Universidad Nacional José Faustino Sánchez Carrión

Facultad De Ingeniería Agrarias Industrias Alimentarias y Ambiental

Escuela Profesional De Ingeniería Ambiental

Asignatura: Microbiología Ambiental

Docente: Huayna Dueñas Luis Alberto

Tema: Análisis microbiológico de tierra

Integrantes:

Pacheco Santillán Derian André

Pastor Huamán Cinthya

Rosales Bautista Robinson

Trujillo rosales Evelin Thalía

Zamudio Chávez juan Lupesco

Ciclo: VI

HUACHO-201
Análisis microbiológico de tierra

ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO DE TIERRA

1. OBJETIVOS

A través del experimento realizado se pretender identificar los diversos

microorganismos que se existe en los diferentes tipos de tierra.

Conocer físicamente la biodiversidad microbiológica existente en suelos degradados, ricos

en diferentes tipos de microorganismos.

Identificar los tipos de microorganismos ya sea bacteria hongos micro algas protozoarios

2. FUNDAMENTOS

Los microorganismos del suelo contribuyen al mantenimiento de la fertilidad química,

física y biológica del suelo. Transforman nutrientes inorgánicos, que de otra forma no

pueden ser absorbidos por la planta; además favorecen la descomposición y mineralización

de la materia orgánica.

Bacterias: constituyen el grupo más diverso de microorganismos del suelo, hay benéficos

y fitopatógenos. Los actinomicetos pertenecen a este grupo.

Hongos: los hay de vida libre y otros como las micorrizas que viven en forma simbiótica

en las raíces de plantas. Muchos hongos son importantes en los procesos de

descomposición de la materia orgánica. Además de los hongos benéficos, también se

pueden aislar del suelo los hongos fitopatógenos. Las levaduras pertenecen a este grupo.

Protozoarios: requieren de oxígeno por lo cual se encuentran cerca de la superficie del

suelo. Se nutren de algas y bacterias del suelo.

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Micro algas: se encuentran cerca de la superficie del suelo. Son fuente de nutrientes para

protozoarios, hongos, lombrices de tierra y nematodos.

Los organismos del suelo aportan una serie de servicios fundamentales para la

sostenibilidad de todos los ecosistemas. Son el principal agente del ciclo de los

nutrientes, regulan la dinámica de la materia orgánica del suelo, la retención del carbono y

la emisión de gases de efecto invernadero, modifican la estructura material del suelo y los

regímenes del agua, mejorando la cantidad y eficacia de la adquisición de nutrientes de la

vegetación y la salud de las plantas. Estos servicios no sólo son decisivos para el

funcionamiento de los ecosistemas naturales, sino que constituyen un importante recurso

para la gestión sostenible de los sistemas agrícolas.

Existe una gran diversidad de microorganismos que viven en el suelo. El número y tipos

de microorganismos presentes en el suelo dependen de diversos factores ambientales como

son los nutrientes, humedad, aireación, temperatura, pH, prácticas agrícolas, etc. Existen

del orden de varios miles de millones de bacterias por gramo de suelo. La mayor parte son

heterótrofos, siendo comunes los bacilos esporulados, los actinomicetos que son los

responsables del olor a tierra mojada, y en la rizosfera (región donde el suelo y las raíces

de las plantas entran en contacto) especies de los géneros Rhizobium y Pseudomonas.

Ciclos biogeoquímicos

El planeta Tierra actúa como un sistema cerrado en el que las cantidades de materia

permanecen constantes. Sin embargo, sí existen continuos cambios en el estado químico

de la materia produciéndose formas que van desde un simple compuesto químico a

compuestos complejos construidos a partir de esos elementos. Algunas formas de vida,

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especialmente las plantas y muchos microorganismos, usan compuestos inorgánicos como

nutrientes. Los animales requieren compuestos orgánicos más complejos para su nutrición.

La vida sobre la Tierra depende del ciclo de los elementos químicos que va desde su estado

elemental pasando a compuesto inorgánico y de ahí a compuesto orgánico para volver a su

estado elemental. Los microorganismos son esenciales en estas transformaciones químicas.

Bacteria fijadora de nitrógeno

En estado libre pueden fijar nitrógeno en aerobiosis (nitrobacterias) o en anaerobiosis

(Clostridium, Klebsiella). Pero las cantidades de nitrógeno fijadas por estos organismos

son, en general, poco importantes. Son insuficientes para permitir el desarrollo de una

agricultura. Se estima que estas fijaciones son del orden de 10 a 20 Kg N/ha/año. La

excepción son los Azotobacter si son potenciados con métodos de cultivo adecuados.

