CURSO DE

BIOTECNOLOGÍA
DIRIGIDO A CIENCIAS AGRARIAS
Carlos Condemarín Montealegre MSc.
Cerca de 10.000 años antes de Cristo , la gente recolecta sus alimentos de la diversidad biológica natural que los
rodeaba, y, finalmente, cultivos y animales domesticados . Durante el proceso de domesticación , la gente comenzó a
seleccionar mejores materiales vegetales para la propagación y los animales de cría, en un principio, sin saberlo, pero
en última instancia, con la intención de mejorar los cultivos alimentarios y ganado.
El objetivo de los genetistas modernos es el mismo que el de los primeros agricultores:
producir cultivos o animales superiores. El mejoramiento convencional, basado en la
aplicación de los principios genéticos clásicos relativos al fenotipo o características físicas
del organismo en cuestión, ha logrado introducir en cultivares o razas de animales
características procedentes de variedades domesticadas o silvestres afines o de mutantes.
A través de los siglos , la tecnología agrícola desarrollado un amplio espectro de opciones para la
comida , la alimentación y la producción de fibra. Todo el mundo está familiarizado con la forma de
transporte ha cambiado con el tiempo a ser más eficiente y seguro. La agricultura también ha sufrido
grandes cambios. Por ejemplo, en 1870 , el 53 % de esta población se involucró en la agricultura ; en
2000, y sólo el 1,8 % de la población participó en la agricultura.
Feeding the World
By 2050 we’ll need to feed two billion more people. How
can we do that without overwhelming the planet?
La biotecnología agrícola es un conjunto de
técnicas científicas utilizadas para mejorar las
plantas, animales y microorganismos. Sobre
la base de una comprensión de ADN, los
científicos han desarrollado soluciones para
aumentar la productividad agrícola. A partir
de la capacidad de identificar los genes que
pueden conferir ventajas en ciertos cultivos,
y la capacidad de trabajar con tales
características de forma muy precisa, la
biotecnología aumenta la capacidad de
ganaderos para hacer mejoras en los cultivos
y el ganado. Biotecnología permite mejoras
que no son posibles con cruce tradicional de
especies relacionadas.
Las plantas y su entorno
Las plantas han evolucionado con éxito la integración de diversas señales del medio ambiente
en sus programas de desarrollo. Ya que no pueden escapar de las limitaciones adversas, se
han visto obligados a contrarrestar mediante la obtención de diversas respuestas fisiológicas,
bioquímicas y moleculares.
Las plantas y su entorno
Estas respuestas incluyen o conducen a cambios en la expresión génica, la regulación de
la cantidad o actividad de la proteína, alteración de los niveles de metabolitos celulares,
y los cambios en la homeostasis de iones. La regulación génica a nivel de la transcripción
es una de las principales puntos de control en los procesos biológicos, y factores de
transcripción y reguladores desempeñan un papel clave en este proceso.
La mayoría de las personas no se dan cuenta de que entre los avances de la
agricultura temprana, realmente está en la génesis de la tecnología agrícola ,
los antiguos egipcios hicieron vino e hizo el aumento de masa para el pan,
utilizando la fermentación.
Un acontecimiento importante en el
desarrollo de la agricultura se produjo en
1492 con la introducción del maíz,
originario de las Américas, con el resto del
mundo, y los productores europeos
adaptó la planta a sus condiciones únicas
de crecimiento.
Mendel estableció las leyes de la
herencia estudiando chicharos

