UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CENTRO DEL PERÚ

FACULTAD DE CIENCIAS FORESTALES Y DEL AMBIENTE

PROYECTO DE INVESTIGACION

Efecto de cuatro proporciones de fitohormonas en la propagación y

crecimiento de brotes en el cultivos invitro de las especies polylepis incana,
polylepis racemosa y polylepis micropylla

CATEDRA:
DISEÑOS EXPERIMENTALES

ESTUDIANTES:

Pacheco Méndez, Luz Denisse

Pineda Coronel, Benji Oscar

CATEDRATICO:
Ing. Orellana Mendoza, Edith Pilar

SEMESTRE:
IX

HUANCAYO- PERÚ 2017

I.TITULO

Efecto de cuatro proporciones de fitohormonas en la propagación y crecimiento

de brotes en el cultivos invitro de las especies polylepis incana, polylepis
racemosa y polylepis micropylla

II.-PLANTEAMIENTO DEL ESTUDIO

2.1.- Planteamiento del problema

Los bosques de polylepis sp. Representan uno de los ecosistemas más vulnerables de
los Andes peruanos según Servat, Hurtado, Mendoza, Olarte (2002).Jaramillo Palacios
(2008) menciona que en los últimos años los bosques de polylepis sp. como el de otras
especies endémicas han sufrido una alarmante disminución poblacional debido a distintos
factores antropogénicos como la tala, extracción de leña, introducción de otras especies,
el incremento de las áreas de pastoreo y sembríos en la zona, llevando a las especies a un
proceso de extinción. A raíz de la aparición de una necesidad de conservar estas especies
se ha recurrido al uso de la tecnología para propagar y conservar especies forestales
atraves de los cultivos in vitro y la micropropagación. Buscando el método más efectivo
utilizando factores que puedan ser controlados de manera que se obtenga una influencia
positiva en la propagación de especies. (Castillo Alicia ,2004)
Actualmente el cultivo in vitro se ha constituido en una vía excelente para incrementar
el número de individuos de especies leñosas, especialmente las que se encuentran bajo
estado de conservación. (Uribe Moraga & Cifuentes Luis, 2004)
El proceso de propagación natural de especies, tanto que las condiciones ambientales
como (nutrimentos, temperatura, agua y luz) y algunas sustancias endógenas del
crecimiento (comúnmente conocidas como fitohormonas) son determinantes. Para lo cual
“El cultivo in vitro es una herramienta que permite reducir el efecto de estas variables y
proveer un ambiente controlado y libre de contaminantes. Identificando las variables más
influyentes. (Araya, Gómez hidalgo & Valverde, 2000)
Uribe moraga &Cifuentes Luis (2004),señalan que en algunas especies el desarrollo de
yemas en el cultivo invitro se ve favorecido por el medios nutritivos reducidos en
concentraciones de sales , y la adecuada aplicación de fitohormanas concordando con
Jaramillo Palacios (2008) en su estudio de Evaluación de medios de inducción, control
de la oxidación y contaminación en el cultivo in vitro de Junna ( Polylepis microphylla)
con un 70% de sobrevivencia de brotes y Carranza, Reyes, Mora, Cevallos, Escobar,
Cadme,Nieto & Morante (2013)que estudiaron la propagación clonal in vitro de swietenia
macrophylla king (caoba).concluyendo que el uso adecuado de fitohormonas durante el
proceso invitro puede favorecer con un porcentaje del 95% de sobrevivencia y una tasa
alta de multiplicación.
2.2.-Formulacion del problema
2.2.1.-Problema general
 ¿Cómo influyen 4 proporciones de fitohormonas en la propagación y crecimiento
de brotes en el cultivos invitro de las especies polylepis incana, polylepis
racemosa y polylepis micropylla?

2.2.1.-Problemas específicos

 ¿Cómo influye 4 proporciones de fitohormonas en el prendimiento de explamtes

en el cultivo invitro de polylepis incana, polylepis racemosa y polylepis
micropylla?
 ¿Cuál es la influencia 4 proporciones de fitohormonas de cultivo in vitro en el
crecimiento radicular de brotes de las especies polylepis incana, polylepis
racemosa y polylepis micropylla
 ¿Cuál es la influencia de las proporciones de BPA Y ANA en la multiplicación
de brotes en el cultivo invitro de polylepis incana, polylepis racemosa y polylepis
micropylla?

3.-MARCO TEORICO
3.1.-Estado del arte
Celestino, Hernández, Carneros, López-Vela & Toribio(2005) presentan La
embriogénesis somática como elemento central de la biotecnología forestal en la cual nos
dicen que Para dar sentido agronómico a diferentes biotecnologías de aplicación, esto es,
para poder transferir las posibilidades que ofrecen a la actividad operativa, es necesario
disponer de una técnica fiable de regeneración de plantas. El cultivo de tejidos de
genotipos valiosos, de meristemos libres de virus, de células transformadas, etc., no sirve
de nada desde un punto de vista aplicado si de ellos no es posible conseguir la
multiplicación en masa de dichos genotipos selectos, obtener plantas saneadas o lograr
plantas transgénicas, en condiciones económicamente viables. La embriogénesis
somática está ampliamente considerada como la mejor vía de regeneración que utiliza las
técnicas de cultivo de tejidos vegetales en biotecnología forestal. Los avances actuales en
biotecnología-genómica están teniendo un gran impacto en el uso de material selecto en
muchos programas de mejora. La embriogénesis somática está contribuyendo a la
producción de plantas transgénicas y a la consecución de la silvicultura clonal de alta
productividad, con calidad de madera mejorada y menor impacto de enfermedades, en
plantaciones forestales. Este artículo revisa la situación actual de la embriogénesis
somática aplicada a especies forestales.