Ambos generan amoniaco como primer producto final estable. La importancia agrícola

relativa de las bacterias fijadoras libres no es mucha, las producciones son débiles, debido

a que para realizar esta reacción precisan mucha energía y utilizan la energía proveniente

de materia orgánica. Se calcula que se precisan 50 átomos de "carbono orgánico" para fijar

un átomo de nitrógeno. Esta fijación demanda un contenido en materia orgánica muy

elevado, que sólo existe en los bosques y no en zonas agrícolas. Hay otra fijación mucho

más eficaz que la libre, es la fijación simbiótica. La más común es la simbiosis con plantas

leguminosas. Esta fijación se hace mediante bacterias del tipo Rhizobium que viven en los

nódulos radiculares de las leguminosas. Cuando los pelos absorbentes de una raíz entran

en contacto con una de estas bacterias, los pelos se ensortijan y las paredes de la célula se

disuelven bajo la influencia de las enzimas formando un nódulo. Una vez dentro del nódulo

la bacteria obtiene los nutrientes necesarios (compuestos del carbono) y el oxígeno de la

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planta; a su vez la planta recibe compuestos nitrogenados producidos por la bacteria a partir

del nitrógeno gaseoso de la atmósfera del suelo. Este proceso es llamado fijación simbiótica

del nitrógeno.

La importancia de los microrganismos en el suelo

Una de las razones principales de la existencia y la importancia de los microorganismos en el suelo consiste

en verlos como co-responsables del suministro de elementos o compuestos inorgánicos nutricionales,

orientados particularmente hacia las plantas superiores (de modo de poder cumplir con su ciclo

de vida a través del crecimiento y desarrollo), así como su función también específica de descomponer

y mineralizar la materia orgánica que de una u otra forma se incorpora al suelo.

La acción microbiana del suelo depende, entre otros factores, de la temperatura, aireación

y condiciones de humedad, y de la competencia y antagonismos que se establecen entre los

propios grupos de microorganismos. Las bacterias son el grupo más importante de

organismos del suelo, en el cual, en condiciones favorables, alcanzan números

extraordinariamente elevados. Existen bacterias aeróbicas estrictas, anaerobias estrictas y

facultativas. Las denominadas facultativas, constituyen el grupo más importante y actúan

en presencia o no de oxígeno. De las bacterias fijadoras de nitrógeno, una (Rhizobium)

vive en simbiosis con leguminosas, fijando el nitrógeno en nódulos de las raíces de estas.

Otras no-simbióticas, obtienen el sustrato del aire y la energía de la descomposición de

residuos vegetales. Las bacterias son, en general, bastante exigentes en calcio y prosperan

especialmente en suelos de reacción levemente ácida a levemente alcalina. Los hongos

pueden alcanzar en el suelo una masa total superior a la de las bacterias. Son probablemente

todos heterótrofos y en ciertas condiciones parecen ser de los organismos del suelo más

aptos para descomponer el sustrato.

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3. MATERIALES

Hisopo Jeringa

Suero fisiológico Placas Petri con agares

Placa Petri

Tubos de ensayo Cuchara

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Mechero Lamina porta objeto

Palillos mondadientes Microscopio

Gotero Coloración Gram

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Balanza Agua destilada

Incubadora microbiológica Agua oxigenada

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4. PROCEDIMIENTO

1. Primeramente debemos de tener todos nuestros materiales al alcance y ya

esterilizados.

2. Ya al tener todos los materiales a mano primeramente aremos la pesa de nuestra

muestra de tierra (tierra superficial de huerto), pesaremos solamente 1 gramo de

tierra.

3. Seguidamente realizamos con nuestra jeringa de 10 ml la absorción de suero

fisiológico una cantidad de 9 ml seguidamente pasamos a echar los 9 ml al tubo de

ensayo ya esterilizados, Luego pasamos a echar la tierra pesada (1 g), a nuestro tubo

de ensayo que ya contiene el suero fisiológico; después de esto lo agitamos por un

momento suavemente, este tubo de ensayo es de 10−1.

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4. Pasamos a realizar en el otro tubo de ensayo que contenga 9 ml de suero

fisiológico.

5. Ahora pasaremos a agregar 1 ml del tubo de ensayo 10−1 al tubo de ensayo que

contiene solamente el suero fisiológico, ya al agregar este 1 ml pasara a ser el

tubo de ensayo 10−2.

Agregamos 1ml de 𝟏𝟎−𝟏 al otro Ambos tubos de 𝟏𝟎−𝟐 , 𝟏𝟎−𝟏 .

tubo de ensayo.

