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Departamento de Bioquímica
Métodos de Análisis
Práctica:
Introducción:
Transmitancia:
La transmitancia T de una solución es la fracción de la radiación incidente transmitida por
la solución:
𝐼
𝑇=
𝐼0
𝐼
%𝑇 = 𝑥100
𝐼0
Absorbancia:
𝐼0
𝐴 = −𝑙𝑜𝑔𝑇 = 𝑙𝑜𝑔
𝐼
La mayor parte de los trabajos analíticos se realizan con soluciones de manera que vamos
a desarrollar la relación que existe entre la concentración de la solución y su capacidad de
absorber radicación.
Objetivo:
Conocer y analizar el funcionamiento correcto de un espectrofotómetro.
Mínimos de
transmisión
420 55
430 48
440 45
450 47
460 46
470 43
480 48
490 58
500 59
510 39
520 27
530 30
540 51
550 68
560 58
570 30
580 70
590 4
70
60
50
%T
40
30
20
10
0
350 400 450 500 550 600 650
LONGITUD DE ONDA (nm)
¿Coincidieron los máximos y mínimos con las longitudes de onda informadas por el
fabricante? ¿En qué longitudes de onda no fue así?
Coincidieron la mayoría de los máximos y mínimos de longitud de onda del espectro
teórico, excepto en las longitudes de onda: 440, 450, 500, 570 y 580 nm.
90
80
70
60
%T
50
FIG 2. Espectro de transmitancia de la solución estándar (𝑁𝑖𝑆𝑂4 . 6𝐻2 𝑂 𝐴𝑙 20% )
La exactitud fotométrica del espectrofotómetro es muy buena debido a que nos dio el
mismo valor de %T a la misma longitud de onda, y comparándola con el espectro de
transmitancia teórico de la solución de (𝑁𝑖𝑆𝑂4 . 6𝐻2 𝑂 𝐴𝑙 20%) resulta el mismo valor a la
misma longitud de onda obtenido.
B) PROPORCIONALIDAD FOTOMÉTRICA.
0.2
y = 0.0032x - 1.6161
R² = 0.9742
0.15
Absorbancia
0.1
0.05
0
525 530 535 540 545 550 555 560 565 570 575
Longitud de onda (nm)
Que hay buena proporcionalidad fotométrica debido a que no existen variaciones tan
dispersas entre las absorbancias calculadas y las proporcionadas en el apéndice IV.
C) Luz dispersa
Resultados en la tabla
¿Qué puede concluir a ese respecto en el instrumento que evaluó?
No hay luz dispersa presente debido a que las lecturas no sobrepasan el 3% permitido.
D) Ancho de banda
E) EXACTITUD FOTOMÉTRICA
Existe exactitud fotométrica debido a que el valor obtenido está dentro del 5% de
aceptación el valor obtenido fue de 86% mientras que el esperado era de 84%.
Si la longitud de onda está mal calibrada la exactitud fotométrica se pierde debido a que
nos arrojaría datos que quizá estén por debajo o arriba del 5% de Transmitancia permitido.
El espectrofotómetro tiene exactitud fotométrica debido a que los valores obtenidos a 400
y 500 nm se encuentran dentro del 5% de aceptación los valores esperados eran de 1.50 y
0.06 para 400 y 500 nm respectivamente.
F) INTERVALO DINÁMICO LINAL DE CONCENTRACIÓN.
1 1´ 0 0 0
2 2´ 0.0095 0.04 0.04
3 3´ 0.0285 0.11 0.1
4 4´ 0.0665 0.23 0.22
5 5´ 0.1045 0.35 0.43
6 6´ 0.1425 0.49 0.45
7 7´ 0.152 0.51 0.48
8 8´ 0.171 0.58 0.54
9 9´ 0.1805 0.54 0.51
10 10´ 0.19 0.61 0.61
0.7
y = 3.1078x + 0.0172
R² = 0.9818
0.6
0.5
0.4
A 400
0.3
0.2
0.1
0
0 0.02 0.04 0.06 0.08 0.1 0.12 0.14 0.16 0.18 0.2
Concentración de NiSO4
Preguntas extra
a) Luz extraña
Variaciones de voltaje.
Discusión:
La discusión se fue haciendo conforme se resolvieron las preguntas del manual de Métodos de Análisis. Ya
que se fueron explicando los resultados obtenidos en cada punto desarrollado.Conclusión:
1. Filtro de didimio
Existe exactitud fotométrica
Máximos (λ, nm) 420,490,550 420,450,500,550,580 en el aparato ya que
Mínimos (λ, nm) 400,470,520,600 400,440,470,520,570, coinciden los máx. Y min. De
590 cada uno de los filtros.
2. Solución de
𝑵𝒊𝑺𝑶𝟒 . 𝟔𝑯𝟐𝑶 𝑨𝒍 𝟐𝟎%.
500
Máximos (λ, nm) 380,600 500
Mínimos (λ, nm) 380,600
%T a 400nm (solución de 5 4
𝑁𝑖𝑆𝑂4 . 6𝐻2𝑂 𝐴𝑙 20%.) No hay luz dispersa presente
en el espectrofotómetro
%T a 450nm 0 0
%T a 500nm 0 0
Ancho de banda
% T a 520 nm 87.0%T 86% T El ancho de banda no
presenta alteraciones
Exactitud fotométrica
Bibliografía:
1. Skoog. Principios de Análisis Instrumental. Ed. Mac Graw Hill. 2002. Pp. 182,201.