Vega, Bermejo, Villegas, Quezada, Aguilar & Conde(2007) nos dicen que el Polylepis
tomentella ssp. nana es una especie endémica de Bolivia, está considerada En Peligro
(EN), por lo cual es necesario el desarrollo de iniciativas que promuevan su conservación,
siendo una alternativa el uso de técnicas de cultivo de tejidos vegetales. Se utilizaron
yemas apicales que fueron desinfectadas en etanol e hipoclorito de sodio, evaluando el
efecto del tiempo de inmersión, adición de carbón activado y aplicación de una solución
antioxidante para su establecimiento in vitro. Los explantes que obtuvieron fueron
sembrados en medio basal Chu et al. (1975). En la fase de multiplicación, los brotes se
subdivididos siendo introducidos en el medio de Tremblay & Lalonde (1984), variando
la concentración de los fitorreguladores para incrementar el número de brotes por
explante. En la fase de enraizamiento se comparó el efecto de diferentes medios de cultivo
sobre el número y la longitud de las raíces generadas in vitro. El tratamiento óptimo para
la desinfección de yemas apicales consistió en la inmersión en solución de hipoclorito de
sodio al 2% por 10 minutos; por otra parte, la aplicación de una solución de ácido
cítrico/ácido ascórbico resultó ser efectiva para el control de la oxidación. La adición de
carbón activado al medio de cultivo tuvo un efecto inhibidor en el crecimiento, incluso
generando la necrosis de los tejidos. Para la multiplicación in vitro, el mejor medio fue,
Tremblay & Lalonde (1984) suplementado con 0.23 mg/l de bencil aminopurina y 0.1
mg/l de acido indol butírico. En la fase de enraizamiento, el tratamiento óptimo tanto para
la formación como para el desarrollo radicular de vitroplantas fue el medio de cultivo
McCown & LLoyd (1980), al 50%, suplementado con 50 g/l de sacarosa y 0.1 mg/l de
acido indol acético.

Jaramillo, Jadan & Segovia (2008) presentan la Evaluación de medios de inducción,

control de la oxidación y contaminación en el cultivo in vitro de Junna ( Polylepis
microphylla) El género Polylepis es la vegetación leñosa dominante del páramo que crece
a mayor altura en Sudamérica. Se encuentra ampliamente distribuido a lo largo de los
Andes, cumple una función fundamental para la captación de agua. En la última década
el hábitat de este género ha sido dramáticamente fragmentado, Polylepis microphylla
actualmente es una especie vulnerable y en peligro de extinción local. Una técnica
biotecnológica como medida de conservación de esta especie es la micropropagación, la
finalidad de este estudio es determinar el mejor medio de establecimiento que es una de
las primeras fases de la micropropagación. En los primeros intentos por establecer
explantes de P. microphylla in vitro se observó una alta contaminación y ennegrecimiento
de los tejidos. En el presente trabajo se evaluó el mejor tiempo de inmersión (10, 20 y 30
min.) y tres concentraciones de (10, 20 y 30%) de cloro comercial (5,25% de hipoclorito
de sodio) en la desinfección de explantes de P. microphylla. El tratamiento 10 min. en
cloro comercial al 30% mostró el menor porcentaje de contaminación y la mayor
sobrevivencia de los explantes. El mejor método de control de oxidación fue una
modificación de la concentración de nutrientes del medio (K ,N, FeSO4 y sacarosa)
minimizando la oxidación fenólica, y permitiendo mayor sobrevivencia de los tejidos.

Suárez, Jarma & Avila (2006) evaluaron el desarrollo de un protocolo para propagacion
in vitro de roble (tabebuia rosea bertol dc) en el cual nos dice que el desarrollo de un
protocolo de micropropagación para plantas de roble (Tabebuia rosea) ha sido logrado
con el fin de producir masivamente clones de esta especie. Para determinar el mejor
tratamiento de desinfección superficial el efecto de tres concentraciones (1%, 2% y 3%)
de hipoclorito de sodio con tres tiempos (5, 10 y 15 min) de exposición de los explantes
consistentes de brotes axilares de 2-3 cm de longitud fueron evaluadas después de
establecidos en medio ½ MS con (en mg L-1) mio inositol (100), sacarosa (30,000),
tiamina HCl (0.4) y TC agar (8,000) (Sigma Co.). Cinco tratamientos (0.00, 2.22, 4.44,
8.88, 17.76 µM BAP) fueron utilizados para determinar las mejores condiciones para la
multiplicación, mientras que usando el mismo medio de establecimiento, el efecto de seis
tratamientos (0.00, 1.35, 2.69, 4.03 y 5.37 µM ANA) fueron analizados para evaluar el
enraizamiento in vitro de los brotes micropropagados. Los tratamientos fueron repetidos
15 veces y se distribuyeron usando un diseño completamente al azar. Brotes
micropropagados con y sin enraizamiento in vitro fueron transferidos ex vitro.
Hipoclorito de sodio al 3% durante 10 minutos fue el mejor tratamiento de esterilización
superficial. La mejor tasa de multiplicación se obtuvo con 17.76 µM BAP mientras que
el mayor enraizamiento ocurrió en presencia de 5.37 µM ANA. El enraizamiento in vitro
fue necesario para la recuperación de plantas ex vitro donde se debe seguir trabajando
para aumentar los porcentajes de recuperación mostrados.

