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FUNDACIÓN UNIVERSITARIA UNINAVARRA

FACULTAD DE INGENIERÍAS
PROGRAMA DE INGENIERÍA AMBIENTAL
CURSO DE MICROBIOLOGÍA
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PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVOS

DOCENTE
ALCIDES POLANIA PATIÑO

ESTUDIANTES
DANIELA YAÑEZ GORDO
HAROLD JHUSSEPPE URBANO
LUISA PAOLA ESPINOSA LEÓN

NEIVA (HUILA)
ABRIL-19-2016
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RESUMEN

Los medios de cultivos son un aspecto importante para la microbiología ya que

sirven como soluciones de nutrientes para cultivar microrganismo en el laboratorio.
Para los cultivos de microorganismos se requieren nutrientes específicos como son
los macro nutrientes y micro nutriente teniendo en cuenta que los macro nutrientes
(carbono, nitrógeno, oxígeno e hidrogeno...) y los micro nutrientes (boro, cromo,
cobalto, cobre), en este caso se utilizaron medios de cultivos comerciales como
Agar MacConkey y Agar Sabouraud (Glucosa) caracterizados por ser medios
definidos al conocer su composición química exacta. (Brock, et al, 2009)

El agar MacConkey es un medio selectivo diferencial utilizado para el aislamiento y

diferenciación de bacilos gram negativo fermentadores y no fermentadores de
lactosa. Se utiliza con frecuencia para el aislamiento de coliformes;
(MacConkey.PDF), En cambio en sabouraud es utilizado para el cultivo de mohos y
levaduras. La preparación de medio de cultivos permite reconocer diferente medio
existente teniendo en cuenta las aspectos básicos de nutrición para el crecimiento
existo de los microrganismo.

OBJETIVOS

 Reconocer los diferentes medios de cultivos existentes para el crecimiento

de microorganismos, aplicando los conceptos básicos de nutrición y
preparación de los mismos.
 Desarrollar en los estudiantes competencias en los puntos clave que deben
tenerse en cuenta antes, durante y después de la preparación un medio de
cultivo.
 Prepara algunos medios de cultivo , líquidos o sólidos , siguiendo las
instrucciones proporcionadas

PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO

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MARCO TEÓRICO

Los microorganismos son los seres más abundantes de la tierra, pueden vivir en
condiciones extremas de pH, temperatura y tensión de oxígeno, colonizando una
amplia diversidad de nichos ecológicos. Entre los requerimientos más importantes
para su desarrollo están el carbono, el oxígeno, nitrógeno, dióxido de carbono e
hidrógeno. Muchas bacterias sin embargo necesitan del aporte extra de factores de
crecimiento específicos en forma de suero, sangre y extracto de levadura entre
otros. (López, 2006)

Dentro de los medios de cultivos podemos encontrar según su tipo de origen, es

decir aquellos que son preparados a partir de sustancias naturales de origen animal
o vegetal cuya composición química no se conoce, pero también existen medios
que contienen una composición química definida cualitativa y cuantitativamente,
(Brock, et al, 2009).

Los medios de cultivos también se pueden clasificar Según Brock, et al, 2012, por
medio de sus propósitos de uso, Medios de enriquecimiento que es aquel cultivo en
medio líquido que resulte en un incremento en el número de un tipo dado de
microorganismo en relación con el número de otros tipos de microorganismos que
puedan estar en el inóculo, puede contener sustancias que favorezcan el
crecimiento del microorganismo o que inhiban el crecimiento de los otros tipos de
microorganismos presentes.

En cambio los medios selectivos son básicamente iguales a los de enriquecimiento,

se diferencian por ser medios sólidos y están diseñados para el aislamiento de
microorganismos específicos.

MÉTODOS Y MATERIALES
Para la preparación de los medios de cultivos solidos se utilizó un mechero casero,
cajas petri , una estufa eléctrica , agua destilada , Beaker , papel de azúcar

PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO

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comercial , tubos de ensayos, termómetro, balanza analítica, agar MacConkey, agar

sabouarud y vidro de reloj.

Inicialmente procedió a mediar 250 ml de agua destilada, la cual fue colocada en la

estufa eléctrica hasta llevarla a su punto de ebullición a una temperatura de 100 °C,
durante este proceso se pesó 12.5 g de agar MacConkey que es lo recomendado
por la casa comercial para adicionarlo y homogenizarlo en los 250 ml de agua
destilada.

