ACTIVIDAD 1.

RECONOCIMIENTO Y USO DE MATERIAL DE Materia: Laboratorio de Técnicas

LABORATORIO. Microbiológicas

ACTIVIDAD.
RECONOCIMIENTO Y USO DE MATERIAL DE LABORATORIO

OBJETIVO.
Que el alumno reconozca y aprenda a utilizar material para la medición de volumen en el laboratorio.

INTRODUCCION
Existen instrumentos de medición de volumen en los laboratorios de trabajo, los cuales deben
seleccionarse de manera adecuada para obtener resultados confiables en los ensayos que se realizan.
Estos instrumentos son utilizados para la transferencia de muestras, patrones y soluciones estándar
debido a que son materiales volumétricos con cierto grado de exactitud. También existen otros
instrumentos graduados que son utilizados para mediciones no tan exactas.
El manejo de líquidos es una aplicación central en los laboratorios de investigación biológica, química,
biotecnológica y farmacéutica. Al hablar de manejo de líquidos nos referimos a la transferencia de
líquidos de un recipiente a otro.
La habilidad de medir de manera exacta, reproducible y transferir volúmenes pequeños de líquidos son
críticos para obtener resultados útiles.

El uso de cada instrumento depende del ajuste de fábrica que se haya realizado. Existen dos tipos de
marcas que distinguen los ajustes.
“in”: la cantidad de líquido contenida correspondiente al volumen impreso sobre el instrumento, por ej.
Matraces aforados y probetas graduadas.
“ex”: la cantidad de líquido vertida correspondiente al volumen impreso sobre el instrumento, por ej.
Pipetas o buretas.

En las prácticas relacionadas con biotecnología los volúmenes de las soluciones que se necesitan medir
son del orden de microlitros (µL). Para tomar estas cantidades con exactitud y reproducibilidad se
emplean micropipetas, ya sean de volumen fijo o variable. Los errores de medida que se pueden
cometer dependen principalmente del usuario y no de la micropipeta en sí, a menos que esta no esté
bien calibrada.

Materiales Cantidad Observaciones

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Matraz Erlenmeyer de 250 mL 2 Por equipo

Vaso de precipitado de 250 mL 2 Por equipo
Probeta de 250 mL 2 Por equipo
Pipeta de 10 mL 2 Por equipo
Micropipeta 20-200 ul 1 Por equipo
Micropipeta 100-1000 ul 1 Por equipo
Caja de puntas para micropipeta 20- 1 Por equipo
200 ul
Caja de puntas para micropipeta 1 Por equipo
100-1000 ul
Espátula 1 Por equipo
Tubos eppendorf 10 Por equipo
Tubos de ensaye con tapa 2 Por equipo

USO DE LAS MICROPIPETAS

La micropipeta debe de mantenerse siempre en posición vertical durante todo el proceso de pipeteo,
nunca inclinada. También, cuando la micropipeta no se utilice se debe dejar siempre en posición
vertical en el soporte de micropipetas. Nunca la deje horizontalmente encima de la mesa y menos una
vez que tenga líquido succionado.

Cada micropipeta sirve para medir un determinado volumen. Las de volumen fijo miden solamente un
volumen determinado. En las de volumen variable, se puede seleccionar un volumen dentro de un
intervalo de valores determinado. En éstas, no se deben ajustar volúmenes superiores o inferiores a los
que se recomiendan para cada micropipeta.

DESARROLLO EXPERIMENTAL Y TEORICA

Parte I. Uso de micropipetas. La micropipeta se agarra como si se tomara una empuñadura. La parte
superior debe de reposar sobre su dedo índice (Fig 1).

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Figura 1. Posiciones del émbolo durante el uso de micropipetas.

Todas las micropipetas tienen dos topes:

1) Primer tope para tomar el volumen calibrado.

Si antes de tomar la muestra, se lleva hasta el segundo tope, se tomará un volumen mayor al deseado,
un volumen ERRÓNEO. El segundo tope es para sacar de forma más eficiente el volumen establecido.

Tanto la presión como la liberación del émbolo de la micropipeta se debe de realizar lentamente y con
suavidad. Si se realiza bruscamente, se pueden formar burbujas dentro de la punta de la micropipeta,
que alterarían los volúmenes; así mismo se podría ensuciar la parte interna de la micropipeta.

También se pueden formar burbujas o tomar un menor volumen si la punta no está bien ajustada a la
micropipeta.

Procedimientos para medir correctamente un volumen con una micropipeta

1. Seleccionar la micropipeta adecuada para medir el volumen deseado (que esté dentro del intervalo
establecido para la micropipeta).

2. El volumen requerido se fija girando el émbolo. Se debe girar suavemente (evitar estar cambiando
constantemente los volúmenes, para evitar descalibrar las micropipetas).

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3. Colocar una punta desechable en el vástago de la micropipeta; asegurando que esté bien sujeta,
ejerciendo un ligero movimiento de torsión y presionando. Tener cuidado de no presionar mucho
porque esto hace que la punta quede atorada fuertemente dificultando retirarla.

4. Tomar la muestra presionando suavemente el émbolo con el pulgar hasta el primer tope.

5. Introducir la punta de la micropipeta en la muestra no más de 3 mm de la superficie de líquido,

manteniendo la micropipeta en posición vertical.

6. Succionar el líquido, relajando suavemente y controlando la presión con el dedo pulgar, sin permitir
que el émbolo suba por sí solo. Se espera un par de segundos con la punta introducida en el líquido.