Cantos, Liñán, Troncoso, Aparicio & Troncoso (2008) desarrollaron el cultivo in vitro,
un método para mejorar la germinación de plantas con interés forestal en Andalucía Se
compara la germinación obtenida por métodos convencionales (siembra de semillas en
bandejas), con la lograda por el cultivo in vitro de semillas con cubierta, con cubierta
escarificada, sin cubierta o embriones aislados, de especies vegetales elegidas por su
carácter endémico, su interés como plantas forestales en Andalucía, su dificultad de
germinación y su situación de en peligro de extinción o clara regresión. Los resultados
obtenidos con semillas por métodos tradicionales, fueron muy pobres tanto en el
porcentaje de germinación, como en el tiempo prolongado, necesario para ello. Por el
contrario, los procedimientos de germinación in vitro, que se utilizaron siempre de mas
sencillo (semilla completa) a mas complicado (embrión), dieron tantos por ciento
elevados de germinación en tiempos reducidos, como se especifica para cada especie:
Atropa baetica Willk., 100% de germinación en 30 días con semilla completa sin
escarificar; Echinospartum algibicum Talavera & Aparicio, 100% de germinación en 30
días, con semilla completa escarificada; Juniperus oxycedrus, L. subsp, oxycedrus, y
Juniperus oxycedrus, L. subsp, macrocarpa (Sibth. & Reuter) Ball., 50% de germinación
en 45 días con embriones aislados; Lavatera maritima Gouan, 76% de germinación a los
21 días, con semillas completas sin escarificar; Olea europaea L. var.sativa, Olea
europaea L. var. sylvestris Brot., 100% de germinación en 10 días con embriones aislados;
Phillyrea latifolia L., 55% de germinación a los 7 días en embriones aislados y
Rhododendron ponticum subsp. baeticum (Boiss. & Reuter) Hand-Mazz. 90 % en 30 días
con semillas completas. En todas las especies consideradas, se obtuvieron porcentajes
elevados de supervivencia (>85%) al trasplantar las plántulas desde in vitro a condiciones
externas.

Carranza et al. (2013) menciona en la propagación clonal in vitro de swietenia

macrophylla king (caoba) que la caoba es una especie forestal maderable de múltiples
usos, apreciada por su dureza, resistencia, belleza y calidad. La explotación intensiva y
un inadecuado sistema de aprovechamiento de la especie han ocasionado la disminución
de la variabilidad genética, haciendo imposible la aplicación de programas de
mejoramiento genético de caoba en el Ecuador. El cultivo in vitro es una técnica que
ayudaría a disminuir este problema mediante la producción de plantas con alta robustez
genética. El objetivo de esta investigación fue establecer un método que facilite la
propagación in vitro de caoba a partir de segmentos nodales, empleados en la fase de
establecimiento con diferentes concentraciones de Ca(ClO)2 y tiempos de exposición. La
contaminación por microorganismos fue controlada con 15 g de Ca(ClO)2 durante 20
min, alcanzando el 95% de sobrevivencia. Los explantes sanos fueron transferidos a un
medio de cultivo MS/2 con distintos niveles de bencilaminopurina (BAP) y ácido
indolbutírico (AIB) para su multiplicación in vitro, obteniéndose 70% de brotes con 2 mg
L-1 de BAP en combinación con 1 mg L-1 de AIB. Los mejores brotes de la fase de
multiplicación se colocaron en medio de cultivo MS/2 con diferentes concentraciones de
ANA para facilitar su enraizamiento, ninguno de los tratamientos ensayados permitió
generar raíces a los 21 días de su evaluación, aunque el mayor porcentaje de sobrevivencia
(65%) se obtuvo al combinar 2 mg L-1 BAP y 1 mg L-1 ANA..

Maldonado, Castillo, Jasso, Jiménez, López & Sánchez (2016) presentaron efecto del
medio de cultivo en la propagación in vitro de genotipos de cedrella odorata en la cual
nos dice que Para la industria forestal de México Cedrella odorata es la especie de mayor
importancia, con amplia demanda para el establecimiento de plantaciones comerciales,
las cuales pueden ser cubiertas mediante propagación in vitro de genotipos sobresalientes.
Se desarrolló un protocolo para propagación in vitro de Cedrella. odorata, a través de
yemas axilares, evaluando efectos de diferentes medios de cultivo en fases de
establecimiento, multiplicación y enraizamiento de cinco genotipos seleccionados de
Cedrella odorata. Con el medio MS adicionado con antioxidantes, bactericidas y auxinas
se obtuvo 55% de establecimiento, mientras que fase de multiplicación el medio MS
adicionado con mayor concentración de auxinas favoreció la emisión de brotes (95%) y
todos los medios favorecieron la elongación de los mismos. Cedrella odorata presentó
buen nivel de enraizamiento aun sin auxinas pero el medio MS adicionado con 0.1 ml L1
de AIB y 0.1 ml L-1 de ANA fue superior en la generación de raíces (12%), concluyendo
que el efecto del medio de cultivo es determinante para el establecimiento, multiplicación
y enraizamiento in vitro de C. odorata. Mientras que el genotipo una vez establecido tiene
efecto en la sobrevivencia y respuesta al enraizamiento.
 3.2.-bases teóricas