Para el agar sabouraud glucosa se adiciono 16.25 g en 250 ml de agua destilada

con una temperatura aproximadamente de 100 °C.

Una vez reposado los medios de cultivos se procedió a verter en 5 cajas petri agar
MacConkey y 4 tubos de ensayos de los cuales 2 fueron inclinados. En cuanto el
agar sabouraud también se realizó el mismo procedimiento. (5 cajas Petri y 4 tubos
de ensayos de los cuales 2 fueron inclinados.) (Figura 1)

FLUJOGRAMA
PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO

Medir 250 ml de agua destilada, y llevarla al punto

de ebullición (± 100°C)

Pesar el agar según las indicaciones de

la casa comercial.

Agar MacConkey Agar Sabouraud

12.5 g 16.25 g

Homogenizar el agar con el agua

destilada.

Se verte la solución en cajas petri y tubos de

ensayos previamente esterilizados con el
mechero.

Una vez gelificado se procedió a embalar en el papel de azúcar todos los medios y
se conservaron en la nevera.

Figura 1. Flujograma sobre la preparación de medios de cultivos.

PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO

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RESULTADOS Y DISCUSIÓN

El agar es un elemento solidificante muy empleado para la preparación de medios

de cultivos, (González, et al, 2012), sin embargo encontrar las proporciones para el
desarrollo adecuado de los microorganismos se puede ver afectado por una serie
de factores de gran importancia y que, en algunos casos, son ajenos por completo
al propio medio, (González, et al, 2012).

La preparación de los 10 medios de cultivos fue exitosa encontrando la gelificación

de todos los medios de cultivo, al seguir las recomendaciones del fabricante y las
instrucciones de la guía (Figura 2), ya que las casas comerciales previamente
poseen conocimiento de aquellos factores que pueden influenciar en el debido
procedimiento arrojando resultados positivos como negativos.

(A) (B)

(C) (D)

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(E) (F)

(G) (H)

Figura 2. Medios de cultivos gelificados siguiendo las recomendaciones del fabricante. (A) Medios
de cultivos agar MacCONKEY y agar Saboraud marca merck. (B) Dilución del agar Saboraud con
agua destilada a ± 100°c. (C) Dilución del agar MacCONKEY con agua destilada a ± 100°c. (D)
Cultivo de los medios evitando la contaminación cruzada con el mechero casero. (E) verter el medio
en las cajas Petri y tubos. (F) (G) Gelificación de todos los medios de cultivos. (H) Embalaje de los
medios de cultivos en papel deazucar comercial para evitar contaminación cruzada .

Todos los medios de cultivos deben poseer unos constituyentes como agar,
extractos, peptonas, soluciones amortiguadoras, agentes reductores entre otros, al
revisar esta composición química del agar macconkey y saboraud encontramos
diferencias lo cual hace que cada uno posea características diferentes. (Tabla 1).

Tabla 1. Composición química y proporciones de uso de los agares Macconkey y Saboraud.

(Información tomada de la casa comercial Merck.)

AGAR MACCONKEY
Fórmula (en gramos por litro) Instrucciones

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Peptona 17.0
Pluripeptona 3.0
Lactosa 10.0 Suspender 50 g del polvo por litro de agua destilada.
Mezcla de sales biliares 1.5 Reposar 5 minutos y mezclar hasta uniformar.
Calentar suavemente y hervir 1 a 2 minutos hasta
Cloruro de sodio 5.0 disolver. Esterilizar en autoclave a 121°C durante 15
Agar 13.5 minutos.
Rojo neutro 0.03
Cristal violeta 0.001
pH final: 7.1 ± 0.2
AGAR SABORAUD
Fórmula (en gramos por litro) Instrucciones
Pluripeptona 10.0 Suspender 65 g del polvo por litro de agua destilada.
Reposar 5 minutos y mezclar hasta uniformar.
Glucosa 40.0 Calentar agitando frecuentemente y hervir 1 minuto
hasta disolver. Distribuir y esterilizar 15 minutos a
Cloranfenicol 0.05 118-121°C. Mantener en lugar fresco, pues la
exposición al calor hidroliza los componentes.
Agar 15.0 Distribuir en placas o en tubos con cierre hermético
pH final: 5.6 ± 0.2