7. Retirar la punta de la muestra.

8. Introducir la punta de la micropipeta en el tubo o frasco donde se va a verter, colocando la punta

contra la pared del tubo, sin sumergirla en la solución.

9. Presionar el émbolo lentamente, llevándolo hasta el primer tope, continuando inmediatamente hasta
el segundo tope, para expulsar la totalidad del líquido que está en la punta.

10. Con el émbolo totalmente presionado se retira cuidadosamente la micropipeta, deslizando la punta a
lo largo de la pared del tubo.

11. Llevar el émbolo a la posición inicial, controlando con el dedo (sin permitir que el émbolo suba por
sí solo).
12. Sacar la punta de la micropipeta, presionando el expulsor de puntas o tirando de ella.

En algunos casos se puede usar la misma punta, para homogenizar la mezcla, una vez adicionado el
volumen, se introduce la punta en la mezcla y se baja y sube el embolo repetidamente sin llegar al
primer tope.

El procedimiento completo se esquematiza en la Figura 1.

Trabajo en el laboratorio

Cada equipo realizará lo siguiente:

1. Elegir la micropipeta adecuada para 20, 200 o 1000 μL. Seleccionar el volumen indicado en la tabla
correspondiente y colocar la punta adecuada.

2. Tomarla muestra indicada como se indicó anteriormente.

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3. Transferir el líquido a un tubo Eppendorf, colocando la punta de la micropipeta en la pared interna

del tubo Eppendorf al cual se va a transferir la muestra, depositar la muestra según el procedimiento ya
indicado.

4. Eliminar la punta en un recipiente determinado para este fin, colocando encima del recipiente la
punta y presionando el pistón ubicado en la parte inferior, atrás del pistón de succión. Cada volumen se
hará por triplicado.

Tabla 1. Volúmenes de AGUA a seleccionar para el uso de micropipetas.

1000 μL 200 μL 20 μL
800 180 16
600 160 12
500 120 8
350 100 4
100 50 2
Nota: Repetir los volúmenes mostrados en la tabla 1 pero ahora utilizando algún solvente
(alcohol).
USO DE INSTRUMENTOS VOLUMETRICOS
Los instrumentos de laboratorio han sido desarrollados especialmente para mediciones exactas de
volumen de fluidos. Instrumentos de medición de volumen como pipetas y probetas presentan una
graduación para la medición y para el suministro de líquidos, cuya capacidad está definida como el
volumen de agua que puede suministrar cuando se llenan, ajustan y drenan de acuerdo a su diseño.
Pipetas.
Existen de dos tipos.
1. Graduadas: consistentes en un cilindro con estrechamiento cerca de la punta, sobre la cual está
fijada una escala de graduación.
2. Aforadas: las cuales disponen generalmente de un bulbo en la región central de su cuerpo, con un
solo trazo de graduación.
Recomendaciones de uso de pipetas.
 Debe lavarse muy bien antes de usarse
 Realizar un enjuague (purga) con la solución que se va a transferir.

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 Llenar hasta que el punto más bajo del menisco este sobre la línea.
 Comprobar que no haya burbujas de aire.
 Descargar en posición vertical hasta el vaciado completo.
 No soplar o sacudir el instrumento.

La lectura debe hacerse en el punto más bajo del menisco. Figura 2a

Probetas
Consisten de un cilindro que puede disponer de un solo trazo o de una escala graduada. Se ajustan para
contener y su capacidad se define como el volumen de líquido que pueden contener cuando es llenada
hasta el trazo especificado.

Recomendaciones de uso.
 La lectura se hace en el punto más bajo del menisco. Figura 2b

a) b)
Figura 2. Lectura del menisco en la medición de volumen en a) pipetas y b) probetas.

Trabajo en el laboratorio

Cada equipo realizará lo siguiente:

1. Realice mediciones en los instrumentos que se le proporcionaran como pipetas y probetas.

2. Transfiera el volumen de líquido medido a otros instrumentos como lo son un matraz
erlenmeyer o un vaso de precipitado.
3. ¿Observa diferencias entre los volúmenes que marca el instrumento graduado y el que no lo es?.
Anote sus observaciones.
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REFERENCIAS.
1 CECMED, 2007. Regulación No. 41-07. “Validación de Métodos Analíticos” Witham, H. F., D.
F. Blaydes, and R. M. Devlin., 1971. Experiments in Plant Physiology. Van Nostrand Reinhold
C. New York, USA. 245 p.

VALE PARA LABORATORIO

NÚMERO DE PRÁCTICA: ACTIVIDAD 1

NOMBRE DE LA PRÁCTICA: RECONOCIMIENTO Y USO DE MATERIAL DE
LABORATORIO
FECHA: 08 Y 09 DE FEBRERO DE 2016 NUMERO DE EQUIPOS: 6 (SEIS POR GRUPO)

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MATERIAL POR EQUIPO

Material por equipo. Reactivos
1 Matraz Erlenmeyer de 250 mL
1 Paso de precipitado de 250 mL
1 Probeta de 250 mL
1 Pipeta de vidrio de 5 mL
1 Micropipeta de 20-200 ul
1 Micropipeta de 100-1000 ul
1 Caja de puntas para micropipeta de 20-200 ul (amarillas)
1 Caja de puntas para micropipeta de 100-1000 ul (azules)
10 Tubos eppendorf de 1.5 mL
2 Tubos de ensaye con o sin tapa que sean iguales.
1 Gradilla para tubos de ensaye
Equipo

Número de equipo Nombre del alumno(a) Firma del alumno(a)

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