Laboratorio de Biología

Practica Número °7

“BACTERIAS”

Tecnología en regencia de Farmacia – Primer semestre

Jeiman Alexis Carvajal Velásquez 136104107

Andrey García Pórtela 136104110

Docente. María Clemencia Perilla

UNIVERSIDAD DE LOS LLANOS SEDE BARCELONA

VILLAVICENCIO/META

14/04/2018
INTRODUCCION

Las bacterias Son seres generalmente unicelulares que pertenecen al grupo de los
protistas inferiores. Son células de tamaño variable que habitan abundantemente
en nuestro medio y hasta en nosotros mismo, las diferencias más notorias entre las
bacterias dependen de su forma hay tres tipos morfológicos generales muy distintos
entre sí: la forma esférica o de cocos, la forma alargada o de bacilos y las formas
espirales, de las cuales son subgrupos los vibriones, espirilos y espiroquetes; para
poder estudiar más a fondo las bacterias existen diversas técnicas que permiten
diferenciar las estructuras y el grupo al cual pertenecen, en esta ocasión utilizamos
la tinción de Gram ( cristiam gran 1883) la cual es muy común y efectiva en momento
de estudio de bacterias ya que nos permite hacer una clasificación más concisa
teniendo en cuenta los parámetros de Gram negativa y Gram positiva.
Basándonos en estos conceptos el manejo de bacterias es más sencillo ya que
esta técnica nos permite reconocer las características de la composición química de
los microorganismos. Las bacterias Son seres generalmente unicelulares que
pertenecen al grupo de los protistas inferiores. Son células de tamaño variable que
habitan abundantemente en nuestro medio y hasta en nosotros mismo, las
diferencias más notorias entre las bacterias dependen de su forma hay tres tipos
morfológicos generales muy distintos entre sí: la forma esférica o de cocos, la forma
alargada o de bacilos y las formas espirales, de las cuales son subgrupos los
vibriones, espirilos y espiroquetes; para poder estudiar más a fondo las bacterias
existen diversas técnicas que permiten diferenciar las estructuras y el grupo al cual
pertenecen, en esta ocasión utilizamos la tinción de Gram ( cristiam gran 1883) la
cual es muy común y efectiva en momento de estudio de bacterias ya que nos
permite hacer una clasificación más concisa teniendo en cuenta los parámetros de
Gram negativa y Gram positiva. Basándonos en estos conceptos el manejo de
bacterias es más sencillo ya que esta técnica nos permite reconocer las
características de la composición química de los microorganismos.
OBJETIVOS

 Observar la morfología bacteriana y realizar la tinción de Gram

 Clasificar los grupos bacterianos en Gram positiva, y Gram negativa gracias

a la tinción de Gram

 Conocer más a fondo los grupos de bacterias (cocos, bacilos, espirilos)

CONSULTA PREVIA
¿Establezca un cuadro diferencial entre el Reino Bacteria?
MARCO TEORICO

 Bacterias Gram positivas son aquellas bacterias que se tiñen de azul oscuro
o violeta por la tinción de Gram: de aquí el nombre de "Gram-positivas" o
también "grampositivas".1 Esta característica está íntimamente ligada a la
estructura de la envoltura celular por lo que refleja un tipo natural de
organización bacteriana.

 Bacterias Gram negativas, a aquellas bacterias que no se tiñen de azul

oscuro o violeta por la tinción de Gram, y lo hacen de un color rosado tenue:
de ahí el nombre de "Gram-negativas" o también "gramnegativas".1Esta
característica está íntimamente ligada a la estructura de la envoltura celular,
por lo que refleja un tipo natural de organización bacteriana.

 La tinción de Gram o coloración Gram, es un tipo de tinción diferencial

empleado en microbiología para la visualización de bacterias, sobre todo en
muestras clínicas. Debe su nombre al bacteriólogo danés Christian Gram,
que desarrolló la técnica en 1884. Se utiliza tanto para poder referirse a la
morfología celular bacteriana como para poder realizar una primera
aproximación a la diferenciación bacteriana, considerándose Bacteria Gram
positiva a las bacterias que se visualizan de color violeta y Bacteria Gram
negativa a las que se visualizan de color rosa.
EQUIPOS, MATERIALES Y REACTIVOS

Equipos Materiales Sustancias o

Reactivos

 Solución salina al
0.9%
 Cultivo de
bacterias Gram
positivas y Gram
negativas
 Asa bacteriológica (obtenidas de Yox
 Láminas portaobjetos y Regeneris)
Microscopio Láminas cubreobjetos Solución Lugol de
 Gotero Gram
 Mechero  Violeta de Gram
 Pinzas de madera (Violeta de
Genciana)
 Decolorante de
Gram (solución
 acetona: alcohol)
 Fucsina de Gram
 Aceite de
inmersión
PROCEDIMIENTO