Según la composición química de estos medios de cultivos hace que se desarrollen

microorganismos específicos o no, el agar MacConkey es un medio selectivo
diferencial utilizado para el aislamiento y diferenciación de bacilos gram negativo
fermentadores y no fermentadores de lactosa; Se utiliza con frecuencia para el
aislamiento de coliformes. (pág. web, Medios ricos y enriquecidos)

Al contrario del agar saboraud que es un medio Selectivo pero No es diferencial,

utilizado para el aislamiento de hongos patógenos dermatofitos. (pág. web, Medios
ricos y enriquecidos).

CONCLUSIONES

 Los medios de cultivos están compuestos de macronutrientes y micronutrientes

los cuales son usados por las células para su crecimiento.
 Hay medios de cultivos que son selectivos y diferencial como lo es el
MacConkey, y otros que son selectivos mas no diferencial como lo es el agar
saboraud.

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 Para la preparación de los medios de cultivos se deben tener en cuenta que los
procedimientos deben ser asépticos para evitar la contaminación cruzada.
 Apartar de la composición química de los medios de cultivos podemos
determinar cuáles microorganismos podemos encontrar y cuales no.

PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO

CUETIONARIO
COMPOSICION DEL
MEDIO CULTIVO MICROORGANISMO FORMA DE PREPARACION INTERPRETACION DEL MEDIO
MEDIO
Suspender 46 g del polvo en 1 litro de agua
destilada. Mezclar vigorosamente y llevar a
Peptona El medio de cultivo contiene
ebullición. Enfriar a 45°C o menos. Agregar
Sales biliares peptona que provee los
Bacterias que contienen 20 ml de solución iodurada. Mezclar y
Carbonato de calcio nutrientes necesarios para el
la enzima tetrationato distribuir 10 ml por tubo, en tubos estériles.
Caldo tetrationato Tiosulfato de sodio desarrollo bacteriano, y
reductasa, como ser la No debe calentarse luego de agregar la
Iodo carbonato de sodio que
Salmonella spp. solución iodada. El medio base puede
Ioduro de potasio neutraliza y absorbe
mantenerse a 4°C, dura varios meses, pero
Agua metabolitos tóxicos. REF 1
una vez agregada la solución iodada debe
usarse en el mismo día.
Suspender 52,3 g del medio en un l de agua
destilada. Mezclar bien y calentar agitando
Peptona
continuamente. Hervir durante un minuto o
bacteriológica
hasta que el medio se disuelva por
Fosfato Disodico Agar Bismuto Sulfito es un
S. typhi completo. Dejar que el medio se enfríe a
Indicador bismuto medio altamente selectivo,
45ºC (muy importante) y sin dejar de agitar
Otras Salmonellas sulfito recomendado para aislamiento
Agar bismuto sulfito verter en placas de Petri. El color del medio
Shigella spp Sulfato Ferroso de Salmonella spp,
preparado es blanco opaco con tinte verde.
E. coli Extracto de Carne particularmente Salmonella
El medio preparado en placa debe
Verde Brillante thyphi, en heces. REF 2
conservarse entre 8-15°C. El medio
Dextrosa
deshidratado debe ser homogéneo, libre de
Agar Bacteriológico
floculos y de color beige claro. Si hay algún
cambio físico no utilizar el medio.
Este medio de cultivo es
Suspender 60 g del medio deshidratado en
selectivo y diferencial debido
940ml de agua destilada. Dejar en reposo 5
al telurito de potasio y al
P. mirabilis a 10 minutos. Calentar agitando
cloruro de litio, los cuales
Agar baird parker S. aureus frecuentemente y hervir durante 1 minuto.
inhiben el desarrollo de la flora
S. epidermidis Distribuir y esterilizar en autoclave dejar
acompañante. La yema de
enfriar a 45°-50°C y agregar 50 ml de la
huevo permite demostrar la
emulsión de yema de huevo y 10ml de la
actividad lecitinásica. REF 3
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solución de telurito. Homogeneizar y