Los agricultores empezado a realizar la mejora selectiva

de los cultivos antes de tener un conocimiento profundo
de la base de la genética . Los descubrimientos de Gregor
Mendel que explican cómo los rasgos pasan de padres a
hijos arrojaron una nueva luz sobre el asunto . El trabajo
de Mendel mostró que los genes se separan durante la
formación de gametos , y se unen al azar durante la
fertilización ; también mostró que los genes se transmiten
independientemente uno de otro a la descendencia .
En el fitomejoramiento tradicional , las nuevas variedades se desarrollan, ya sea por la
selección de plantas con características deseables o mediante la combinación de las
cualidades de dos plantas estrechamente relacionadas con la mejora selectiva . Estas
características pueden ser por ejemplo la resistencia a una plaga o enfermedad en
particular, o tolerancia a las condiciones climáticas .
Fitomejoramiento
tradicional
ha producido numerosas variedades nuevas de gran
éxito de los cultivos durante los siglos.
Mejoramiento clásico con mutación inducida
Las mutaciones producen cambios en la composición genética de una planta. Las
mutaciones ocurren naturalmente y, a veces resultan en el desarrollo de nuevos rasgos
beneficiosos. En 1940, los fitomejoradores aprendieron que podían hacer que las
mutaciones ocurren más rápidamente con un proceso llamado mutagénesis. Radiación o
productos químicos se utilizan para cambiar el ADN de la planta.
Mejoramiento clásico con mutación inducida
Más de 2.500 variedades de plantas (incluido el arroz , el trigo , el pomelo , la lechuga y
muchas frutas ) se han desarrollado utilizando radiación mutagénica (FAO / OIEA ,
2008) . Mejoramiento por mutación inducida fue ampliamente utilizado en los Estados
Unidos durante la década de 1970 , pero hoy en día pocas variedades son producidas
con esta técnica.
ADN de los progenitores se
recombina de forma aleatoria , y
los rasgos deseables, tales como
resistencia a las plagas puede
ser combinado con los rasgos
indeseables , como el
rendimiento más bajo o de baja
calidad. Las plantas madres
deben estar estrechamente
relacionados para producir
descendencia . Programas de
mejoramiento tradicionales
requieren mucho tiempo , a
menudo tomando décadas para
producir nuevas variedades de
cultivos viables , y mano de
obra. Se requiere una gran
cantidad de esfuerzo para
separar indeseable de rasgos
deseables , y esto no siempre es
económicamente práctico
En la actualidad…
el mejoramiento de plantas es un proceso multidisciplinario y
coordinado, donde una gran número de herramientas y elementos de la
mejora tradicional, bioinformática, biología molecular e ingeniería
genética son utilizados e integrados.
 Ó ?

Las vacunas
Orales han sido en las obras durante muchos años como una posible solución a la propagación de la
enfermedad en los países subdesarrollados, donde los costos son prohibitivos para la vacunación generalizada.
Los cultivos genéticamente modificados, por lo general las frutas o verduras, destinados al transporte de las
proteínas antigénicas de los agentes patógenos infecciosos, que desencadenarán una respuesta inmune
cuando ingeridos. Un ejemplo de esto es una vacuna específica del paciente para el tratamiento de cáncer. Una
vacuna contra el linfoma se ha realizado utilizando plantas de tabaco que llevan ARN de las células B malignas
clonados. La proteína resultante se utiliza a continuación para vacunar al paciente y mejorar su sistema
inmunológico contra el cáncer. Vacunas a medida para el tratamiento del cáncer han mostrado considerable
promesa en estudios preliminares.
Flores
Hay más en la biotecnología agrícola no sólo la lucha contra la enfermedad o mejorar la
calidad de los alimentos. Hay algunas aplicaciones puramente estéticas y un ejemplo de
esto es el uso de la identificación de genes y técnicas de transferencia para mejorar el color,
olor, tamaño y otras características de las flores. Del mismo modo, la biotecnología se ha
utilizado para hacer mejoras en otras plantas ornamentales comunes, en particular,
arbustos y árboles. Algunos de estos cambios son similares a los realizados a los cultivos,
como la mejora de la resistencia en frío de un tipo de planta tropical, por lo que se puede
cultivar en jardines del norte.
Biocombustibles
El sector agrícola desempeña un papel importante en la industria de los biocombustibles,
que proporciona la materia prima para la fermentación y refinación de bio-aceite,
biodiesel y bioetanol. Técnicas de optimización de la ingeniería genética y la enzima se
están utilizando para desarrollar mejores materias primas de calidad para una conversión
más eficiente y mayores salidas de BTU de los productos combustibles resultantes. De alto
rendimiento, los cultivos de alta densidad energética pueden reducir al mínimo los costos
relativos asociados con la recolección y el transporte (por unidad de energía derivada), lo
que resulta en productos de mayor valor del combustible.
Tolerancia al estreses bióticos y abióticos
Durante años, el microbio Bacillus thuringiensis, que produce una proteína tóxica para los insectos, en particular, el
barrenador europeo del maíz, se utilizó para cultivos de polvo. Para eliminar la necesidad de quitar el polvo, los
científicos desarrollaron primero de maíz transgénico que expresa la proteína Bt, seguido de Bt de patata y algodón.
Proteína Bt no es tóxico para los humanos, y los cultivos transgénicos que sea más fácil para los agricultores para evitar
infestaciones costosos.
Menos del 20% de la tierra es cultivable, pero algunos cultivos han sido alterados genéticamente para que sean más
tolerantes a condiciones como la salinidad, el frío y la sequía. El descubrimiento de los genes en las plantas responsables
de la absorción de sodio ha conducido al desarrollo de plantas knock-out capaces de crecer en ambientes de alta
salinidad.
 Arroz enriquecido con
hierro
Arroz enriquecido con Tomates silvestres (rojos) y enriquecidos con
vitamina A antioxidantes (morados)