1. En un portaobjetos limpio, coloque una gota de agua y una muestra del cultivo de
bacterias.

2. Conga la muestra a la llama del mechero para fijar las bacterias en la lámina.

3. Cubra el frotis con cristal de violeta por un minuto.

4. Lave al chorro del agua y escurra.

5. Luego cubra el frotis con lugol por un minuto

6. Lave al chorro de agua y escurra.

7. Cubra el frotis con alcohol por 10 segundos y lave inmediatamente.

8. Cubra la placa con fucsina de Gram por un minuto y lave.

9. Agrega una gota de aceita de inmersión y observe en 100x

• Para preparar el frotis de sarro dental de la misma forma del método de Gram.
Cubra la preparación con azul de metileno la solución alcohólica de 1%, dejar actuar
durante 4 minutos, lavar con agua el exceso de colorante, secar al aire y observar
con el objetivo de 100x
AGUA OLODEA
RESULTADOS OBSERVACIONES

Vemos algunas células grades y

también por ahora unas bacterias
4X
pero muy pequeñas, con formas
extrañas.

COCOS GRAM POSITIVOS

10X FORMADOS DE VACILOS
ROJOS
ESTA MUESTRA SE OBSERVA
MEJOR DETALLADAMENTE EN
100X

COCOS GRAM POSITIVOS

40X FORMADOS DE VACILOS
ROJOS
ESTA MUESTRA SE OBSERVA
MEJOR DETALLADAMENTE EN
100X

COCOS GRAM POSITIVOS

100X FORMADOS DE VACILOS

ROJOS
ESTA MUESTRA SE OBSERVA
MEJOR DETALLADAMENTE EN
100X
TOMA DE CULTIVO
RESULTADOS OBSERVACIONES
(CARNE
REPOSADA)

Vemos algunas células grades

y también por ahora unas
4X
bacterias pero muy pequeñas,
con formas extrañas.

COCOS
GRAM POSITIVOS
10X
FORMADOS EN CADENAS
ESTREPTOCOCOS

ESTA MUESTRA SE
OBSERVA MEJOR
DETALLADAMENTE EN 100X
COCOS
GRAM POSITIVOS

40X FORMADOS EN CADENAS

ESTREPTOCOCOS

ESTA MUESTRA SE
OBSERVA MEJOR
DETALLADAMENTE EN 100X

COCOS
GRAM POSITIVOS

100X FORMADOS EN CADENAS

ESTREPTOCOCOS

ESTA MUESTRA SE
OBSERVA MEJOR
DETALLADAMENTE EN 100X
 TOMA DE
RESULTADOS OBSERVACIONES
MUESTRA DE
CUTIVO (AGAR
NUTRITIVO)
Vemos algunas células grades y
también por ahora unas
bacterias pero muy pequeñas,
4X con formas extrañas.

VACILOS GRAM POSOTIVOS

FORMADOS EN CADENAS DE
COCOS
10X
ESTA MUESTRA SE OBSERVA
MEJOR DETALLADAMENTE
EN 100X

VACILOS GRAM POSOTIVOS

FORMADOS EN CADENAS DE
COCOS
40X
ESTA MUESTRA SE OBSERVA
MEJOR DETALLADAMENTE
EN 100X

VACILOS GRAM POSITIVOS

FORMA DE CADENAS COCOS
100X SE OBSERVA MEJOR EN 100X
RESULTADO
CUESTIONARIO

1. ¿Consulte cuál es la función de cada uno de los colorantes utilizados en

la tinción de bacterias?

2. COLORACION DE GRAM: composición, fundamento, utilidad y técnica

de laboratorio. COMPOSICIÖN: Está constituido por: Cristal Violeta:
colorante primario o básico, que se une a la pared celular bacteriana.
(Color azul o violeta).

3. LUGOL: solución de yodo, utilizado como mordiente, el cual facilita la

adhesión del cristal violeta a la pared celular.

4. ALCOHOL ACETONA: decolorante.

5. SAFRANINA o FUCSINA DE GRAM: colorante secundario, que imparte

una coloración de contraste o contracolor (color rojo o rosado).

6. FUNDAMENTO DE LA COLORACION DE GRAM: Un frotis es tratado

con una solución de cristal violeta el cual se une a las paredes celulares
bacterianas, luego de un tratamiento con lugol, algunas bacterias debido
a la naturaleza química de sus paredes celulares, poseen la capacidad
de retener el cristal violeta, aún luego del tratamiento con un decolorante
orgánico (alcohol acetona). Tales bacterias se denominan GRAM
POSITIVAS. Las bacterias GRAM NEGATIVAS presumiblemente debido
a su mayor contenido lipídico en su pared celular, pierden la coloración
primaria del cristal violeta aparecen rojas o rosadas al microscopio,
habiendo fijado la safranina como colorante de contraste a sus paredes
celulares, las GRAM POSITIVAS aparecen al microscopio de color azul
intenso o violeta.

7. UTILIDAD DE LA COLORACION DE GRAM: coloración diferencial,

utilizada para demostrar las propiedades tinto riales de todos los tipos de
bacterias.

2. ¿A nivel de composición química cuál es la diferencia entre la pared celular

de una bacteria Gram negativa y Gram positiva?