distribuir en cajas de Petri.
Triptosa
Cloruro de sodio
El contenido de laurilsulfato
Sorbitol
inhibe en gran medida el
Triptofano
crecimiento de bacterias gram
fosfato di-hidrogeno
positivas. La identificación
potasio sulfato de
simultanea de coliformes
sodio sal
totales y E. coli se hace posible
Bromo 4 Cloro 3
Suspender 17 g en 1l de agua pura, por la adición del sustrato
E. coli indolyl Beta D-
Caldo LMX - Fluorocult calentar hasta disolver completamente. cromógeno 5-bromo-4-cloro-3-
Coliformes totales galactopiranosida
Llevar al autoclave. indolil-b-D-galactopiranosido
(X-GAL),
(X-GAL), el cual es escindido
4 Metil umbeliferil –
por coliformes y produce un
B-D-glucoronide
viraje de color del caldo de
(MUG),
cultivo a verde azulado. Esta
1 isopropil B-D-1-
coloración indica la presencia
tiogalactoriranoside
de coliformes totales. REF 4
(IPTG),
Agar
Peptonas Disuelva 26.5 g en 1L de agua destilada
Cloruro de sodio estéril, coloque la cantidad de medio de
Dihidrogeno de cultivo en un vaso de 100 mL al cual le va
Medio de Cultivo Selectivo que
fosfato agregando agua y con la varilla de vidrio lo
promueve el crecimiento de
E. coli Disodio de va mezclando, esta solución la transfiere al
microorganismos específicos,
Citrobacter freundii hidrogeno balón hasta disolver todo el medio de
Agar chromocult al tiempo que inhibe, total o
Enterococcus faecalis fosfato cultivo, déjelo 10 minuto en reposo Coloque
parcialmente, el crecimiento
Coliformes totales piruvato de sodio este balón en una plancha eléctrica con la
de otros microorganismos.
tryptophan temperatura en medio, siga Agitando hasta
REF5
Agar-agar que el medio de cultivo este disuelto
Sorbitol completamente, es decir que se observe
Tergitol transparente.
Aspergillus niger Extracto Disolver 47 gramos de medio en 1 litro de
Caldo BHI (Brain Heart
Candida albicans corazón‑cerebro agua bidestilada. Calentar hasta ebullición,
Infusion) Bacillus subtilis Peptona agitando, para su total homogeneización.

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Staphylococcus aureus pancreát.gelatina Repartir en tubos o frascos y esterilizar en

Pseudomonas Cloruro sódico autoclave a 121 ºC durante 15 minutos. No
aeruginosa Fosfato disódico sobrecalentar, para evitar el oscurecimiento
Glucosa y caramelización del medio.
Agar-Agar
Medio universalmente
empleado para la
diferenciación de
enterobacterias, en base a la
Extracto de carne fermentación de glucosa,
Pluripeptona Suspender 62,5 g del polvo por litro de agua lactosa, sacarosa y a la
Cloruro de sodio producción de ácido
destilada. Mezclar bien y calentar con
E. coli Lactosa sulfhídrico. Por fermentación
agitación frecuente, hervir 1 o 2 minutos
K. pneumoniae Sacarosa de azúcares, se producen
Agar TSI (Triple sugar iron) P. mirabilis Glucosa hasta disolución total. Llenar hasta la ácidos, que se detectan por
S. typhimurium Sulfato de hierro y tercera parte de los tubos de ensayo. medio del indicador rojo de
S. enteritidis amonio Esterilizar a 121°C por 15 minutos. Enfriar fenol, el cual vira al color
Tiosulfato de sodio en pico de flauta profundo. amarillo en medio ácido. El
Rojo de fenol tiosulfato de sodio se reduce a
Agar sulfuro de hidrógeno el que
reacciona luego con una sal de
hierro proporcionando el típico
sulfuro de hierro de color
negro. REF 6
Peptona de gelatina 1- Decarboxilación de la lisina:
Extracto de levadura -Prueba Positiva: Pico
Suspender 35 g del medio deshidratado en
Glucosa violeta/fondo violeta.
un litro de agua destilada. Dejar embeber
Lisina -Prueba Negativa: Pico
Salmonella typhimurium unos 15 minutos. Calentar cuidadosamente,
Citrato de hierro y violeta/fondo amarillo.
Salmonella enteritidis agitando con frecuencia y hervir durante un
Agar LIA (Lysine Iron Agar) amonio 2-Desaminación de la lisina:
Citrobacter freundii minuto hasta la disolución completa.
Tiosulfato de sodio Pico rojizo/fondo amarillo.
Edwarsiella spp Distribuir y esterilizar a 121°C durante 15
Púrpura de Esto sucede con cepas del
minutos. Enfriar en pico de flauta dejando
bromocresol género Proteus, Providencia y
un fondo vertical apto para la punción.
Agar alguna cepas de Morganella
spp. REF 7

