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Bioingeniería

Disciplina encargada del estudio de formación y procesamiento de materias primas para


producir bioproductos.
Bioproducto: Sustancia química hechas de origen biológico.

Tecnología de Fermentación
Fermentación: Producción de alcohol a partir de azúcar. Reacciones donde la materia prima
orgánica se convierte en producto por la acción de enzimas o microorganismos.
En las fermentaciones microbianas los microorganismos se reproducen, en la enzimática no
hay reproducción.

Bioproductos
Clasificados según:
Tamaño de molécula:
1. Pequeñas: químicos, antibióticos, hormonas, AA y vitaminas)
2. Macromoléculas: proteínas, polisacáridos y ácidos nucleicos/
3. Partículas: células, esporas.

Bioproductos Moleculares
Producen por fermentación y se separan por extracción u operaciones unitarias.
Divididos en:

Metabolitos Primarios: formados en la fase de crecimiento del organismo, son


intermediarios metabólicos creados por el catabolismo y anabolismo.
1. Azúcares: mono o disacáridos, sirven como fuente de carbono para el crecimiento
de organismos y solutos de control osmótico (sucrosa, glucosa, fructosa y lactosa).
2. Alcoholes, Ácidos y Cetonas: productos de fermentaciones anaerobias de
microorganismos, derivados del ácido pirúvico obtenido de los ciclos energéticos de
los organismos.
3. Vitaminas: Compuestos generados como catalizadores de reacciones en seres
vivos. Son antioxidantes, portadores de N o H y transductores en ciclos energéticos.
4. Aminoácidos: Monómeros que constituyen a las proteínas, encontrados en forma no
iónica y zwitteriones.
5. Lípidos: Constituyen las grasas naturales de ácidos grasos y esteroides, tienen
naturaleza apolar. Se producen de sus precursores llamados acetil-coenzima A.

Enlace peptídico
Formación de una amida y agua a partir de aminoácidos (enlace de la vida), reacción en los
ribosomas.
Metabolitos Secundarios: Producidos durante la fase estacionaria de los microorganismos
(antibióticos). Se emplean como tratamientos humanos, terapia de cáncer y aplicaciones
fisiológicas.

Macromolecules
Proteínas: Formadas por aminoácidos y enlaces peptídicos, base de ADN y ARN.

Estructura Primaria: Secuencia de aminoácidos que se unen, determinada por los


nucleotídicas de las cadenas que forman la proteína. (Adenina, cytosina, guanina y thimina).

Estructura Secundaria: Formada por varias estructuras primarias, unidas a partir de puentes
de hidrógeno. Tienen forma de hélice alfa o placa beta.

Estructura Terciaria: Combinación de varias estructuras secundarias, cada estructura se


llama dominio. Formada por la afinidad de los grupos funcionales.

Estructura Cuaternaria: Proteína completa, específica como los oligómeros interactúan


entre si.

Moléculas híbridas: proteínas que contienen dentro de sus cadenas a otras moléculas que
tienen propiedades únicas (Lipoproteinas, Glycoproteinas, Fosfoproteinas)/

Estabilidad de proteínas
No desnaturalizar el estado activo de la proteína, la desnaturalización se debe a la ruptura
de puentes de hidrógeno debido a T de 45 a 50C, pH causando una hidrólisis debido a la
protonación o generación de cargas y esfuerzo cortante.

Polisacáridos
Biopolimeros o macromoléculas ramificadas de mayor peso molecular, empleados como
componentes de vacunas (almidón, glucógeno y celulosa).

Fermentación Microbiana
Autótrofo: CO2 es su fuente de carbón
Heterotrofo: Carbón de fuentes orgánicas.

Levadura: Fungi que se encuentra con otro organismo que genera su propio alimento, se
reproducen por brotes (Saccharomyces cerevisiae).

Hongos Filamentosos: cuerpos que se reproducen por esporas, formando dominios de gran
tamaño (Aspergillus y Penicillium).