Alimentos fortificados
En un esfuerzo por mejorar la salud humana, especialmente en los países subdesarrollados,
los científicos están creando los alimentos genéticamente modificados que contienen
nutrientes conocidos para ayudar a combatir las enfermedades o desnutrición. Un ejemplo
de esto es el arroz dorado, que contiene beta-caroteno, el precursor de la vitamina A la
producción en nuestros cuerpos. Las personas que comen el arroz producir más vitamina A,
un nutriente esencial falta en las dietas de los pobres en los países asiáticos.
 Energía
de la luz
solar

Los científicos están

investigando formas
rentables para obtener
plásticos a partir de plantas.

Foto cortesia de S. Long Lab, University of Illinois, 2006

Las plantas son fuentes de productos

renovables y biodegradables
 Hydrocarbon degradation in intertidal wetlands: from
genome to ecosystem. Gene information, for example from
the alkane hydroxylase gene (alkB) cluster in Alcanivorax
borkumensis; one of several over-expressed in the presence
of alkanes [14], informs on mechanisms of degradation (e.g.
terminal oxidation of alkanes [54]) and vice versa. A.
borkumensis must first access hydrocarbons and transport
them across the membrane – the image shows a small ( 1
mm diameter) oil droplet emulsified by surrounding cells of
A. borkumensis (copyright: Dr. Jessica Beddow). Populations
of A. borkumensis form part of a wider community, as
illustrated by this false-colour image showing photosynthetic
organisms, in this case diverse benthic diatoms, on the
surface of a mudflat in which A. borkumensis and other
microbes were degrading hydrocarbons (field of view is 60
mm 40 mm). These benthic phototrophs probably
contribute to hydrocarbon degradation by generating oxygen
[15 ]. The image of a salt-marsh tidal creek connected to the
North Sea (copyright: Prof. Graham Underwood)
demonstrates the heterogeneity of the habitat, particularly
the different degrees and types of algal and plant cover.
Vertical heterogeneity (not shown) is equally pronounced,
with oxygen diffusing no more than a few millimetres below
the surface and different TEAs becoming available at depth.
Finally, the understanding and knowledge acquired in less
complex bio-systems provide complementary tools for
investigating the ecology and biogeochemistry of
ecosystems.

Fitorremediación
Plantas genéticamente modificadas también se están desarrollando para un propósito
conocido como fitorremediación en el que las plantas desintoxicar los contaminantes en el
suelo o absorben y acumulan sustancias contaminantes del suelo de manera que las
plantas pueden ser cosechadas y eliminarse de manera segura. En cualquier caso, el
resultado es la mejora de la calidad del suelo en el lugar contaminado.
5 ejes temáticos de aplicaciones
e investigación
1. Diagnóstico molecular y prevención de enfermedades infecciosas y plagas
2. Microbiología y domesticación de microorganismos beneficiosos
3. Control biológico
4. Micropropagación y cultivo in vitro de plantas sanas elitas
5. Proteómica
 1. DIAGNOSTICO MOLECULAR Y
PREVENCION DE ENFERMEDADES
INFECCIOSAS

 Aumentar la productividad y la competitividad mediante la reducción

del impacto de enfermedades endémicas

 Aumentar la rentabilidad mediante la reducción del uso de fungicidas

 Evitar la introducción de nuevas enfermedades presentes en otros

Países

 Garantizar y aumentar las exportaciones.