3.2.2.-Teoría de la evolución

Darwin publica en 1859 El origen de las especies por medio de la selección natural
en el que presenta de manera detallada a la selección natural como el mecanismo
distintivo que permite explicar la lógica de la vida; es decir, de los sistemas vivos. Esta
lógica se caracteriza por un progreso continuo y un proceso de complejidad creciente,
anatómica, fisiológica y termodinámica. Pues bien, la selección natural constituye el
mecanismo explicativo excelente de la teoría de la evolución. Por su parte, el azar es el
factor que determina cómo sucede una extinción y cuáles especies podrían repoblar de
nuevo un nicho o un planeta.

3.2.1.-Teoría de la totipotencia celular

“El principio de totipotencia, que indica que cualquier célula vegetal contiene una
copia íntegra del material genético de la planta a la que pertenece sin importar su función
o posición en ella, y por lo tanto tiene el potencial para regenerar una nueva planta
completa” (Calva Calva & Perez Vargaz,2005)

3.3.-Bases conceptuales
3.3.1.-Cultivo In Vitro
El cultivo in vitro consiste en tomar una porción de una planta que puede ser: (el
ápice, una hoja o segmento de ella, segmento de tallo, meristemo, embrión, nudo, semilla,
antera, etc.) y colocarla en un medio nutritivo estéril (usualmente gelificado, semisólido)
donde se regenerarán una o muchas plantas. (Jaramillo Palacios, 2008)

3.3.1.1-Fases de cultivo invitro

a. Fase 0: Etapa preparativa
Consiste en clasificar el material que se encuentre en condiciones fisiológica y
fitosanitaria adecuadas (Afanador Pérez, 2005)
b.fase 1: Etapa de establecimiento
Las plantas donadoras son sometidas a una desinfección superficial con sustancias
toxicas y termoterapia para los microorganismos que puedan generar competencia en
el desarrollo del explante. (Afanador Pérez, 2005). Dentro de las sustancias más usadas
está el etanol al 50% por la facilidad que este tiene al humedecer el tejido; de la misma
manera la utilización de hipoclorito de sodio (NaCl) y de calcio (CaCl) en una
concentración del 2-3.5% debido a que no causa daños en el tejido del explante.
(Afanador Pérez, 2005).
Lavado y enjuagado de los explamtes con agua destilada de 3-5 veces para la
eliminación de residuos del desinfectante. (Afanador Pérez, 2005).
c.fase 2: Etapa de multiplicación y alongamiento de brotes
El objetivo de esta fase es la multiplicación de los brotes de obtenido a partir del
meristemo a partir de la estimulación celular y la inhibición de la dominancia apical
para el crecimiento del brote. (Afanador Pérez, 2005).
d. fase 3: etapa de enraizamiento invitro
Los brotes son sometidos enraizamiento en un medio de cultivo sin reguladores de
crecimiento para el trasplante donde los niveles de citoquinina exógena será reducido
y de auxinas exógenas será aumentado el tiempo de esta etapa será variable
dependiendo de la especie y del regulador de crecimiento (Afanador Pérez, 2005).
d. fase 4: Aclimatación del cultivo in vitro
En esta etapa se trasplantas los brotes a un ambiente ex vitro de manera gradual
bajando la humedad del ambiente para que se adapten al substrato. (Afanador Pérez,
2005).
3.3.1.2.- Termoterapia
Consiste en colocar a las plantas donadoras en una capsula de crecimiento a una
temperatura de 35-45 °c para reducir la concentración de virus en la planta en un tiempo
promedio de 8 horas. (Afanador Pérez, 2005).
3.3.1.3.- Cultivo de estructuras organizadas

Se pueden distinguir varios tipos, entre ellos: el cultivo de meristemas, cultivo de ápices del
vástago, cultivo de raíces, cultivo de anteras, etc. Por lo general se denomina explante a una
porción de tejido u órgano aislada de una planta y para propósitos de micropropagación los más
importantes son: cultivo de meristemas, cultivo de ápices caulinares, cultivo de segmentos
nodales y cultivo de embriones (Guerra & Nodari, 2016).
3.3.2.-Explanto (explamtes)
Tejido vivo separado de su órgano propio y transferido a un medio artificial de
crecimiento. El nombre “explante” es una versión castellanizada del vocablo inglés
“explant”; acuñado especialmente para identificar a los tejidos vegetales cultivados in
vitro. (Castillo Alicia ,2004)
 3.3.3.-La micropropagación
La propagación de plantas in vitro es una técnica muy utilizada en cultivos de
importancia económica. Permite cultivar células, tejidos, órganos, semillas, embriones y
obtener individuos selectos en forma rápida. “Los cultivos son realizados por personal
especializado en medios específicos (hormonas, minerales, vitaminas, fuente de carbono,
agente gelificante, agua, etc.) y condiciones ambientales controladas (temperatura,
humedad y luz)”. (Castillo Alicia ,2004)
3.3.4.-Asepcia
El prefijo "a" significa negación, falta o ausencia; y "sepsis" infección o
contaminación; por lo tanto el término asepsia se define como la ausencia de materia
séptica, es decir la ausencia de microorganismos patógenos. La asepsia es la condición de
"libre de microorganismos que producen enfermedades o infecciones". (Sánchez Nazario,
2010)
3.3.5.- Medio de cultivo
Un medio de cultivo es un conjunto de componentes que crean las condiciones
necesarias para el desarrollo de los microorganismos. (Alves Menéndez, s.f)
3.3.5.1.-Composición del medio de cultivo
A.- Composición nutricional del medio de cultivo
- Macronutrientes, micronutrientes, sales minerales, vitaminas, compuestos
orgánicos.
(Alves Menéndez,s.f)
B.- Composición hormonal del medio de cultivo
-Auxinas, Giberelinas, ácido abscisico, etileno.etc
(Alves Menéndez,s.f)

