en
la misma linea, es decir, hay presencia de glicoglicerolipidos, y no solo de lípidos como las
sempre i quan sigui transferit a traves d’un plasmid artificialment, és a dir, E.coli no es
por qué los distintos lípidos de la muestra presentan distintas coloraciones en la TLC?
El revelado universal de la TLC con ácido sulfúrico se basa en la degradación que provoca
presente la biomolecula en cuestion, será degradada con mayor o con menor efectividad,
es decir, obtendrá mas coloración o menos dependiendo de la facilidad del acido para
(sistema heterólogo).