Metabolismo Microbiano
Metabolismo: Actividad ordenada que abarca sus operaciones quimicas y de energía, las
cuales pueden ser por:
Catabolismo: moléculas más grandes se degradan y rompen en moleculas más pequenas,
liberando energía.
Anabolismo: Formación de moléculas grandes a partir de moléculas pequeñas, impulsado
por la energía proveniente del catabolismo.

Funciones Metabólicas en las Células


1. Usar enzimas como catalizadores en actividades anabólicas y catabólicas.
2. Células adquieren energía de una fuente externa (sol).
3. Células extraen energía y la transfieren a una molécula de alta energía.
4. Células utilizan ATP para alimentar los procesos anabólicos.
Catalizador: sustancia química (enzima) que aumenta la velocidad de una reacción química
sin formar parte de los productos de la reacción. Las reacciones metabólicas no ocurren lo
suficientemente rápido para mantener las actividades celulares.

Enzimas Constructivas: presentes en cantidades constantes en una célula.


Enzimas Reguladas: la concentración de una enzima aumenta o disminuye en respuesta de
un nivel de sustrato.

Vias Metabolicas
Serie de etapas, cada una catalizada por una enzima, pueden ser ramificadas (métodos
alternativos para el procesamiento de nutrientes) o cíclica (la molécula inicial se regenera
otra vez).

ATP (Adenosín trifosfato)


Centro del ciclo de energía de la célula. La energía liberada del ATP activa unidades antes
de estar enzimáticamente unidas, también prepara a las moléculas para el catabolismo.

Fosforilación de la glucosa por ATP


Primer paso del catabolismo de glucosa (adición de fosfato por un ATP), a partir de
hexoquinasa. Activador de la glucosa (glucosa 6 fosfato).

Reposición del ATP


Reacción inversa donde entra un fosfato y energía para regenerar un enlace fosfato de alta
energía. El ATP se forma a través de una fosforilación oxidativa que son reacciones redox
en la parte final de la vía respiratoria.

Diferencia principal entre respiracion anaerobica y aerobica: ambas pasan por la glucólisis,
formación de 2-piruvato, acetil CoA, Krebs, pero en la aeróbica el O2 es el que acepta los
electrones, en anaerobica son no oxigenados). En la fermentación no hay Krebs y el aceptor
de electrones es una molécula orgánica (piruvato o acetaldehído).

Catabolismo: Obtención de Nutrientes y Energía


1. Glucolisis
2. Ciclo de Krebs
3. Cadena Respiratoria
Glucosa
El principal compuesto de partida para obtención de energía debido a que se oxida
fácilmente.

Glucolisis
Vía anaerobia que convierte la glucosa en ácido pirúvico, proporciona el medio para
sintetizar ATP en ausencia de oxígeno.
Serie de 9 pasos lineales donde se activa la glucosa con el consumo de ATP. Seguido por
la oxidación de la glucosa, síntesis de ATP y formación de ácido pirúvico. El acido piruvico
se utiliza en el ciclo de Krebs o en la fermentación.

Ciclo de Krebs
Entran 2 piruvatos (de la Glucólisis) y 2 CoA al TCA, por lo que para procesar
completamente una glucosa el ciclo debe dar 2 vueltas.
El ciclo tiene 8 pasos donde se forman distintos ácidos en cada paso (Citrico, Oxaloacetico,
Málico, etc.)

Crecimiento Microbiano
Cinética de Crecimiento Microbiano
Métodos empíricos que explican el modelo que sigue el crecimiento de las células en un
medio de cultivo. Suele ser complejo debido a que la masa del medio varía, esencial para el
entendimiento y diseno de equipos.
Utiliza el cambio de concentración de células con el tiempo.
Velocidad de crecimiento celular: crecimiento de la concentración de células con el tiempo.

Velocidad de división celular: velocidad con la que se reproducen los microorganismos.

Cultivo Batch
El consumo de sustrato que controla el crecimiento se monitorea en función del tiempo, el
medio, composición y estado de la célula cambia durante el experimento.
En un cultivo continuo la concentración del sustrato es independiente de la concentración y
tiempo de cultivo, se mantienen condiciones estables de medio.