C.- Composición física del medio de cultivo

- pH, temperatura, humedad relativa, exposición a la luz
(Alves Menéndez,s.f)
3.3.6.- componentes del cultvio
3.3.6.1.- Hormonas naturales reguladoras de crecimiento
A.-Auxinas
Las auxinas son un grupo de hormonas vegetales naturales que regulan muchos
aspectos del desarrollo y crecimiento de plantas. La forma predominante en las plantas es
el ácido indolacético (IAA). (Jordán & Casareto, 2006)
 B.-Efectos fisiológicos
“Las auxinas influyen crecimiento y formación de raíces. Debido a que las auxinas
influencian tanto la división, como el crecimiento y diferenciación celular, están
involucradas en muchos procesos del desarrollo, en algunos de ellos interactuando con
otras fitohormonas.” (Jordán & Casareto, 2006)
C.- Giberelinas
“Las giberelinas (GAs) son hormonas de crecimiento diterpenoides tetracíclicos
involucrados en varios procesos de desarrollo en vegetales. A pesar de ser más de 100 el
número hallado en plantas, sólo son unas pocas las que demuestran actividad biológica.”
(Jordán & Casareto, 2006)
D.- Citocininas
“Las citocininas DMAPP son hormonas esenciales en el accionar de varios procesos
vinculados al crecimiento y desarrollo de las plantas y relacionados a la acción de varios
genes.” (Jordán & Casareto, 2006)
E.- Citoquinina
“Las citoquinina son un grupo de fitorreguladores que gobiernan la división celular
y la diferenciación en tejidos vegetales, participan en el control del desarrollo y la
senescencia.” (García Brejo, 2014)
3.3.6.1.- Hormonas artificiales reguladoras de crecimiento
A.-6-N-Bencilaminopurina:
 Es un regulador de crecimiento de las plantas de la clase de las
citoquinina(García Brejo,2014)
B.-Acido giberélico (AG3)
 Fitorregulador del crecimiento caracterizado por sus efectos
fisiológicos y morfológicos. Actúa a concentraciones extremadamente
bajas; es traslocado en el interior de la planta y, generalmente, sólo afecta
a las partes aéreas(García Brejo,2014)
C.- Ácido 2,4-diclorofenoxiacético
 es un herbicida sistémico hormonal auxínico muy común, usado en el
control de malezas de hoja ancha. Es el tercer herbicida más ampliamente
utilizado en Norteamérica, y el más usado en el mundo. (García
Brejo,2014)
 C.- 1-ANA
 El ácido α -Naftalén acético (tiene un uso muy amplio en la agricultura,
hortalizas, flores, árboles frutales, invernaderos y en todo tipo de siembra
para estimular la formación de raíces, aumenta la longitud de los ramales
de las raíces haciéndolas más frondosas y fuertes; previene caídas pre-
cosecha. (FERTICHEN,s.f.)
3.3.6.2.-Sustancias vitamínicas:
De todas las que comúnmente se incorporan a los medios, pareciera que la
tiamina es la única realmente imprescindible para el buen crecimiento de los
cultivos. (Mroginski, Sansberro & Flaschland,s.f)
A.-Fuente de carbono:
Prácticamente todos los cultivos son heterótrofos (comparativamente unos
pocos son autótrofos) y por ende necesitan del suministro de una fuente de
carbono. La sacarosa, en concentraciones de 2 al 5%, es el azúcar más utilizado.
En algunos medios se la reemplaza por glucosa. En casos particulares se cita el
empleo de maltosa o galactosa. También myo-inositol (100 mg/L) suele ser
incorporado a los medios resultando un mejor crecimiento de los cultivos.
(Mroginski, Sansberro & Flaschland,s.f)
B.-Nutrientes minerales:
Los medios de cultivo deben suministrar los mismos macro y micronutrientes
que son esenciales para el crecimiento de las plantas enteras. En general se
destacan las concentraciones relativamente El nitrógeno es suministrado en forma
de amonio y/o nitrato. También se pueden utilizar urea, glutamina y caseína
hidrolizada. Es fundamental que el hierro sea incorporado juntamente con un
agente quelante (Na2EDTA), lo que lo hace disponible es un amplio rango de pH.
(Mroginski, Sansberro & Flaschland,s.f)
3.3.5.3.- Medio de cultivo común (Murashige & Skoog (MS))
El número después de las letras MS, sirve para indicar la concentración de sucrosa en
el medio, por ejemplo, MS0 no contiene sucrosa, mientras que el MS20 contiene 20 g/L
de sucrosa. Esta formulación del medio Murashige & Skoog (MS) no contiene fuente de
carbono (sucrosa), hormonas vegetales (auxinas y citosinas) o vitaminas. Aprobado para
su uso en el cultivo de tejidos vegetales. Concentración de trabajo: 4.3 g/L. (Murashige
& Skoog,1962)
3.3.7.-propagacion vegetal