 PATOGENOS

Ciclo de replicación de un virus fitopatógeno

Ej. de un virus de ARN
- En las plantas, el virus penetra a través de poros
(ej. estomas), lesiones, o mediante insectos
vectores (durante su alimentación).
- Luego, el virus ingresa al citoplasma de la célula
hospedadora y libera su cápside.
- Una vez liberado su genoma, queda en el citoplasma
y utiliza la maquinaria celular para sintetizar miles
de copias de su ácido nucleico y las proteínas que
necesite para su replicación, estructura y
movimiento.
- Los virus de ARN positivo (ARN+) actúan como un
ARN mensajero: Comienzan a traducir de
inmediato, haciendo su duplicación muy rápida. En
cambio, los virus de ARN negativo (ARN-) utilizan la
ARN polimerasa para fabricar el ARNm.
- Finalmente, se ensamblan las cápsides y los viriones
abandonan la célula infectada a través de los
plasmodesmos (movimiento local de célula a célula)
o a través del sistema vascular (movimiento
sistémico).
- Cada nuevo virión puede infectar una célula y el ciclo
continua hasta la muerte del individuo o la
respuesta por parte del mismo gracias a la
actividad del sistema inmunológico.
 Virus de ARN: PATOGENOS
Bromoviridae (ssRNA+)
- Grapevine Angular Mosaic Virus GAMV Ilarvirus
Virus de la vid -------------------------

Closteroviridae (ssRNA+)
- Grapevine LeafRoll-Associated Virus 1 GLRaV-1 Ampelovirus
Más de 60 virus afectan a los viñedos, a - Grapevine LeafRoll-Associated Virus 2 GLRaV-2 Closterovirus
través del mundo. - Grapevine LeafRoll-Associated Virus 3 GLRaV-3 Ampelovirus
- Grapevine LeafRoll-Associated Virus 4 GLRaV-4 Ampelovirus
Los virus pueden tener serios impactos en - Grapevine LeafRoll-Associated Virus 5 GLRaV-5 Ampelovirus
la productividad de las plantas y la calidad - Grapevine LeafRoll-Associated Virus 6 GLRaV-6 Ampelovirus
- Grapevine LeafRoll-Associated Virus 7 GLRaV-7 Unclassified
de los frutos, causando pérdidas
- Grapevine LeafRoll-Associated Virus 8 GLRaV-8 Ampelovirus
económicas significativas y menor calidad - Grapevine LeafRoll-Associated Virus 9 GLRaV-9 Ampelovirus
del vino. - Grapevine LeafRoll-Associated Virus 10 GLRaV-10 Ampelovirus
--------------------------
Numerosos virus causan infecciones (beta)Flexiviridae (ssRNA+)
latentes. - Fig Latent Virus FLV Trichovirus
- Grapevine Berry Inner Necrosis Virus GINV Trichovirus
Además, una misma enfermedad puede ser - Grapev. Rupestris Stem Pitting-ass. V. GRSPaV Foveavirus
inducida por varios agentes virales. - Grapevine Virus A GVA Vitivirus
- Grapevine Virus B GVB Vitivirus
Las principales enfermedades virales son: --------------------------
Secoviridae (ssRNA+)
- Degeneración (Nepovirus)
- Bulgarian Latent Virus GBLV Nepovirus
- Declino (Nepovirus - Grapevine Fanleaf Virus GFLV Nepovirus
- Enrollamiento hojas (Closteroviridae) - Tomato Ringspot Virus TomRSV Nepovirus
- Madera rugosa (Vitivirus, Foveavirus) -------------------------
Tymoviridae (ssRNA+)
- Moteado.
- Grapevine Asteroid Mosaic-ass. Virus GaMAV Marafivirus
- Grapevine Fleck Virus GFkV Maculavirus
-------------------------
Mycoviruses (dsRNA) Unclassified
___________________________________________________
Virus de ADN:
- Caulimoviridae
- Grapevine Vein-Clearing Virus GVCV Uncl. Badnavirus
 PATOGENOS

Bacterias
Las bacterias son organismos procariotas
unicelulares que no tienen un núcleo delimitado
por membranas.
Mecanismos de patogenicidad de las
bacterias patógenas

Las bacterias presentan diversas formas

incluyendo esferas, barras y hélices; Miden
entre 0,5 y 5 μm.
Su material genético está constituido de
un cromosoma circular (ADN doble cadena
situado en el citoplasma) y, a veces, de un
plásmido (pequeño ADN circular que lleva los
factores de virulencia).
 PATOGENOS