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6. Luego de realizar todo estos pasos vamos a sembrar en los agares Mueller de

Hinton y agar sabouraud; esta siembra lo realizaremos a todo momento con el

mechero encendido, con el hisopo estéril tomamos la muestra 10−1 y lo vamos a

sembrar en todo el agar sabouraud; seguidamente sembraremos de igual manera la

muestra 10−2 en el agar sabouraud.

7. Luego pasamos a sembrar ambas muestras (10−1 ; 10−2 ), en el agar Mueller de

Hinton este se sembrara limitad del agar pa cada muestra ya que contábamos con

un solo agar de Mueller de Hinton.

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8. Luego de acabar lo llevamos a la incubadora que estará 24- 72 horas a una

temperatura de 30°C

9. Después de transcurrir el tiempo establecido procederemos a leer las siembras de

cada uno de los agares y veremos las colonias que han crecido.

10. Luego de esto pasamos a utilizar la porta objetos (2) en cual en ellas le agregamos

una gota de agua oxigenada a cada porta objeto y seguidamente le añadimos y

esparcimos las muestras humedad y secas.

11. Seguidamente pasamos a realizar la tinción de Gram, aremos dos frotis de muestra

seca y húmeda; tomamos dos porta objeto y le agregamos una gota de agua

destilada y luego de uno de los agares (10−1 ) tomamos una muestra seca y húmeda

y esto lo esparcimos en los porta objetos que ya contienen una gota de agua

destilada, la muestra seca va en uno de los porta objeto y muestra húmeda va en el

otro porta objeto.

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12. Seguidamente pasamos a realizar los pasos para la tinción Gram; primeramente

fijamos, después de estos pasamos a la zona de coloración y primeramente

echamos el cristal violeta y esperamos 1 minuto para lavarlo con agua destilada,

enseguida le agregamos lugol-yodo y también esperamos un minuto y pasamos a

lavarlo con agua destilada, le agregamos alcohol acetona esperamos por un minuto

y lo lavamos nuevamente, y finalmente lo agregamos la coloración de contraste

safranina y esperamos 30 segundos y lo lavamos con agua destilada y nuevamente

lo vamos a fijar en el mechero.

Aplicación de cristal violeta Aplicación de lugol

Aplicación de alcohol acetona Aplicación de safranina

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13. Esto pasos anteriores se hacen para ambos frotices de muestra seca y húmeda,

luego pasamos a ver en el microscopio con nuestras respectivas frotices si son

levaduras o bacterias.

5. RESULTADOS

1. En la lectura de las placa con agar sabouraud 10−1 vemos dos tipos de colonia

diferente pero vemos dos tipos de colonias unas húmedas medias blanquecinas y

otras que son secas, y en el agar sabouraud de 10−2 vemos que la cantidad de

gérmenes disminuye por que la dilución 10−1 lo hemos disminuye 10 veces menos.

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2. En la placa Petri con agar Mueller de Hinton crece de todo también hay dos tipos

de colonias húmedas y colonias medias deformes irregular

3. En los porta objetos con agua oxigenada podemos observar catalasas positivas

características de ellas es que al esparcirlas observamos espumas.

4. Vemos que en las muestras de tierra que también ay presencia de microorganismos

entonces hacemos una coloración de Gram para ver si son gran positivos o Gram

negativos, o que forma tienen si tienen forma de bacterias o forma de levaduras.

5. Luego de realizar coloración de Gram llevamos al microscopio ambas frotices y

vemos que son bacilos Gram positivos grandes.

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6. CONCLUSIONES

 Mediante los resultados obtenidos de nuestra práctica determinamos que en ellas

haya una gran variedad de microrganismos.

 En esta práctica estudiamos y vemos lo microorganismos más abundantes en el

suelo, y por diferentes métodos analizamos que tipos de microrganismos son.

 Con los resultados obtenidos luego de realizar la coloración de Gram observamos

que en nuestra muestra de tierra contenía una Gram cantidad de microorganismos

de bacterias Gram positivas grandes.

 Los microrganismos hallados en la tierra pueden depender de distintos factores que

pueden ser beneficiosos o críticos para su supervivencia

 Los microorganismos del suelo contribuyen al mantenimiento de la fertilidad

química, física y biológica del suelo. Transforman nutrientes inorgánicos, que de

otra forma no pueden ser absorbidos por la planta.

 En este trabajo me di cuenta de la gran cantidad de bacterias, que uno sin darse

cuenta viven alrededor de nosotros

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7. BIBLIOGRAFIA

 Haynes, W.C., Wickerham, L.J. y Hesseltine, C.W. (1955), Maintenance of

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 Vela, G.R. y Rosenthal, S. (1972). The effect of peptone on azotobacter

morfology. J. Bacteriol. 111, 260-266.

 Internet Google,Altavista ,Terra,(microbiología del suelo)

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