 La propagación vegetal corresponde a un conjunto de procedimientos para
incrementar la cantidad de plantas con el objeto de perpetuar individuos o grupos de ellos
que tienen cierto valor. (Sisaro & Higawuara, 2016)
A.-Crecimiento vegetal
Sus células se dividen y multiplican y luego se alargan; el efecto, por supuesto, es que
la planta aumenta en tamaño y peso. Sin embargo, el crecimiento no es uniforme en toda
la planta. Se encuentra localizado en las zonas meristemáticas, las que producen células
que formarán nuevos tejidos y órganos. (Kamara Keita, 2001)
B.-Porcentaje de mortalidad
La tasa bruta de mortalidad, que resulta de dividir las defunciones entre la población
total.
3.3.9.- descripción botánica
El género Polylepis pertenece a la familia Rosaceae, subfamilia Rosoidea, tribu
Sanguisorbeae (Simpson, 1979). Las especies de este género son principalmente árboles
o arbustos, con troncos torcidos, corteza delgada y exfoliante (ritidoma); hojas alternas,
imparipinnadas, inflorescencia simple, raramente ramificada. Flores generalmente con 4
brácteas simples; hipantio más o menos urceolado con espinas o alas; episépalo ausente;
sépalos más o menos valvados persistentes; pétalos ausentes; estambres 6-36, anteras
pubescentes; un carpelo; un óvulo pendular; estilo villoso o híspido en la base, estigma
fimbriado. Fruto aquenio, con 1 semilla dentro del hipantio. Semillas más o menos
fusiformes, con testa delgada o subcoreacea (Simpson, 1979; Mendoza & Cano 2011;
Mendoza, 2005).
La especie de Polylepis microphylla comprende árboles o arbustos hasta
de 4 m. Hojas imparipinadas, con 3-5 pares de foliolos; vaina estipular
vilosa o glabrescente, pelos blanquecinos o cremas, proyecciones obtusas;
pecíolo de 1-5 mm, viloso; lámina de 20-27 x 6-12 mm; raquis con una
capa resinosa de pelos anaranjado, bajo la cubierta de pelos lanosos crema,
punto de incisión de los foliolos con un anillo panoso-resino anaranjado
bajo la cubierta lanosa; folíolos 3-6 x 2,5-5 mm, oblóngos, obovados, ápice
emarginado, margen revoluto y entero, haz esparcidamente viloso o
glabro, envés densamente lanoso pelos blancos cremosos a
grisáceos(Simpson, 1979).
La especie de Polylepis incana Árboles de 5-8 m de altura. Hojas
congestionadas en los ápices de las ramas, trifolioladas, folíolos obovados,
 subcoriáceos, glabros por la haz, cubiertos de tricomas cortos por el envés,
tricomas enrollados, irregulares y multicelulares, mezclados con exudado
resinoso; margen crenado, ápice ligeramente emarginado, base atenuada,
raquis con tricomas cortos, multicelulares y glandulares, algunas veces
mezclados con exudado resinoso; el punto de unión de la hoja en el tallo
presenta un pequeño manojo de tricomas largos y rizados, vainas
estipulares superpuestas, la superficie externa cubierta con tricomas
glandulares. Inflorescencia de 2-7 cm de largo, con tres a diez flores,
brácteas estrechamente lanceoladas, glabras o pilosas; flores perfectas,
cuatro sépalos, ovados; ocho a veinticuatro estambres, anteras orbiculares,
barbadas; estilo con la base vellosa. Fruto en aquenio turbinado o
fusiforme, irregularmente piloso y/o alado (Barclay & Juajibo,s.f)
La especie de Polylepis racemosa Arboles de 4 a 15 cm. de altura. Hojas
compuestas, agrupadas en los extremos de las ramas, con 1 a 3 pares de
foliolos; de 3.5 a 8.8 cm. de longitud por 2.3 a 5.0 cm. De ancho; y con
raquis viloso. Inflorescencia: En racimos pendulares, de 4.0 a 11 cm. de
longitud, llevando de 3 a 11 flores. Flores: Perfectas, de 0.9 a 1.0 cm. de
diámetro, con 4 sépalos ovados. Frutos: Turbinado, cubierto con tricomas
blancos, con 4 a 5 apéndices foliáceos (Lao Maguin, Zevallos Pollito &
De La Cruz Silva, s.f ;Leon Araujo,2009; Kessler & Schmidt,2005).
3.3.9.1.-Distribución de Polylepis sp en el Perú
Tabla 1: Distribución de polylepis sp

Fuente (Mendoza & Cano, 2011)

3.4.-MARCO LEGAL
En el artículo N° 3 del decreto supremo 034-2006-AG promueve la investigación
científica sobre las especies en peligro crítico (CR) y en peligro (EN).dentro de las cuales
se encuentra el género polylepis incana.; polylepis racemosa; polylepis microphylla;
polylepis tormentella
4.- OBJETIVOS DE INVESTIGACIÓN
4.1.-Problema general
 Analizar el efecto 4 proporciones de ANA y BAP en la propagación y crecimiento
de brotes en el cultivos invitro de las especies polylepis incana, polylepis
racemosa y polylepis micropylla.

