Practica Nº8

DETERMINACION DE PORCENTAJE EN PROTEÍNAS

METODO DE BIURET

I. INTRODUCCION
Las proteínas forman con el agua soluciones coloidales por su gran tamaño, formándose
coágulos al ser calentados a temperaturas superiores a 70°C al ser tratadas con
soluciones salinas, ácidos, alcohol entre otras.

La coagulación de las proteínas es un proceso irreversible y se debe a su

desnaturalización por los agentes indicados que al actuar sobre la proteína la
desordenan por la destrucción de sus estructuras secundaria y terciaria Entre las
reacciones coloreadas específicas de las proteínas, que sirven por lo tanto para su
identificación, descarta la reacción de biuret.

Esta reacción la producen los péptidos y las proteínas, pero no los aminoácidos ya que
se debe a la presencia del enlace peptídico CO-NH que se destruye al liberarse los
aminoácidos.

El reactivo de Biuret lleva sulfato de Cobre (II) en medio alcalino y el cobre en un medio
fuertemente alcalino, se coordina con los enlaces peptídicos formando un complejo de
color violeta (Biuret) cuya intensidad de color depende de la concentración de proteínas.

II. OBJETIVOS
Determinar proteínas de harina de papa por el método Biuret.
Determinar el porcentaje de proteína de la papa

III. FUNDAMENTO TEORICO

3.1.- FUNDAMENTO DEL METODO BIURET
El nombre de la reacción procede del compuesto coloreado formado por la condensación
de dos moléculas de urea con eliminación de amoniaco. Si una solución fuertemente
alcalina de sulfato cúprico (CuSO4) se añade a una solución de proteína se forma un
complejo entre el ión cúprico y los enlaces peptídicos, con aparición de una coloración
violeta-púrpura, que presenta un máximo de absorción a 540 nm.
 La reacción o prueba de biuret es un método que detecta la presencia de compuestos
de dos o más enlaces peptídicos y por lo tanto sirve para todas las proteínas o péptidos
de cadena corta.

La reacción de Biuret puede utilizarse para determinar la cantidad de proteína soluble en

una reacción, es el reactivo de biuret que al estar en contacto con otra solución cambia
de color.
El espectrofotómetro se puede utilizar para medir la intensidad del color que se produjo,
mientras más cantidad de proteína esté presente en la solución más oscuro es el color.

IV. MATERIALES Y METODOS

4.1 MATERIA PRIMA

Harina de Papa ojos azules

4.2 EQUIPOS Y MATERIALES

Espectrofotometro
Agitadores
Pipetas
Tubos de Ensayo

4.2 REACTIVOS
NaCl 0,15 M
NaOH
Sulfato de Cobre
Reactivo de Biuret
Albúmina de suero Bovina
V. PREPARACION DE MUESTRAS

 Tomar 10 gr de frijol y moler hasta una granulometría 60 mesh. Reservar una

porción para proteína por el método de Lowry 1/20
 En un tubo de ensayo mezclar agua destilada con NaCl de modo a que llegue a
diluirse.
 Mezclar los 10 gr de papa molida con agua destilada.
 Juntar las reacciones y formar uno solo (aparte con el reactivo Biuret).

PROCEDIMIENTO DEL MÉTODO DE BIURET.

A partir del extracto salino obtenido, se forma alícuotas de 0,1 ml (muestra) y 0,2 ml
(muestra 2). Seguidamente completar a 1,0 ml con agua destilada, adicionar 4,0 ml
del reactivo de biuret y realizar la lectura después de 30 min a 540 nm.
Del mismo modo se preparan una curva padrón a partir del suero de albúmina bovina
en la concentración de 0,1 g/10 ml.
1. Solución Padrón de Albúmina Bovina.
 Pesar 1000 mg de suero albúmina bovina y 0,1 ml de NaOH 1N
 Disolver con agua destilada y completar para 100 ml (sin mucha agitación)
 Esta concentración equivale a 0,1 g/10 ml ó 1,0 g/100 ml
2. Preparación del reactivo de Biuret
SOLUCION A
 Pesar 1,5 g de Sulfato de Cobre (CuSo4.5H2O)
 6,0 g de tartrato de sodio y potasio
 500 ml de agua destilada
SOLUCION B
 300 ml de NaOH al 10% (30 gr NaOH/300ml de agua destilada
 Agregar 1,0 g Kl
MEZCLA
 Mezclar ambas soluciones
 Completar para un litro en balón volumétrico
 VI. CALCULOS Y RESULTADOS

Numero Padrón Concentrac. H2O Reactivo Absorbancia Fc

Fc =
Tubos de SAB(ml) (mg) (ml) Biuret(ml) (540nm) C/A

1 0,1 1,0 0,9 4,0 0,185

2 0,2 2,0 8,0 4,0 0,240

3 0,3 3,0 7,0 4,0 0,295

4 0,4 4,0 6,0 4,0 0,350

5 0,5 5,0 5,0 4,0 0,410

6 0,6 6,0 4,0 4,0 0,452

7 0,7 7,0 3,0 4,0 0,500

8 0,8 8,0 2,0 4,0 0,540

9 0,9 9,0 1,0 4,0 0,592

10 1,0 10,0 -- 4,0 0,650

Blanco - -- -- 4,0

Muestra 1 0,1 4,0 0,200

Muestra 2 0,2 4,0 0,530

El grafico nos da un valor a partir de una absorbancia de 0,53 de 0,2 mg de

concentración, a partir de ahí realizamos los siguientes cálculos:
Las diluciones fueron:

10g / 100 mL

78 mL

0,2 mL = A = 0.210
Hallamos el promedio de nuestras 3 muestras:

PESO DE MUESTRA FINAL HALLADO: 1,7335 g

Si en 50 ml 1000ml

1,7 34ml

PROMEDIO FINAL DE LA MESCLA (BIURET + MUESTRA)

M=0,12585

Aplicamos la ecuación de la recta con los siguientes datos:

a = 0,1476 mg. b = 0,050 y= 0,13

y=a+bx

x= 0,352
0,352 0,2ml

x 78ml

x= 137,28 mg
0,352mg 78ml

x 100ml

x=0,45 mg CONVERTIDO A GRAMOS 0,045g

0,045g 10g
x 100g
x= 0,45% de PROTEINA
 VII. CONCLUSIONES

Concluimos esta práctica habiendo hallado el porcentaje de proteína de este tipo de papa (ojos
azules) de la región de Tacna, habiendo hallado un 0,45% de Proteína en esta practica
realizada.