Importancia de la cinética microbiana


1. Aumento del rendimiento de los productos microbianos.
2. Aumento de la velocidad de formación del producto.
3. Mantenimiento de la calidad del producto microbiano.
4. Uniformidad del proceso.
Ciclo de Crecimiento

Fase de retardo (lag): las células agotan varios constituyentes esenciales por lo que
necesitan tiempo para sintetizarlos nuevamente. Se produce también por células dañadas o
cuando se transfiere de un medio rico a uno pobre.
Fase exponencial: Influenciada por condiciones ambientales (T y medio de cultivo), las
células más pequeñas y simples tienen mayor capacidad de intercambio de nutrientes y
desechos.
Velocidad de crecimiento específica Tiempo de duplicación (aparición de nueva
gen.)

Velocidad de crecimiento celular Fase de crecimiento exponencial constante

Factores que afectan la velocidad de crecimiento específica


Concentración de sustrato: se modela según la ecuación de monod, utilizada cuando las
concentraciones de los componentes de inhibición de crecimiento son bajos.

Para altas concentraciones de sustrato mayores a la Ks se aproxima mu a mu max, por lo


que el modelo es una expresión de orden cero. Para concentraciones de sustrato menores
a Ks el modelo se vuelve de primer orden.

Ks: constante de afinidad, representa la concentración de sustrato cuando mu es igual a la


mitad de mu max. Entre más pequeño Ks mayor es la afinidad por el sustrato.
Fase estacionaria: no hay aumento o disminución del número de células, equilibrio entre las
células que creen y las que mueren (crecimiento críptico).
Fase de muerte: fase final del crecimiento celular.

Tecnología de Enzimas
Cinética de las Reacciones Enzimáticas
Caracterizada por su alto aumento en la velocidad de reacción y alta especificidad
(catalizacion selectiva de ciertos sustratos).
El catalizador no se consume o produce y no altera la termodinámica de la reacción.

Reacciones de Orden Cero: Una pequeña fracción de moléculas reaccionan y esa fracción
se repone por una fuente más grande. Si se involucran 2 o más reactivos las concentración
de algunos serán mayores a la de los otros. Las reacciones ocurren cuando el número de
moléculas de enzima es limitada en relación a moléculas de sustrato.

Ecuación de Arrhenius
k = Ae−Ea/RT
A = frecuencia
k = constante de velocidad
Ea = Energía de Activación

Perfil de reacción con enzimas

Cinética de Michaelis Menten


Describe la velocidad de formación del producto utilizando la ecuación:
v max [S]
v0 = K M +[S]
Donde Km se refiere a la concentración de soluto cuando v0 = 0.5 v max.
A muy alta concentración de soluto v = v max y a muy baja concentración de soluto v =
ecuación de primer orden.
Importancia de Km
Si Km es alta la unión es débil, si Km es menor la unión es fuerte (eficiencia catalítica)..
Concentración de sustrato a la cual se llenan la mitad de los sitios activos de la enzima.
Concentración de sustrato necesaria para que la catálisis sea significativa.
También mide la fuerza del complejo ES.

Importancia de v max
Representa la velocidad de generación de producto máxima alcanzable, donde toda la
concentración de enzima inicial está presente como ES.
Turnover Number: número de moléculas de sustrato convertidas en producto por una
molécula de enzima, donde la enzima está completamente saturada con sustrato (k cat =
vmax / [E]0).

Mecanismo secuencial
Ordenado: Un sustrato se une a la enzima antes de que un segundo sustrato pueda unirse.
Aleatorio: La unión de sustratos y liberación de productos no siguen un orden definido.
Ping pong: Un sustrato se une, al mismo tiempo, otro se libera, siguiendo ese proceso
múltiples veces.

Inhibidores
Compuestos que disminuyen la velocidad de reacción catalizada por una enzima.
Generalmente, tienen bajo peso molecular y inhiben de manera reversible o permanente.