4.2.-objetivos específicos

 Evaluar el prendimiento de explamtes sometidos a diferentes proporciones de

ANA y BAP en el cultivo invitro de polylepis incana, polylepis racemosa y
polylepis micropylla
 Evaluar el crecimiento de brotes en el cultivo in vitro de las especies polylepis
incana, polylepis racemosa y polylepis micropylla Sometidos a 4 proporciones
distintas de DAP y ANA
 Analizar la influencia de las proporciones de BPA Y ANA en el la multiplicación
de brotes en el cultivo invitro de polylepis incana, polylepis racemosa y polylepis
micropylla?

5.-FORMULACIONDE HIPOTESIS
5.1.- Hipótesis
 Ha : Las 4 proporciones de fitohormonas influyen de manera diferente y
significativa en la propagación y crecimiento de brotes en el cultivos invitro de
las especies polylepis incana, polylepis racemosa y polylepis micropylla
 Ha: El prendimiento de explamtes en el cultivo invitro de polylepis incana,
polylepis racemosa y polylepis micropylla es influido de manera distinta por las
cuatro proporciones de fitohormonas.
 Ha: El crecimiento de brotes de las especies polylepis incana, polylepis racemosa
y polylepis micropylla: en el cultivo in vitro es influenciado de manera distinta y
significativa por la aplicación de 4 proporciones diferentes de fitohormonas.
  Ha: Las diferentes proporciones de fitohormonas BPA Y ANA tienen un efecto
diferente y significativo en la multiplicación de brotes en el cultivo invitro de
polylepis incana, polylepis racemosa y polylepis micropylla

6.-OPERACIONALIZACIÓN DE VARIABLES Tabla

Tabla n ° 2 :Operacionalizacion de Variables

VARIABLES DIMENSIONES INDICADORES INSTRUMENTO FUENTE

TRATAMIETO
T1: Medio de cultivo
MS+BAP & ANA 2
(1;2)
T2: Medio de cultivo
Variable
MS+BAP & ANA 1
independiente:
mg/L(1;1)
Proporción de Fito Cantidad de fitohormonas Balanza y vaso de Medio de
T3: Medio de cultivo
hormonas de aplicada en mg/L precipitación cultivo
MS+BAP & ANA
fitohormonas
(2;1)
T4: Medio de cultivo
MS+BAP &
ANA(1;3)

 Brotes
 Vernier.
Variable  Crecimiento  Numero de
 Ficha de
dependiente:  % de prendimiento Explamtes
Propagación evaluación
Crecimiento y  Cantidad prendidos
 Ficha de evaluación
propagación de multiplicación  Numero de
brotes
7.-METODOLOGÍA DE INVESTIGACIÓN
Metodología de Investigación

7.1. Lugar de ejecución

a) Fase de campo

Las muestras fueron colectadas en la ciudad del cuzco Ubicado en la región sur oriental del Perú,
comprende zonas andinas y parte de la selva alta. Limita al norte con Ucayali, al sur con Arequipa
y Puno, al este con Madre de Dios y Puno y al oeste con Arequipa, Apurímac, Ayacucho y Junín.

 Superficie: 20000,891 km².

 Latitud Sur: 13º 30´45"
 Longitud oeste: entre meridianos 73º 59´52" y 73º 57´ 45"
 Densidad demográfica: 16,3 hab./km².
 Población: Total: 1 171.403 habitantes (Censo 2007).
 Capital del Departamento: Cuzco (3.399 msnm)
 Clima: Su clima es frío y seco de mayo a diciembre y lluvioso en los
meses de enero hasta abril. La temperatura media en la capital es de 12
°C siendo la máxima de 18 °C y la mínima alrededor de 4 °C más o
menos. En la selva amazónica es tropical.
b) Fase de Laboratorio

7.2. Método de la investigación

 Inductivo-cuantitativo: es un método científico que obtiene conclusiones

generales a partir de premisas particulares y se compararan resultados con
otros estudios
7.3. Tipo de investigación

 Aplicada: porque analiza los efectos de las proporciones de fitohormonas en

la propagación in vitro de brotes de Polylepis sp.
7.4.- Nivel de investigación

 Explicativa o causal: trata de explicar cómo los niveles influye las

proporciones de ANA Y BAP en la propagación in vitro de brotes de
Polylepis sp.

7.5. Diseño de la investigación

  experimental: debido a que existe manipulación de variables
 diseño en bloques completamente al azar: debido a la evaluación se
realizaran v tratamiento y en diferentes especies.

El experimento se realizara en el laboratorio de la facultad de ciencias forestales y del ambiente

de la universidad nacional del centro del peru, el tambo, Huancayo, junin - peru, el cual consiste
en averiguar ¿Cómo influyen 4 proporciones de fitohormonas en la propagación y crecimiento
de brotes en el cultivos invitro de las especies polylepis incana, polylepis racemosa y polylepis
micropylla?