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3-Producción de ácido
sulfhídrico:
-Prueba positiva:
Ennegrecimiento del medio
(especialmente en el límite del
pico y fondo) REF 8
Proteosa peptona
Extracto de levadura
Sales biliares
Lactosa Suspender 76 g del medio deshidratado en
Shigella flexneri Este es un medio ideal para el
Sacarosa un litro de agua destilada. Dejar reposar de
Salmonella typhimurium aislamiento selectivo de
Salicina 10 a 15 minutos. Calentar y hervir hasta
Agar enterico HEKTOEN Proteus mirabilis Salmonella y Shigella spp., a
Cloruro de sodio lograr una disolución completa. NO
Escherichia coli partir de heces y alimentos.
Tiosulfato de sodio ESTERILIZAR EN AUTOCLAVE. Enfriar a 45°C
Klebsiella pneumoniae REF 9
Citrato de hierro y y distribuir en cajas de Petri.
amonio
Agar
Fucsina ácida
Este medio es utilizado para el
Peptona Suspender 36 g del polvo en un litro de agua
scherichia coli aislamiento selectivo de
Lactosa destilada. Reposar 5 minutos; mezclar,
Klebsiella pneumoniae bacilos Gram negativos de
Sacarosa calentando a ebullición durante 1 o 2
Agar EMB (Eosin Methylene-blue Proteus mirabilis rápido desarrollo y escasas
Fosfato dipotásico minutos hasta su disolución. Esterilizar en
Lactose) Enterococcus faecalis exigencias nutricionales.
Agar autoclave a no más de 121°C durante 15
Shigella flexneri Permite el desarrollo de todas
Eosina minutos. Enfriar a 45°C y distribuir agitando
Salmonella typhimurium las especies de la familia
Azul de metileno suavemente.
Enterobacteriaceae. REF 10
REFERENCIAS ELABORACION TABLA.
1. REF 1 http://britanialab.com.ar/esp/productos/b02/tetrationatocaldo.htm
2. REF 2 http://www.condalab.com/uploads/media/1011__AGAR_BISMUTO_SULFITO_REv_0_Abril_2010_01.pdf
3. REF 3http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/bairdparker.htm
4. REF 4http://www.mibius.de/out/oxbaseshop/html/0/images/wysiwigpro/Fluorocult_LMX_Broth_modif_110620_engl.pdf
5. REF 5http://www.amco-instruments.com/index_files/pdf/chromocult-coliform.pdf
6. REF 6http://www.medioscultivo.com/brain-heart-infusion-agar/
7. REF 7http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/tsiagar.htm
8. REF 8http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/lisinahierroagar.htm
9. REF 9http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/hektoen.htm
10. REF 10http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/embagar.htm

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BIBLIOGRAFIA
1. Michael T. Madigan; John M. Martinko, Paul V. Dunlap; David P. Clark.
(2009). Brock. Biología de los microorganismos; PEARSON EDUCACIÓN,
S.A., ISBN: 978-84-7829-136-6. 1296 paginas.
2. MacConkey pdf, página web:
http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedraMicro/ma
cconkey.pdf
3. Maria Concepción Casado González, Gertrudis Torrico Cabezas, María
Medina Anguita. 2012. Medios de cultivo en un laboratorio de microbiología.
42 pag.
Página web: https://libroslaboratorio.files.wordpress.com/2012/09/medios-
de-cultivo-en-un-laboratorio-de-microbiologc3ada.pdf

4. http://www.mastgrp.com/IFUS/IFU328_SPA.pdf
5. Tabla (http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/sabouraudgluagar.htm
Tabla (http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/maconkeyagar.htm

6. Página web: http://asignatura.us.es/mbclinica/docs/recursos/34/medios-de-

cultivo.pdf, visitada el 16-04-2016.