Bacterias

Vid:
5 bacterias afectan de manera significativa a los viñedos:
- Agrobacterium rubi, A. vitis Crown gall
- Xanthomonas campestris pv viticola Bacterial canker
- Xylella fastidiosa Grapevine Pierce’s disease Xylophilus ampelinus (Burkholderiales)
- Xylophilus ampelinus Grapevine bacterial blight
Xylella fastidiosa (Xanthomonadales; Xanthomonadaceae)
Eucalipto:
- Ralstonia solanacearum
Bacterial wilt
(Burkholderiales)

- Pantoa ananatis
Blight and die-back

Micrografia electronica en Necrosis marginales y Vector (Draeculacephala minerva)

Vasos del xilema marchitamiento de las hojas (Hemiptera: Cicadellidae)

Mango:
- Erwinia sp. Erwinia rot
- Pseudomonas syringae pv. syringae Bacterial apical necrosis
- Xanthomonas campestris pv. mangiferaeindicae Bacterial black spot / canker
- Xanthomonas citri pv. mangiferaeindicae Bacterial black spot / canker Xanthomonas campestris
pv. Mangiferaeindicae
(Xanthomonadaceae)
 PATOGENOS

Hongos
Los hongos son organismos eucariotas uni-
o pluricelulares; Poseen células
delimitadas por una membrana plasmática
que contiene un núcleo con material
genético en forma de cromosomas.
Son organismos heterotróficos
(necesitan de fuente de carbono
orgánico).
Se reproducen de forma sexual y
asexual, esencialmente por medio de
esporas.

Ciclo biológico de Plasmopara viticola

(Oomiceta), agente causante del
mildiu de la vid
 PATOGENOS

Hongos
Vid:
- Botrytis cinerea Bunch rot, Grey mold
- Colletotrichum gloeosporioides Anthracnose disease
- Cylindrocarpon Black foot disease
- Diplodia seriata, D. mutat Grapevine trunk disease, Gr. Decline
- Elsinoe ampelina Anthracnose, Black spot
- Erysiphe necator Powdery mildew
- Eutypa lata Eutypa dieback
- Fomitiporia mediterranea Esca disease
- Phaeoacremonium aleophilum Esca disease, Petri disease
- Phaeomoniella chlamydospora Esca disease, Petri disease
- Phomopsis viticola Cane and leaf spot Erysiphe necator
- Phytophthora, Pythium sp. Replant and decline disease
- Plasmopara viticola Downy mildew
- Roesleria subterranea Root rot
- Sorosphaera viticola Galls

Plasmopara viticola Botrytis cinerea

Eutipa lata
 PATOGENOS

Hongos
 PATOGENOS

Nematodos
El filum "Nematoda" es uno de los grupos de invertebrados más diversos que existen en la
tierra.
las especies de nematodos fitoparásitos tienen estructuras bucales que les ayudan a
inyectar enzimas para disolver las estructuras de las células vegetales. Un vez dentro
de la raíz o simplemente alimentándose externamente por medio del estilete, su
actividad deriva en lesiones y necrosis que afectan negativamente en el crecimiento de
la planta.
Además, los nematodos pueden ser vectores de virus (ej. Nepovirus).

Xiphinema index
 PATOGENOS

Plagas (insectos y ácaros)

Vid:
Ácaros Colomerus vitis Ácaro de las yemas
Tetranychus urticae Araña amarilla común

Hemipteros Empoasca vitis Cicadela verde

Scaphoideus titanus Cicadela blanca

Homópteros Aphis illinoisensis Pulgón de la vid

Daktulosphaira vitifoliae Filoxera
Pseudococcus citri Cochinilla algodonosa

Lepidópteros Bonagota cranaodes Enrollador de hojas Filoxera

Cryptoblabes gnidiella Polilla del racimo Daktulosphaira vitifoliae
Lobesia botrana Polilla del racimo
Sparganothis pilleriana Piral

Thisanópteros Frankliniella occidentalis Trips de las flores

Scaphoideus titanus

Colomerus vitis Lobesia botrana

2. Microbiología y
domesticación de
Microorganismos
Beneficiosos
 2. MICROBIOLOGÍA Y DOMESTICACIÓN
DE MICROORGANISMOS
BENEFICIOSOS