TRATAMIENTOS:

T1: Medio de cultivo MS+BAP 1mg/l & ANA 2 mg/L (1; 2)

T2: Medio de cultivo MS+BAP 1mg/L & ANA 1 mg/L (1; 1)

T3: Medio de cultivo MS+BAP 2mg/L & ANA 1 mg /L (2; 1)

T4: Medio de cultivo MS+BAP 1mg/L & ANA 3 mg/L (1; 3 )

BLOQUES:
I: Polylepis incana
II: Polylepis racemosa
III: Polylepis macrophylla

Polylepis incana T2 T1 T4 T3 BLOQUE I

Polylepis racemosa T4 T3 T2 T1 BLOQUE II

Polylepis my T3 T2 T4 T1 BLOQUE III

CARACTERISTICAS DEL EXPERIMENTO

N° de tratamientos: 4

N° de bloques: 3

N° de unidades experimentales: 12(c/UE compuesto por 24 plantas)

N° de explantes por tratamiento: 72

N° total de explantes: 288

7.6.-Prueba de hipótesis estadísticas

  Análisis univariable

La Contrastación estadística de significación mediante las pruebas de hipótesis

estadísticas se utilizará

 Hipótesis para medias de los tratamientos

Ho: µ0 = µ1= µ2
Ha: µi ≠ µj
Si Fc ˃ Ft, se rechaza la Ho o
Si P˂= 0,05 se rechaza la Ho (SPSS)

 Hipótesis para medias de los bloques

Ho: µ1 = µ2
Ha: µi ≠ µj
Si Fc ˃ Ft, se rechaza la Ho o
Si P˂= 0,05 se rechaza la Ho (SPSS)

7.7.- Técnicas e instrumentos de recolección de datos

 Técnica: medición directa (toma de datos con vernier y

conteo directo).
 Instrumento de medición: vernier

Procesamiento de datos: se tomara los datos recolectado de experimento realizado

; luego se procederá al análisis de los datos en SPSS donde proveerá los resultados
de la prueba F al igual que la pruebas de normalidad, levene ,Duncan y tukey .

Materiales

 Material vegetal
 Medio de cultivo
 Jabón anti-bacterial
 Cepillo dental de cerdas medianas
 Cloro comercial (cloralex)
 Fungicidas (benomil, captan)
 Agitador magnético con control de temperatura
 Bisturí
 Navajas para bisturíes estériles del número 11 y 22
  Campana de aire de -ujo laminar (limpia y funcional)
 Lámpara de alcohol
 Pinzas de disección
 Cinta de papel klen-pack de 1” de ancho
 Alcohol contenido en frasco de boca ancha para -amear bisturíes y pinzas.

7.2. Procedimiento metodológico de colecta de datos

EN CAMPO

Recolección de muestras: Se procedió a escoger las plántulas de las 3 especies

escogidas (polylepis incana, polylepis rasemosa y polylepis micropylla) de un vivero.

a. RECOLECCIÓN Y ANALISIS DE LAS MUESTRAS

Sometemos a las platulas a Termoterapia

Consiste en colocar a las plantas donadoras en una capsula de crecimiento a una
temperatura de 35-45 °c para reducir la concentración de virus en la planta en un tiempo
promedio de 8 horas.
Fase 0: Etapa preparativa
Consiste en clasificar el material que se encuentre en condiciones fisiológica y
fitosanitaria adecuadas (Afanador Pérez, 2005)
fase 1: Etapa de establecimiento
Las plantas donadoras son sometidas a una desinfección superficial con sustancias
toxicas y termoterapia para los microorganismos que puedan generar competencia en
el desarrollo del explante. (Afanador Pérez, 2005). Dentro de las sustancias más usadas
está el etanol al 50% por la facilidad que este tiene al humedecer el tejido; de la misma
manera la utilización de hipoclorito de sodio (NaCl) y de calcio (CaCl) en una
concentración del 2-3.5% debido a que no causa daños en el tejido del explante.
(Afanador Pérez, 2005).
Lavado y enjuagado de los explamtes con agua destilada de 3-5 veces para la
eliminación de residuos del desinfectante. (Afanador Pérez, 2005).
fase 2: Etapa de multiplicación y alongamiento de brotes
El objetivo de esta fase es la multiplicación de los brotes de obtenido a partir del
meristemo a partir de la estimulación celular y la inhibición de la dominancia apical
para el crecimiento del brote. (Afanador Pérez, 2005).
fase 3: etapa de enraizamiento invitro
Los brotes son sometidos enraizamiento en un medio de cultivo sin reguladores de
crecimiento para el trasplante donde los niveles de citoquinina exógena será reducido
y de auxinas exógenas será aumentado el tiempo de esta etapa será variable
dependiendo de la especie y del regulador de crecimiento (Afanador Pérez, 2005).
fase 4: Aclimatación del cultivo in vitro
En esta etapa se trasplantas los brotes a un ambiente ex vitro de manera gradual
bajando la humedad del ambiente para que se adapten al substrato. (Afanador Pérez,
2005).

8.-ASPECTOS ADMINISTRATIVOS
8.1.-Cronograma de actividades
Tabla n°3: cronograma de actividades.

ACTIVIDADES 2016
Enero febrero marzo
1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3
Compra de plantas donante x x
Aclimatación x
Selección de especies donantes x
Desinfección y termoterapia x
Obtención de explamtes x
Fase de establecimiento x
Fase de multiplicación conteo de explamtes x
prendidos
Trasplante y replante de brotes x
Medición de crecimiento radicular y x
longitudinal
Trasplante al medio ex vitro x
Conteo de plantas sobrevivientes. x
conclusión del informe del proyecto
ANEXOS