Regulación de la actividad: se realiza por un mecanismo de retroalimentación, donde el


producto final inhibe la enzima que se presenta en la etapa inicial al tener una secuencia de
reacciones.

Inhibición reversible
Equilibrio entre enzima/inhibidor.
1. Inhibición Competitiva: El sustrato e inhibidor compiten por el mismo sitio activo. Se
debe aumentar [S] en relación a [I]
2. Inhibición No Competitiva: Un inhibidor se une a una enzima en un sitio distinto a la
unión del sustrato. La unión no tienen ningún efecto sobre el sustrato., aunque el
complejo ESI no forma el producto deseado. Puede revertirse con el aumento del
sustrato.
3. Inhibición Anticompetitiva: Inhibidor que no se une a la enzima libre, solo
reversiblemente al complejo ES produciendo un ESI inactivo.

Inhibición por Sustrato


La enzima se combina con el sustrato adicional al necesario formando un complejo ESS
inactivo.

Inhibición irreversible
La inhibición incrementa conforme avanza el tiempo.
No aplica Michaelis Menten, la eficiencia del inhibidor no está relacionada a la constante de
equilibrio, sino que a la velocidad a la que se unen los inhibidores.
Introduccion al Diseno de Reactores.
Tipos de Reactores
Reactor Intermitente
Es sencillo y requiere poco equipo de apoyo, utilizado para estudios experimentales de
cinética, con pequeñas cantidades de material.
Para determinar el tamaño:
1. Encontrar cinetica de reaccion
2. Encontrar variación de volumen
3. Determinar el grado de conversión deseado.
4. Determinar el volumen necesario y el tiempo necesario.

Reactor de Flujo en Estado Estacionario


Complejo en cuanto a operación y requiere gran equipo de apoyo, posee un mejor control
de la calidad de producto y es utilizado industrialmente para grandes cantidades con
velocidades de reacción alta.

Reactor Semi Intermitente


Difícil de analizar aunque posee un buen control de velocidad de reacción.

Espacio Tiempo
Tiempo necesario para tratar un volumen de alimentación igual al volumen del reactor
medido en condiciones normales de operación.

Espacio Velocidad
Cantidad de alimentación que puede tratarse en la unidad de tiempo establecida, medida en
volúmenes del reactor.

Biorreactores - Criterios de Diseño


Recipiente donde un proceso químico se lleva a cabo involucrando organismos o sustancias
bioquímicamente activas derivadas de esos organismos. Proporciona un entorno adecuado
en donde un organismo genera el producto deseado (biomasa celular, metabolitos,
bioconversiones).
Tipo cerrado: los nutrientes se añaden al principio por lo que la velocidad de crecimiento
eventualmente llega a cero debido al agotamiento de nutrientes o acumulacion de
desechos.
Tipo abierto: flujo de nutrientes entrando y el medio fermentando saliendo simultáneamente.
Se requiere un IdC manteniendo la T constante, al igual que un enfriamiento con una
camisa externa o serpentines con agua de refresco.
En un proceso aeróbico se debe controlar la transferencia de oxígeno, se puede ayudar a
transferir con agitación que también ayuda a mezclar nutrientes (homogeneidad).
Considerar los límites de velocidad de agitación debido al consumo de energía y velocidad
de impulsor.

Funciones de un Fermentador
Mantener la concentración de biomasa al máximo.
Capaz de mantener condiciones estériles.
Consumo de energía eficiente
Agitación eficaz.
Eliminación de calor eficiente.
Fuerzas de corte por agitación controladas.
Posea instalaciones de muestreo
Posea instalaciones donde agregar medios de control de espuma o pH.

Construcción del Biorreactor (fermentador)


Resistente a la corrosión.
Materiales no tóxicos, que los componentes no inhiban el cultivo.
Soportar esterilizaciones con vapor.
Puntos de entrada resistentes.
Poseer puestos de inspección del medio ventajosa (transparentes).