 Las bacterias Gram positivas posee una pared celular interna y una pared de
peptidocluno en cambio las bacterias Gram negativas poseen una pared
celular más completa.
 Las bacterias Gram positivas no cuentan con una membrana externa en
cambio las gran negativas tiene membrana externa que forma un saco rígido
alrededor de la bacteria.
 Las bacterias Gram positivas no tienen espacio peri plasmático, en cambio
las Gram negativas tienen espacio peri plasmático entre la superficie externa
de la membrana citoplasmática y la interna de la membrana externa.
 Las bacterias Gram positivas tiene una red de mureína que está bien
desarrollada y puede llegar a tener hasta 40 capas, en cambio las Gram
negativas cuenta solamente con una capa.
 La penicilina mata a la Gram positivas en cambio las Gram negativas no la
mata.
 Las bacterias Gram positivas no contiene LPS en cambio las Gram negativas
contienen LPS.
 Las Gram positivas retienen la tinción azul, en cambio las Gram negativas
quedan decoloradas.

3. Cómo se detecta o qué características presenta a nivel físico una infección

por bacterias en humanos?
Infección de la piel por bacterias o celulitis es una infección común de la
piel causada por bacterias.

LOS SÍNTOMAS DE CELULITIS ABARCAN.

 Fiebre

 Dolor o sensibilidad en el área afectada

 Inflamación o enrojecimiento de la piel que se hace más grande a medida

que la infección se propaga

 Lesión de piel o erupción (mácula) que aparece repentinamente y crece

rápidamente en las primeras 24 horas

 Apariencia de la piel tensa, brillante, “estirada”

 Piel caliente en el área de enrojecimiento

 SIGNOS DE INFECCIÓN.

 Escalofrío, estremecimiento

 Fatiga

 Malestar general

 Mialgias y dolores

 Piel caliente

 Sudoración

LAS BACTERIAS ESTAFILOCOCO Y ESTREPTOCOCO SON LAS

CAUSAS MÁS COMUNES DE CELULITIS.

La piel normal tiene muchos tipos de bacterias que viven en ella. Cuando
hay una ruptura en la piel, estas bacterias pueden causar una infección
cutánea. La piel en el área infectada se tornará roja, caliente, irritada y
dolorosa.

LOS FACTORES DE RIESGO PARA LA CELULITIS SON, ENTRE

OTROS.

 Rupturas o descamación de la piel entre los dedos.

 Antecedentes de enfermedad vascular periférica.
 Lesión o traumatismo con ruptura en la piel (heridas cutáneas).
 Picaduras y mordeduras de insectos, mordeduras de animales o de
personas.
 Úlceras a causa de ciertas enfermedades, como diabetes y enfermedad
vascular.
 Uso de medicamentos corticosteroides o medicamentos que inhiben el
sistema inmunitario.
 Herida de una cirugía reciente.
DISCUSION O ANALISIS
Durante esta práctica, Los resultados obtenidos fueron medianamente satisfactorios
puesto que no encontramos bacilos y la aglomeración de bacterias no permitió ver
con facilidad la estructura de cada uno de los microorganismos presentes en las
muestras estudiadas; aunque la tinción de Gram se llevó de manera correcta fue
muy difícil observar las diferencias entre Gram positivas y Gram negativas debido a
la mala distribución de las mismas.
Por otro lado, los cocos fueron abundantes y en algunos casos observamos algunas
agrupaciones como lo son: diplococos, extractilococos y extrectococus y hasta
colonias; los espirilos fueron encontrados en las muestras del sarro dental. Estos
resultados también nos permiten conocer más a fondo el habitad y el
comportamiento social de las bacterias ya que la mayoría de casos son encontradas
en colonias y en muy pocas ocasiones de manera solitaria. Debido a la tinción de
Gram el movimiento no pudo ser identificado ya que los microorganismos estaban
neutralizados para que fuera más sencillo el estudio de los mismos
CONCLUSIONES

o La tinción de Gram es una técnica fundamental a la hora del estudio de

microorganismos y bacterias.

o Las bacterias se encuentran presentes en la mayoría de compuestos

orgánicos e inorgánicos que abundan en nuestro ecosistema.

o Los cocos, espirilos y bacilos se encuentran con mayor facilidad dentro de

muestras comunes.

o Según el comportamiento frente a la tinción de gran fue posible diferenciar

los grupos de bacterias presentes en el frotis estudiado debido al color que
adquirían en su membrana.
BIBLIOGRAFÍA

Carvajal, P. (19 de Febrero de 2014). CLUB ENSAYOS. Recuperado el 13 de 03 de 2018, de CLUB

ENSAYOS: https://www.clubensayos.com/Ciencia/Informe-De-Laboratorio- 1463099.html
CHAGUENDO, C. M. (2010). www.academia.edu. Obtenido de www.academia.edu:
http://www.academia.edu/13546429/INFORME_LABORATORIO_BIOLOGIA_FUNDA
MENTAL_LABORATORIO_
BACTERIAS_CLAUDIA_MARCELA_FERN%C3%81NDEZ
cruz, m. (23 de Septiembre de 2016). PREZI.com. Obtenido de PREZI.com:
https://prezi.com/uio5lty6pz8s/tecnicas-de-fijacion-y-tincion/