 Disponer de cepas microbianas capaces de mejorar el crecimiento

de las plantas

 Disponer de cepas microbianas utilizables para el mejoramiento de

los suelos
 Reducir los costos de tratamientos (fungicidas, nematicidas, etc.)
con el uso de microorganismos capaces de inducir reacciones de
defensa en las plantas.
 2. MICROBIOLOGÍA Y DOMESTICACIÓN DE MICROORGANISMOS
BENEFICIOSOS

Micorrizas Bacterias fijadoras de nitrógeno

Asociación simbiótica entre Bacterias simbióticas:
hongos del suelo y raíces de
planta(s):  Endofíticas
Aumento de la capacidad de
absorción de agua y nutrientes
 Formadoras de
 Aumento de la resistencia a Nódulos bacterianos
temperatura, sequía,
nódulos en raíces
acidificación del suelo
 Suministro de fuentes carbonadas

Bacterias con genes nif (involucrados en la

síntesis de la enzima “nitrogenasa”)
 Bacterias libres

Una parte del nitrógeno fijado por las

bacterias está disponible para las plantas.
 2. MICROBIOLOGÍA Y DOMESTICACIÓN DE MICROORGANISMOS
BENEFICIOSOS

Competición con los micro-organismos Bacterias capaces de inducir la

por colonización de la rizoesféra resistencia sistémica en plantas

El ácido salicílico es una molécula señal en la

resistencia adquirida en plantas.

Fusarium oxysporum

Pseudomonas fluorescens
Uso de primers específicos de bacterias capaces de
inducir la biosíntesis del ácido salicílico

Producción de antibiótico (bacteriocina)

2,4-diacetylphloroglucinol (DAPG) Muestras
de suelo
PCR

Detección precoz
Cuantificación
Bacterias capaces de inducir
una resistencia
sistémica o no específica
2. MICROBIOLOGÍA Y DOMESTICACIÓN DE MICROORGANISMOS BENEFICIOSOS
 3. CONTROL BIOLÓGICO

 Mejorar los rendimientos mediante el control de

enfermedades y plagas, y la prevención de enfermedades
transmitidas por plagas

 Reducir los costos de tratamientos (insecticidas, fungicidas,

nematicidas, etc…)

 Evitar la aparición de resistencia de las plagas

 Producir cultivos orgánicos (con muy poco o ningún nivel de

toxicidad)

 Preservar el ecosistema (el control biológico permite recuperar

las propiedades biológicas de los suelos).
 5. CONTROL BIOLOGICO

Hongos biocontroladores:
Los hongos antagonistas resultan importantes para el control biológico de los
fitopatógenos. Las especies del género Trichoderma se destacan entre las más utilizadas
para el biocontrol de patógenos fúngicos del suelo.

Estas especies presentan diferentes mecanismos de acción antagonista: Competencia por

el sustrato, micoparasitismo, antibiosis, desactivación de enzimas del patógeno, etc...
Trichoderma sp. compite con el Trichoderma sp.
hongo fitopatógeno y coloniza la
rizoesfera de la planta.

Hifa de un hongo
patógeno

Micelio de Trichoderma sp.

parasitando micelio de Pythium sp.

BTH (SAR): Plantas tratadas con benzotiadiazol, análogo del

ácido salicílico, molécula involucrada en el sistema de respuesta
adquirida de las plantas frente a patógenos.
 3. MICROPROPAGACIÓN IN VITRO DE
PLANTAS SANAS ELITES

 Aumentar la productividad y la competitividad

de las producciones mediante el cultivo de
plantas homogéneas y mejoradas.

 Aumentar la productividad y la competitividad

de las producciones mediante el cultivo de
plantas libres de agentes infecciosos y con
microorganismos beneficiosos
 3. MICROPROPAGACIÓN IN VITRO DE PLANTAS SANAS

Aplicaciones del cultivo in vitro

 6. PROTEOMICA

 Purificar y separar proteínas y moléculas de

interés (ej. antocianinas, metabólitos)
 Entender las interacciones plantas-patógenos, el
desarrollo fisiológico de las plantas, …
 Caracterizar e identificar variedades vegetales
 Analizar/detectar microorganismos
 Estudiar la expresión (diferencial) de proteínas
 Controlar la calidad de frutas (madurez, taninos).
 6. PROTEOMICA

Proteómica / MALDI-TOF
La proteómica es el estudio a gran escala de las proteínas, en particular de su
estructura y función.
La espectrometría de masa es una poderosa técnica microanalítica esencial en el contexto
de la proteómica que permite determinar con gran precisión la masa de moléculas por
medio de la medida de la relación masa/carga.
Está utilizada para identificar compuestos desconocidos y cuantificar compuestos conocidos.