Requisitos Necesarios
Excluir entrada de microorganismos contaminantes y contener los deseados.
Volumen del cultivo constante (controlar la espuma).
Mantener el nivel de oxígeno disuelto por encima de niveles de aireación y agitación para
microorganismos aerobios.
Mantener T y pH controlados con volumen total de cultivo bien mezclado.

Criterios básicos para el diseño


Naturaleza de la célula microbiana (vegetal o animal): cinética, TdM y TdC.
Control ambiental y monitoreo del proceso: pH, T y oxígeno disuelto.
Factores de proceso: efectos sobre otras operaciones unitarias , escalamiento y economía.

Fermentadores Aeróbicos
Biorreactor de Burbujas
Recipiente cilíndrico con distribuidor de gas en la parte inferior, el gas forma burbujas que
entran en contacto con el líquido, TdM de una fase a la otra.
Buenas características de TdM y TdC, bajos costos de operación, poco mantenimiento y
falta de piezas móviles.
Involucra grandes caudales de gas (gran diámetro) y alturas elevadas para obtener niveles
de conversión grandes.

Fermentadores Air Lift


El liquido se recircula por diferencia de densidad entre las secciones sin y con gas. Puede
ser interno, externo o loop.
Circuito interno: modificaciones de la columna de burbujas, el aumento del liquido gasificado
se separa del líquido en un cilindro concéntrico.
Circuito externo: las corrientes de flujo ascendente y descendente fluyen en tubos
separados.
Circuito Loop: se recicla el material entre dos tanques de distinto tamaño, mezclando los
materiales y asegurando que el gas se distribuya en el líquido.
Biorreactor de Tanque Agitado (STR)
Más común, aunque no es el mejor. posee deflectores y un agitador rotativo. Se debe
controlar tamaño, ubicación y número de impulsores, permitiendo controlar el tiempo de
mezcla y coeficientes de TdM y TdC.

Componentes:
1. Agitador: aumentar la uniformidad de concentración y T.
2. Suministro de gases
3. Control de espuma: puede danar a las proteínas, añadir antiespumantes.
4. Control de T: remover enfriamiento del medio, calor generado por metabolismo y
color generado por agitación.
5. Control de pH
6. Puestos de muestreo
7. Sistema de limpieza
8. Colector en la línea de descarga.

Precipitación
Obtención de un soluto en solución, en forma de sólido. El objetivo es concentrar el soluto
para reducir volumen.

Solubilidad de las proteínas


Tamaño y Estructura
Las proteínas precipitan porque se vuelven insolubles, la forma natural de la proteína tiene
una estructura que pone en contacto la parte polar para diluirse en agua. La estructura tiene
un a baja energía de Gibbs y se desestabiliza con facilidad

Carga
Aumenta conforme aumenta la carga neta, cambia al variar el pH de la solución. Cuando la
solución tiene carga cero se le conoce como pH isoeléctrico.

Solvente
Hidrofobicidad : Soluciones de alcoholes monovalentes con agua, desnaturalización de las
proteínas. Los alcoholes con cadenas largas están mejor unidas a grupos polares en la
proteÍna debilitando las interacciones hidrofóbicas, produciendo la desnaturalización.
Fuerza iónica: puede solubilizar (salting in) o precipitar (salting out).
Las euglobinas son insolubles en ausencia de sal en su punto isoeléctrico.
Las albuminas, solubles en agua como en altas concentraciones de sal

Modelo de Kirkwood
Describe interacciones entre iones y dipolos para efectos de solubilidad.
Fuerza Iónica

Constante de Salting In y Out

Pasos de la precipitación
1. Mezcla inicial: mezcla requerida para alcanzar homogeneidad luego de la adición del
componente que causa la precipitación
2. Nucleación: generación de partículas de tamaño ultramicroscópico, debe estar saturada
resp
3. Crecimiento por difusión: Limita el crecimiento de partículas hasta 0.1 a 10 micrómetros,
limitando el movimiento del fluido.
4. Crecimiento por movimiento del fluido: después de llegar al tamaño crítico (1 micrometro),
las partículas chocan y se pegan (floculación).
Rompimiento del Precipitado
Las partículas grandes son más susceptibles al rompimiento por colisiones, está depende
de los esfuerzos cortantes y de la concentración de partículas.

Envejecimiento del Precipitado


Las partículas precipitadas llegan a un tamaño estable luego de cierto intervalo de tiempo
(envejecimiento). Número de Camp es la relación entre la fuerza de las partículas y el
producto del esfuerzo cortante y el tiempo de envejecimiento

Distribucion de Tamano de Particula en CSTR


Se define la función de distribución de densidad de la población y tasa de crecimiento.
Integrar para 2 diámetros de partícula conocidos.
Realizar el balance del número de partículas.
Obtener el modelo de crecimiento de partículas precipitadas (Petenate y Glatz)
Determinar la tasa de rotura (ruptura de proteínas)

Métodos de Precipitación
Precipitación isoeléctrica: Se ajusta el pH al punto isoeléctrico de cierta proteína se utiliza
cuando se quiere fraccionar una mezcla de proteína.
Adición de solventes orgánicos: se utiliza alcoholes, acetona o éter.
Adición de sales: se agrega una sal a una solución con proteínas (sulfato, fosfato, citrato).
Adición de polímeros no iónicos: se utiliza dextran o polietilenglicol.

Diseño de Sistemas de Precipitación


Se realizan en reactores Batch (CSTR) o tubulares, considerando los efectos de la cizalla y
su tiempo de exposición a estos.
El tubular tiende a ser homogéneo, mientras que el batch expone la mezcla a varios tipos de
cizallas (mayor estabilidad mecánica).
El Batch es mejor debido a que tiene menor tiempo de residencia, ausencia de partes
mecánicas, flujo uniforme y diseño simple y barato.
Considerar régimen de flujo altos (turbulentos) para evitar la mala mezcla y alta saturación
sin que ocurra ruptura excesiva. Tener una velocidad de adición del agente precipitante
controlada para evitar la formación de coloides o precipitados altamente solvatados.
En el aumento de escala mantener constante la relación Potencia/Volumen, considerando la
velocidad en la punta del impeler (utilizar tabla que compara factores de volumen con
velocidades de impeller).

Filtración
Separar partículas de un soluto en una suspensión fluida de acuerdo al tamaño del soluto,
haciendo pasar el fluido por un medio poroso.

Filtración Convencional: Fluido fluye perpendicular al medio generando una torta que ayuda
como medio filtrante/
Filtración de Flujo Cruzado: el fluido fluye paralelo al medio, minimizando la acumulacion de
solidos.

Principios de la filtración

Medios de Filtración
Tejidos: telas porosas con resistencia química (10um).
Tela metálica: alambres entrelazados de Ni, Cu, Al o acero (5um)
Membranas: Ultrafiltración (0.001 a 0.1 um) o de Microporos (0.1um)
Módulo: herramienta que sostienen y extiende las membranas.

Sedimentacion
Movimiento de partículas o macromoléculas en un campo de inercia (gravedad o
aceleración centrífuga).
Afectada por la fuerza boyante del medio y fuerzas de arrastre.
La velocidad de sedimentación es 0 cuando la densidad de partícula es igual a la del
solvente.

Métodos de sedimentación
Sedimentación en equilibrio: capas de soluciones con densidades menores.
Centrifugación a altas velocidades: crea un soluto estratificado de densidades.
Coeficiente de sedimentación: la velocidad de sedimentación es proporcional al campo de
aceleración al aplicar una fuerza (Dimensional de Svedberg)

Tiempo equivalente: determina tiempo de sedimentación para partículas con propiedades


desconocidas. (multiplicación entre G y t).

Equipos
Centrífuga Tubular: los sólidos se depositan en la pared giratoria mientras el líquido sale por
el extremo opuesto.
Centrífuga de discos: Rotación de conos invertidos concéntricos, si es abierto es continuo,
cerrado es batch.
Ultracentrifugación: Rotación a altas velocidades para determinar pesos moleculares.

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