El MALDI-TOF (Matrix-Assisted Laser

Desorption/Ionisation-Time-Of-Flight Mass) es una técnica
de ionización suave utilizada en espectrometría de masa.
Es una tecnología analítica esencial en el contexto de la
proteómica actual debido a:
 Su alta capacidad de análisis
 Su sensibilidad
 Su precisión en la determinación de masas moleculares
proteicas.
 Proteómica y
estudio de la madurez en frutas

Proteínas separadas por un gel

bidimensional de electroforesis y
luego identificadas con
espectrometría MALDI.

Estrategias para el estudio proteómica de la madurez en frutas:

Se puede considerar frutas enteras así como componentes (semillas,
pulpa, piel), o al nivel celular.
Tras la extracción y purificación parcial, las proteínas están analizadas
con herramientas de proteómica. La confrontación de los resultados
obtenidos con bases de datos permite la identificación de las proteínas
involucradas en el proceso de madurez.
Herramientas moleculares
 Herramientas moleculares:
Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR)

PCR: Reacción en cadena de la polimerasa

Ventajas:
- Alta sensibilidad
- Alta especificidad
- Rapidez

49
50
Obtención de Primers
Diseño a partir de secuencias nucleotídicas

GenBank: Banco internacional de secuencias nucleotídicas

(> 13 billones de bases, correspondientes a más de 100.000 especies)

Secuencias de interés:
- Genes de virulencia (toxinas [ Bacterias])
- Secuencias conservadas entre diferentes cepas de un mismo patógeno
- Específicas del patógeno de interés 51

Análisis de secuencias:
Blast: Algoritmo que permite identificar
similitudes entre secuencias nucleotídicas.

Secuencia AATCCTTGAGCA Alineamiento

de interés perfecto
Secuencia = Homología
comparada AATCCTTGAGCA
 Herramientas moleculares:
PCR en tiempo real
1) La Real-Time PCR detecta la acumulación del producto durante la reacción.
2) Los datos son recolectados en la fase exponencial de la reacción de PCR.
3) La detección y cuantificación de reporteros fluorescentes se realiza en “tiempo real”.
4) La fluorescencia emitida es proporcional a la cantidad de producto de PCR.

Cuantificación precisa del nivel

de expresión de los genes
Aplicaciones:
Detección y cuantificación de agentes patógenos
 Cuantificación de la expresión de genes
 Estudio de poblaciones de microorganismos
 Estudio de la eficiencia de tratamientos
 Genotipificación: Detección de mutaciones
puntuales en el ADN, discriminación de alelos, etc.

52
Secuenciación
del ADN:
Next Generation
Sequencing
Secuenciación masiva
de ADN

53
 Metagenómica
aplicada a la rizoesfera / filoesfera

Microbioma de
la rizoesfera y
salud en plantas

54
 Biotecnología molecular y control biológico
Domesticación de microorganismos beneficiosos

Competición con los micro-organismos Bacterias capaces de inducir la

por colonización de la rizoesféra resistencia sistémica en plantas
El ácido salicílico es una molécula señal
en la resistencia adquirida en plantas.

Fusarium oxysporum

Uso de primers específicos de bacterias capaces

Pseudomonas fluorescens de inducir la biosíntesis del ácido salicílico

Producción de antibiótico (bacteriocina)

2,4-diacetylphloroglucinol (DAPG) Muestras
de suelo
PCR

Detección precoz
Cuantificación

Bacterias capaces de inducir una resistencia 55

sistémica o no específica.
 Caracterización molecular y
clonaje de genes de interés
1) PCR
2) Clonaje:
Multiplicación de la construcción genética

con
gen de interés

Fragmento de
amplificación
con
gen de interés 56
 View of PRSV disease progress in the field test in Puna
(Hawaii) at 18 and 23 months (top and bottom, respectively).
In each view the susceptible Sunrise variety is shown on the
left and resistant transgenic Rainbow on the right.
La obtención de
protoplatos
La hibridación somática
Fuentes de Financiamiento
Muchas gracias